黑果腺肋花楸有效成分提取工藝研究

王雪松 張素敏 隋韶奕 李珂

摘要：黑果腺肋花楸果實兼具營養價值和保健功能。采用乙醇回流提取法提取黑果腺肋花楸有效成分，以總黃酮含量為考察指標，通過正交試驗優化工藝參數。結果表明：黑果腺肋花楸果實有效成分最佳提取工藝為加10倍量的65%乙醇，回流提取2次，每次1.0 h。

關鍵詞：黑果腺肋花楸;有效成分;總黃酮;提取工藝;優化

中圖分類號：TS255.3? ? 文獻標識碼：A? ? 文章編號：1674-1161（2020）05-0049-03

黑果腺肋花楸俗稱不老莓，為多年生薔薇科灌木，其果實為黑色漿果，營養極為豐富，含多種蛋白質、碳水化合物、維生素等營養成分，同時含有黃酮、多酚、多糖等功能性成分，具有抗氧化、抗疲勞、抗衰老、抗癌、消炎止痛等功效。黑果腺肋花楸中脂溶性成分為其有效成分，以總黃酮含量為考察指標。有效提取總黃酮是開發黑果腺肋花楸產品的關鍵工藝。本課題采用乙醇回流提取法，通過正交試驗研究黑果腺肋花楸果實有效成分的最佳提取工藝，旨在為黑果腺肋花楸產品工業生產提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黑果腺肋花楸：遼寧嶺秀山礦泉飲品有限公司。蘆丁標準品：中國藥品生物制品檢定所，批號20100206;乙醇：北京化工廠;硝酸鋁：中國惠世生化試劑有限公司;亞硝酸鈉：國藥集團化學試劑有限公司;氫氧化鈉：北京化工廠。

1.2 儀器設備

電熱恒溫水浴鍋：北京科偉永鑫實驗儀器設備廠;分析天平：德國賽多利斯集團;超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司;DZF-6050型真空干燥箱：上海一恒科技有限公司;DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱：上海精宏實驗設備有限公司;RE-52AA型旋轉蒸發器：上海亞榮生化儀器廠;UV-2550型紫外可見分光光度計：日本島津公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 分光光度法測定乙醇提取物中總黃酮含量 1） 標準品溶液的制備。取蘆丁標準品約2.060 mg，精密稱定，置于10 mL量瓶中，加入適量乙醇，超聲處理使其溶解，放冷，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成0.206 mg/mL的蘆丁標準品溶液。2） 供試品溶液的制備。將黑果腺肋花楸干果粉碎后取樣品0.030 g，置于25 mL量瓶中，加入濃度為50%的乙醇溶液25 mL，超聲處理使其溶解，放冷，過濾，收集續濾液。3） 最大吸收波長的確定。配制蘆丁標準品溶液，以相應試劑作空白，在400～700 nm波長范圍內進行掃描。掃描圖譜如圖1所示，對照品溶液在505 nm波長處有最大吸收峰。4） 供試品溶液的測定。精密移取供試品溶液4 mL置于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，搖勻，加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加入10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，再加入氫氧化鈉試液5 mL，加去離子水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應試劑作空白，在505 nm波長處測定吸光度值。

1.3.2 正交試驗設計 以預試驗結果為基礎，選擇乙醇濃度（A）、加醇量（B）、提取時間（C）、提取次數（D）為考察因素，以總黃酮含量為考察指標，進行L9（34）正交試驗，因素水平設計見表1。按表1中設計條件進行乙醇回流提取，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.22～1.25（60 ℃）的稠膏。

2 結果與分析

2.1 乙醇提取物中總黃酮含量分析

2.1.1 線性關系結果 分別精密量取蘆丁標準品溶液2，3，4，5，6 mL，置于25 mL量瓶中，以相應試劑作空白，在波長505 nm處測定吸光度值，以總黃酮濃度為橫坐標（X），吸光度為縱坐標（Y），繪制標準曲線（如圖2所示），求得回歸方程為Y=0.011 3X-0.004 0，相關系數r=0.999 6，總黃酮濃度在24.336～56.784

μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.1.2 中間精密度試驗 由不同時間、不同人員利用不同儀器檢測供試品溶液。分別取兩批平行樣品3份，制備供試品溶液，進行測定，結果見表2。

由表2可知：RSD為1.57%，表明儀器精密度良好。

2.1.3 重復性試驗 取同一批樣品6份，制備供試品溶液，進行測定，結果見表3。

由表3可知：RSD為0.84%，表明含量測定重復性良好。

2.1.4 穩定性試驗 取供試品溶液在室溫下分別放置0，10，20，30，40，50 min，進行測定，結果見表4。

由表4可知：RSD為1.55%，表明供試品溶液至少在50 min內穩定。

2.1.5 回收率試驗 精密吸取已知總黃酮含量的供試品溶液6份，分別精密加入0.085 mg蘆丁對照品溶液，進行測定，結果見表5。

由表5可知：平均回收率為100.19%，表明此方法可行。

2.2 正交試驗結果

黑果腺肋花楸有效成分提取正交試驗結果見表6，方差分析結果見表7。

由表6和表7可知：以總黃酮含量為考察指標，各因素對乙醇回流提取工藝的影響順序為提取次數>乙醇濃度>加醇倍量>提取時間，其中乙醇濃度和提取次數的影響有顯著性差異。綜合考慮選用常規方案，最佳工藝為A2B2C1D2，即：加10倍量的65%乙醇，回流提取2次，每次1.0 h。

2.3 驗證試驗結果

按照正交試驗結果優選出的最佳工藝條件A2B2C1D2進行重復性試驗，結果見表8。

由表8可知：RSD為1.96%，表明該工藝穩定可行。

3 結論

試驗結果表明：影響乙醇回流提取工藝的各因素作用順序為提取次數>乙醇濃度>加醇倍量>提取時間，其中乙醇濃度和提取次數的影響有顯著性差異;通過對總黃酮含量的測定，確定最佳提取工藝為A2B2C1D2，即加10倍量的65%乙醇，回流提取2次，每次1.0 h;驗證試驗得到RSD為1.96%，說明該工藝簡便、易行、穩定。有效成分提取工藝優化結果可為黑果腺肋花楸的功能性研究與應用提供參考。

參考文獻

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