韓 雪, 曾慶鴻, 牛敏敏, 常凡群,孔 嬌, 楊麗麗, 宋智琴, 劉 海, 吳明開*
(1.貴州省農業科學院 現代中藥材研究所/貴州省農作物品種資源研究所, 貴州 貴陽 550006; 2.安順學院, 貴州 安順 561000; 3.貴州省農業科技發展中心, 貴州 貴陽 550006; 4.貴州省農業生物技術重點實驗室, 貴州 貴陽 550006)
白及(Bletillastriata)為傳統名貴中藥材,歷代本草以及《中國藥典》均有收錄[1-3],具有收斂止血,養肺生津的功效?,F代醫學表明,白及還具有消腫生肌功效,用于內外出血諸證及癰腫、燙傷、手足皸裂等[4-8]。一直以來白及依賴野生資源,在大肆采挖后野生資源稀缺,而貴州省作為白及的道地產區,近幾年白及種植面積達6 000余hm2,占全國種植面積的70%以上。貴州省各地均適合種植白及,種植面積廣,因此黔產白及具有很高的研究價值。
硫酸苯酚法作為多糖的常用方法,經常用于中藥中多糖成分含量測定[9]。多糖成分一直以來被認為是白及的主要有效成分[10-12],可為白及質量評價提供理論依據,對貴州省內不同產地的白及間多糖成分差異研究,揭示其差別,為鮮品白及的質量控制評價提供理論依據。
1.1.1 白及 白及塊莖由國家地理標志保護產品“安龍白及”種子經組培快繁、大棚馴化獲得白及馬鞍型馴化苗,2017年進行大田移栽于貴州義龍新區龍廣鎮、安龍縣、紅花崗區、施秉縣、普安縣、平塘縣,安徽省樅陽縣,2020年7月采集以上各基地的白及塊莖。
1.1.2 儀器 HP8453型紫外分光光度計,數顯恒溫水浴鍋 (上海梅香儀器有限公司)。
1.1.3 試藥 葡萄糖標準品(批號為P-012-140730)購自中國食品藥品檢定研究院,苯酚、硫酸均為分析純,超純水為自制。
1.2.1 樣品的制備 將100 g白及切碎至大小均勻的顆粒,隨機取2份,每份取2 g,加60 mL純水,水浴90℃回流2 h后補足損失液體,取20 mL提取液,加20 mL無水乙醇,離心后取白色的沉淀,用純水溶解后定容至100 mL,即為供試品溶液。取供試品1.0 mL,平行3份,分別加入5%苯酚溶液1.0 mL,震蕩混勻后各加濃硫酸6.0 mL,迅速震蕩混勻,于室溫放置30 min后測定490 nm處吸光度。
1.2.2 標準品的制備 將葡萄糖標準品置于105℃的干燥箱中干燥至恒重,待冷卻后用分析天平稱取葡萄糖標準品10 mg,將其置于100 mL容量瓶中,加蒸餾水溶解稀釋至刻度線,充分振搖,搖勻后即得。
1.2.3 標準溶液的制備 分別取標準品溶液0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL葡萄糖標準溶液,分別加入純水1.0 mL、0.9 mL、0.8 mL、0.7 mL、0.6 mL、0.5 mL、0.4 mL、0.3 mL后,再各加5%苯酚溶液1.0 mL,震蕩混勻后各加濃硫酸6.0 mL,迅速震蕩混勻,于室溫放置30 min后在490 nm處測定吸光度。
所得數據分別以標準溶液濃度和吸光度為橫坐標和縱坐標,得到標準曲線方程為y=12.512x+0.001 72,r=0.998 299(圖1)。
通過供試品的吸光度,得到不同產地鮮品白及多糖的含量,其中貴州安龍白及的多糖含量最高,達23.20%;安徽省樅陽縣白及次之,為21.65%;而貴州普安縣(19.29%)、平塘縣(17.08%)、紅花崗區(15.84%)、義龍新區龍廣鎮(12.23%)的白及均高于貴州施秉縣白及(11.70%)。
貴州不同產地鮮品白及的多糖含量差異較大,其中安龍白及的多糖含量最高,達23.20%;最低的為施秉白及,僅11.70%。白及的多糖含量與不同的采收時間、生長年限、產地處理方式的關系有待深入研究,揭示白及中多糖的含量變化規律及其藥效關系。該研究結果為鮮品白及的質量控制提供了理論依據。