Ro52抗體與其他肌炎抗體共陽性的相關性研究

鄭藝明，郝洪軍，劉怡琳，郭 晶，趙亞雯，張 巍，袁 云

(北京大學第一醫院神經內科，北京 100034)

Ro52抗體屬于肌炎相關性抗體，是炎癥性肌病患者的常見抗體之一，也常見于干燥綜合征、系統性紅斑狼瘡、系統性硬化以及自身免疫性肝炎等其他自身免疫性疾病[1-3]。Ro52蛋白相對分子質量為52×103，含有一個鋅指結構域、B-box基序以及N端的卷曲螺旋(coiled-coil)結構，屬于三結構域(tripartite motif-containing, TRIM)蛋白家族成員之一，又稱為TRIM21。Ro52具有泛素蛋白連接酶E3的作用，其抗體的具體致病機制尚不明確[4]。目前Ro52抗體的檢測方法主要有酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)和線性免疫印跡檢測法(line-blot immunoassay，LIA)，而后者具有較高的敏感性及特異性[5]。

Ro52抗體可以和肌炎特異性抗體同時出現，包括抗合成酶抗體、Mi-2以及抗信號識別顆粒(singnal recognition particle, SRP)抗體等，與炎癥性肌病患者的肺間質纖維化及其嚴重程度可能有關[1]。既往研究發現，Ro52抗體在炎性肌病患者中的出現率約為28.6%(26.3%～31.2%)，且各種類型炎癥性肌病之間并無明顯差異[1-2]。Jo-1抗體陽性患者比Jo-1抗體陰性患者合并Ro52抗體的陽性率更高[3, 6-8]，而是否所有抗合成酶抗體都與Ro52抗體共陽性率高、Ro52抗體共陽性是否與肌炎抗體滴度有關等尚不明確。本研究通過回顧性分析1 509例臨床疑診為炎癥性肌病患者的肌炎抗體檢查結果，進一步探索Ro52抗體同其他肌炎抗體共陽性的相關規律。

1 資料與方法

1.1 研究對象

研究納入自2010年1月至2016年12月臨床疑診為炎癥性肌病、在北京大學第一醫院神經免疫室行肌炎抗體檢查的1 509例患者，其中男性720例，女性789例(男女比例1 ∶1.1)，平均年齡(43.3±19.9)歲(1～90歲)。

1.2 抗體檢查方法

采用商業化的LIA方法測定血清中的11種肌炎IgG抗體(德國歐蒙生物科技有限公司)，包括7種肌炎特異性抗體[組氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)、蘇氨酰-tRNA合成酶(PL-7)、丙氨酰-tRNA合成酶(PL-12)、甘氨酰-tRNA合成酶(EJ)、異亮氨酰-tRNA合成酶(OJ)、SRP以及Mi-2抗體]以及4種肌炎相關性抗體[抗多發性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl 100、PM-Scl 75)、Ku抗體以及Ro52抗體]。按商品說明書操作，將檢測試劑膜條經過預處理、血清孵育、用酶標記的二抗孵育以及酶底物顯色，最后通過EUROLineScan軟件掃描記錄譜帶強度(band intensity)。譜帶強度與免疫印跡反應線性條帶的灰度值相關，按照既往研究結果，譜帶強度大于10代表結果陽性[5, 9]。

1.3 統計學分析

采用Excel軟件錄入原始數據，用SPSS 17.0以及Graph Pad PRISM軟件進行統計分析及作圖。計數資料以頻數(百分比)表示，卡方檢驗用于比較不同肌炎抗體陽性組合并出現Ro52抗體的陽性率之間的差異，獨立樣本組間t檢驗用于比較合并Ro52抗體與不合并Ro52抗體兩組之間肌炎抗體譜帶強度之間的差異，Pearson相關性分析用于分析Ro52抗體譜帶強度同其他肌炎抗體之間譜帶強度之間的相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

1 509例臨床疑診為炎癥性肌病患者的血清11種肌炎抗體檢查結果發現，肌炎抗體總的陽性率為32.6%(492/1 509例)，Ro52抗體為本組患者最常見的肌炎抗體，陽性率為18.3%(276/1 509例)，抗SRP抗體則為肌炎抗體中第二常見、肌炎特異性抗體中最常見的抗體，陽性率為 9.3%(141/1 509例)，見圖1。

表1顯示，276例Ro52抗體陽性的患者中有143例(51.8%)合并其他肌炎抗體，其中最常合并SRP抗體(52例，18.8%)，其次為Jo-1抗體(36例，13.0%)。在其他肌炎抗體陽性的患者中，除OJ抗體最常合并出現PM-Scl 75抗體以外，最常合并出現的肌炎抗體均為Ro52抗體，共陽性率最高出現于EJ抗體陽性的患者中(80.0%，12/15例)、最低出現于PM-Scl 75抗體陽性的患者中(30.4%，31/102例)。在抗合成酶抗體(包括Jo-1、EJ、OJ、PL-7及PL-12抗體)陽性患者中，Ro52抗體的共陽性率顯著高于非抗合成酶抗體(包括SRP、Mi-2、Ku、PM-Scl 75、PM-Scl 100抗體)陽性組[57.3% (75/131例)vs. 35.2% (119/338例)，χ2=18.916,P<0.001]。在各個抗合成酶抗體陽性組中，Ro52抗體共陽性率均高于非抗合成酶抗體組，但OJ抗體陽性組和PL-7抗體陽性組與非抗合成酶抗體組相比差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 肌炎抗體之間共陽性的頻數及頻率Table 1 The frequency of co-positive of myositis antibodies n (%)

3 討論

本研究對1 509例臨床疑診為炎癥性肌病患者的血清11種肌炎抗體檢查結果進行了回顧性研究，分析了Ro52抗體和其他肌炎抗體共陽性的相關規律，證實Jo-1抗體陽性的患者常合并出現Ro52抗體，共陽性率高達59%。既往本中心曾報道16例Jo-1綜合征患者的臨床病理表現，發現 31.2%的患者合并Ro52抗體，而既往文獻報道Jo-1抗體合并Ro52抗體的比例為40%～72%[3, 7, 10-12]，共陽性率的不同可能與患者入組標準以及檢測方法不同有關。本組患者抗合成酶抗體陽性者合并Ro52抗體的比例為 57.3%，顯著高于非抗合成酶抗體組(34.9%)，尤其在EJ抗體組，Ro52抗體共陽性率高達80.0%。國外文獻報道，EJ、OJ、PL-7以及PL-12等抗體合并Ro52抗體的比例為33%～100%[7, 12]，提示該現象并非Jo-1抗體獨有，可能是所有抗合成酶抗體陽性患者的共同特點。

Ro52同其他TRIM家族蛋白一樣，具有泛素蛋白酶E3的活性和功能，其作用底物有干擾素調節因子3、5、7、8，提示可能因此調節干擾素1以及細胞因子的信號通路，導致免疫系統異常。此外，Ro52還作為胞漿內免疫球蛋白Fc段受體參與免疫反應，以及與細胞凋亡和調節細胞氧化應激等有關，但Ro52抗體的具體致病機制尚不明確[2]?？购铣擅敢约癛o52并無骨骼肌組織特異性，雖同為胞質內抗體但并無直接聯系[8]。

Ro52抗體同其他肌炎抗體共陽性的機制目前也尚不明確，可以肯定的是Ro52抗體共陽性并不是肌炎抗體間的交叉反應造成的假象[3, 8]。Ro52抗體最常與抗合成酶抗體共陽性，提示兩種類型的抗體可能在免疫反應的某個途徑中同時受累。既往研究多以是否合并Ro52抗體的定性研究為主，本研究采用LIA法，用譜帶強度來分析，雖精確性欠佳，但譜帶強度基本能反映抗體滴度[9]。本研究發現，合并Ro52抗體組肌炎抗體譜帶的強度更高，且SPR抗體譜帶強度與Ro52抗體譜帶強度呈顯著正相關，提示Ro52抗體的共陽性可能與抗體滴度有關，可能對Ro52抗體共陽性機制提供研究線索。既往研究也發現，Ro52抗體高滴度的患者病情更重、進展更快[13]，佐證了抗體滴度在發病機制中的作用。

本研究因納入所有行肌炎抗體檢查的臨床疑診為炎癥性肌病的患者，故樣本量較大，但因多為門診患者，沒有詳盡的臨床資料輔助分析，未能進一步明確這些患者的最終診斷以及合并Ro52抗體的臨床意義，是本研究的不足。

既往Ro52抗體和Ro60抗體并稱為SS-A/Ro抗體，隨后的研究發現Ro52抗體和Ro60(SS-A)抗體為相互獨立的不同抗體，具有不同的臨床意義。Ro52抗體比Ro60(SS-A)抗體更常見于系統性硬化以及炎癥性肌病的患者[2, 14-16]。本組疑診為炎癥性肌病的患者有 18.3%出現Ro52抗體，為最常檢測出的肌炎抗體。以往有文獻綜述報道，在明確診斷為炎癥性肌病的患者中，Ro52抗體的陽性率更高，為28.6%(26.3%～31.2%，374/1 306例)[2]。既往研究發現，合并Ro52抗體與否與患者的年齡、性別以及是否有吞咽困難等無關，而出現Ro52抗體的患者可能更容易合并技工手、雷諾現象、關節炎、惡性腫瘤以及間質性肺病等[10, 17-18]。此外，合并高滴度Ro52抗體的Jo-1綜合征患者常對環磷酰胺、環孢霉素以及硫唑嘌呤等傳統免疫抑制劑耐藥，而利妥昔單抗治療有效[10,13]。

本研究發現，除抗合成酶抗體外，SRP抗體、Mi抗體等肌炎特異性抗體合并Ro52抗體陽性率均在30%以上，而這些抗體與Ro52抗體共陽性的患者臨床表型以及對藥物治療是否有差異尚有待進一步研究。

綜上，本研究進一步證實包括Jo-1抗體在內的抗合成酶抗體陽性患者最常合并Ro52抗體，其他非抗合成酶抗體陽性的患者(如SRP抗體陽性患者)也常合并出現Ro52抗體，是否合并Ro52抗體可能與肌炎抗體滴度有關，具體機制尚不明確。