四川攀枝花地區人群珠蛋白生成障礙性貧血基因突變類型分析

吳雪梅，何元虎，張利軍

(攀枝花市婦幼保健院檢驗科，四川攀枝花 617000)

珠蛋白生成障礙性貧血是一組遺傳性溶血性疾病，是珠蛋白基因突變而導致一條或多條珠蛋白肽鏈的合成障礙或結構異常，形成異常的血紅蛋白結構引起。根據合成障礙的肽鏈不同，將其主要分為α-珠蛋白生成障礙性貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血，兩者均屬于常染色體隱性遺傳。本病廣泛分布于世界許多地區，東南亞為高發區之一。我國廣東、廣西、海南、四川多見[1-4]。為更好地了解攀枝花地區珠蛋白生成障礙性貧血基因的遺傳學特點，以提供遺傳咨詢，降低出生缺陷，本研究對2018年3月～2020年5月的受檢樣本進行了基因分析，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年3月～2020年5月來我院受檢的2 704例疑似珠蛋白生成障礙性貧血患者作為研究對象，年齡1～60歲，其中男性455例，女性2 249例，所有患者均簽訂知情同意書。

1.2 儀器與試劑 儀器為杭州博日科技有限公司的TC-96/G/H(b)C 基因擴增儀和廣東凱普生物科技股份有限公司的HB-2012A 醫用核酸分子雜交儀。試劑為潮州凱普生物化學有限公司的血液基因組DNA 提取試劑盒（離心柱型）和α-，β-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測試劑盒。

1.3 方法 取2ml EDTA 抗凝全血，通過破裂細胞膜、核膜以釋放DNA，采用生物素標記的引物同時對α 珠蛋白基因缺失、基因突變區域和β 珠蛋白基因突變區域進行特異性擴增，將擴增產物與標記不同缺失和突變類型珠蛋白生成障礙性貧血探針的尼龍膜在導流雜交儀上進行導流雜交，然后通過化學顯色對結果進行判讀。本檢測可檢測常見的3種缺失型α-珠蛋白生成障礙性貧血（--SEA，-α3.7和-α4.2）、3種突變型α-珠蛋白生成障礙性貧血（CS，QS，WS）及17個位點的19種突變型β-珠蛋白生成障礙性貧血（CD41-42，CD43，IVS-Ⅱ-654，CD17，CD14-15，-28，-29，CD71-72，βE，IVS- Ⅰ-1，CD27-28，IVS- Ⅰ-5，CAP，Int，CD31，-30，-32）[5-6]，以上檢測位點約占中國人群珠蛋白生成障礙性貧血基因突變的98%。DNA 提取、PCR 反應及導流雜交嚴格按照說明書進行操作及結果判讀[5]。

1.4 統計學分析 采用Excel 2003 進行數據錄入，樣本中陽性檢出例數（n）采用直接計數法，攜帶率和構成比采用百分比（%）表示[7]。采用SPSS軟件對數據進行統計學分析，采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義[8]。

2 結果

2.1 基本情況 在2 704例受檢樣本中，確診患者534例，總攜帶率為19.75%。其中α-珠蛋白生成障礙性貧血患者314例，攜帶率為11.61%（314/2 704），占比58.80%（314/534）；β-珠蛋白生成障礙性貧血患者206例，攜帶率為7.62%（206/2 704），占比38.58%（206/534），兩組比較差異有統計學意義（χ2＝24.82，P＜0.001）。αβ 復合型珠蛋白生成障礙性貧血患者14例，攜帶率為0.52%（14/2 704），占比2.62%（14/534）。

2.2 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型分析 見表1。在314例α-珠蛋白生成障礙性貧血中，共檢出8種基因型，最常見的是-SEA/αα 基因型（138例，43.95%）和-α3.7/αα 基因型（136例，43.31%）。

表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型及攜帶率和構成比（n=314）

2.3 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型分析 見表2。在206例β-珠蛋白生成障礙性貧血中，共檢出9種基因型，最常見的是βE（56例，27.18%），其次為CD17（54例，26.21%），CD41-42 （48例，23.30%）。

表2 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型及攜帶率和構成比（n=206）

2.4 αβ 復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因類型及其比例 見表3。14例αβ 復合型珠蛋白生成障礙性貧血中，共有9種基因型組合。

表3 αβ 復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因類型及構成比

3 討論

珠蛋白生成障礙性貧血是世界上最常見、危害最嚴重的遺傳性疾病[9]。根據臨床表現可分為輕型、中間型和重型。珠蛋白生成障礙性貧血輕型患者可無明顯臨床癥狀[10]；中間型珠蛋白生成障礙性貧血患兒需終身輸血，長大基本喪失勞動力；重型α-珠蛋白生成障礙性貧血會引起胎兒水腫癥，胎兒無法存活；重型β-珠蛋白生成障礙性貧血會出現嚴重貧血，如果不治療，多于5歲前死亡。珠蛋白生成障礙性貧血不僅會給患者自身的身心健康帶來嚴重危害，也會給社會及患者家庭帶來沉重的精神負擔和經濟負擔。

據現有流行病學調查資料顯示，中國南方地區人群中α-珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為1%～18%，β-珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為1%～8%。由本研究結果顯示，攀枝花地區人群中α-珠蛋白生成障礙性貧血基因和β-珠蛋白生成障礙性貧血基因的攜帶率（分別為11.61%和7.62%）均較高，且遠遠高于四川省的平均水平（α-珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為1.7%，β-珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為3.0%，合計4.7%）。因此本地區應高度重視珠蛋白生成障礙性貧血的防治干預。

研究顯示，攀枝花地區人群珠蛋白生成障礙性貧血以α-珠蛋白生成障礙性貧血為主，基因型以-SEA/αα（43.95%）比例最高，其次為-α3.7/αα（43.31%）和-α4.2/αα（5.41%），與重慶[6]、廣西[11]、廣東[12]、云南[13]等地研究結果一致[6]。β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型中，排名前三依次為βE（27.18%），CD17（26.21%）和CD41-42（23.30%），最常見為βE，與重慶[6]、廣西[11]、廣東[12]、云南[13]的報道不一致（重慶[6]CD17 最常見，廣西[11]、廣東[12]CD41-42 最常見，云南[13]CD26 最常見）。αβ 復合型珠蛋白生成障礙性貧血時有發生，組合類型較多，但這種復合型攜帶者自身沒有嚴重的臨床表現[14]。由此可見，珠蛋白生成障礙性貧血的發生具有明顯的地域差異性，應重點關注本地區的基因類型分布及其特點。

本研究納入的患者中，男性455例，女性2 249例，男性患者遠少于女性患者，考慮到本院為婦幼保健醫院，受檢者多為孕婦，于產檢時發現，而大多數育齡夫婦不太了解孕前檢查珠蛋白生成障礙性貧血基因的重要性。珠蛋白生成障礙性貧血男女患病幾率相同，與性別無關，且呈常染色體隱性遺傳，當夫婦雙方任何一方有一個雜合子就有生育患病兒的可能。若夫婦雙方均為同一類型（α-或β-）珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者時，其后代有四分之一的機會罹患重癥珠蛋白生成障礙性貧血。因此，本研究認為對男性的珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測與對女性的珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測同等重要，應提倡婚前、孕期或產前夫婦雙方檢查。

目前珠蛋白生成障礙性貧血尚無有效根治辦法[15]，中重型預后不佳，且本地區經濟相對落后，珠蛋白生成障礙性貧血的發生率較高，基因類型分布具有較大的異質性。因此，獲取更多本地區有關珠蛋白生成障礙性貧血基因突變的遺傳信息，廣泛有效地開展遺傳咨詢與產前診斷，為最有效的預防手段，此次研究對于攀枝花地區避免下一代患兒的出生，提高人口素質，降低出生缺陷具有重要的意義。