冠心病患者外周血細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子表達量與斑塊特征相關性分析

郇雷，亓維東，張增堂，亓華新，陳丹飛

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦桥R床中常見的心血管疾病之一，其主要病理基礎是血管內膜細胞外基質遭到破壞、重構，導致血管粥樣斑塊形成、管腔狹窄，甚至閉塞引起心肌細胞缺血、缺氧[1]。穩定型心絞痛（SAP）和急性冠脈綜合征（ACS）是最常見的冠心病類型。SAP的病變處血管斑塊較穩定，臨床癥狀較輕[2]，而ACS的血管斑塊穩定性差，斑塊易破裂、血栓易形成[3]，嚴重威脅患者的生命安全，因此，早期識別不穩定斑塊對于改善患者預后至關重要。目前，影響冠狀動脈（冠脈）粥樣斑塊穩定性的機制尚不清楚，細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子（EMMPRIN）是近年來研究熱點，它是免疫球蛋白超家族成員之一，有研究顯示[4]，其不僅可以誘導單核細胞、內皮細胞等產生大量的細胞外基質促進粥樣斑塊的形成，還可與糖蛋白Ⅳ結合促進血小板遷移及黏附，進而誘導血栓、新生血管形成，影響粥樣斑塊的穩定性，提示EMMPRIN在冠脈粥樣斑塊的發生發展中發揮重要作用。但是EMMPRIN表達水平與冠脈粥樣斑塊具體量化關系尚不清楚，因此，本研究通過分析冠心病患者外周血EMMPRIN表達水平與斑塊特征的相關性，以期為早期識別不穩定粥樣斑塊及有效干預提供充分的證據。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2017年6月至2019年6月于山東第一醫科大學附屬濟南人民醫院心內科就診的急性冠脈綜合征患者（ACS組）82例和穩定型心絞痛患者（SAP組）57例作為研究對象。納入標準：①ACS和SAP的診斷符合相關指南標準（典型的臨床癥狀及實驗室檢查，冠脈造影提示≥1支主要冠脈直徑狹窄率超過50%）[5,6]；②同意行冠脈CT及光學相關斷層掃描（OCT）檢查。排除標準：①肥厚性及擴張性心肌??；②病毒性心肌炎、風濕性心肌炎；③既往行冠脈支架植入手術；④嚴重的心肺腎等重要器官功能障礙；⑤惡性腫瘤。另選取同期體檢的健康體檢者60例作為對照組（CON組）。所有入組對象均簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會審批同意。

1.2 研究方法①記錄入組對象的基本臨床資料，包括年齡、性別、吸煙史、飲酒史、高血壓、糖尿病及冠心病病史等；②于次日清晨抽取空腹靜脈血5 ml（2份），1份血樣以3000轉/min離心20 min（離心半徑15 cm），取上清置于-80 ℃冰箱中備用。由山東第一醫科大學附屬濟南人民醫院檢驗科醫師使用JY-870全自動生化檢測儀（青島駿源環保設備有限公司）檢測生化指標：超敏C反應蛋白（hs-CRP）、低密度脂蛋白（LDL）等。另1份血樣加入枸櫞酸鈉抗凝，再加入淋巴細胞分離液，后經密度梯度離心分離出外周血單核細胞，使用流式細胞檢測液重懸細胞，后給予PE標記的CD14熒光抗體（碧迪公司，美國）和FITC標記的EMMPRIN抗體（昂飛公司，美國），經洗滌、離心后在流式細胞儀（貝克曼庫爾特公司，美國）上測定EMMPRIN的平均熒光強度（MFI）。③使用64層螺旋掃描CT機（三英精密儀器股份有限公司，天津）對患者進行冠狀動脈成像檢查并進行病變血管三維圖像重建，后測量主要病變處冠脈粥樣硬化斑塊的CT值并進行斑塊穩定程度分級，結果判讀：CT值小于60 HU為軟斑塊（不穩定），CT值介于60～129 HU之間為纖維斑塊（居中），CT值等于及超過130 HU為鈣化斑塊（穩定）。④采用C7-XR DragonflyTM光學相干斷層成像儀（美國，圣猶達醫療用品有限公司）對患者主要病變冠脈進行斑塊參數檢測，檢測內容包括斑塊纖維帽厚度、脂質弧度、狹窄率、斑塊破裂、血栓形成、血管鈣化、及斑塊侵蝕等。

1.3 統計學處理使用SPSS 23.0對數據進行統計分析。計量資料符合正態分布使用均數±標準差（）表示，二組間比較使用獨立樣本t檢驗，多組間的比較使用單因素方差分析（事后比較采用LSD-t）；計數資料使用例數（構成比）表示，組間比較使用χ2檢驗。使用使用Pearson或Spearman相關分析外周血EMMPRIN表達水平與斑塊特征的相關性。所有P值均為雙側檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組對象外周血EMMPRIN表達水平及一般資料的比較三組對象在年齡、性別、吸煙史、飲酒史及糖尿病史等方面比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。ACS組和SAP組患者外周血EMMPRIN表達水平明顯高于CON組，且ACS組明顯高于SAP組（P均＜0.05）；ACS組和SAP組患者血清LDL、hs-CRP水平及高血壓、冠心病家族史比例明顯高于CON組，且ACS組患者血清hs-CRP水平明顯高于SAP組組（P均＜0.05），表1。

2.2 ACS組和SAP組斑塊特征的比較冠脈CT成像檢查顯示：ACS組患者病變血管處軟斑塊最多（56.10%），纖維斑塊（25.61%）和硬化斑塊（18.29%）較少，SAP組患者病變血管處鈣化斑塊最多（52.63%），軟斑塊（17.54%）和纖維斑塊（29.82%）較少，兩組間差異有統計學意義（P＜0.05）。OCT結果顯示：ACS組斑塊破裂（P=0.008）、血栓（P=0.007）及脂質?。≒＜0.001）明顯高于SAP組，而斑塊纖維帽厚度（P＜0.001）明顯低于SAP組，表2。

2.3 不同斑塊類型患者外周血EMMPRIN表達水平的比較軟斑塊患者外周血EMMPRIN表達水平明顯高于纖維斑塊和鈣化斑塊患者，且纖維斑塊患者高于鈣化斑塊患者（P均＜0.05），表3。

2.4 外周血EMMPRIN表達水平與斑塊特征的相關性外周血EMMPRIN表達水平與斑塊穩定性（rs=-0.898，P＜0.001）及斑塊纖維帽厚度（r=-0.546，P＜0.001）呈明顯的負相關，與斑塊脂質?。╮=0.689，P＜0.001）呈明顯的正相關（圖1）。

3 討論

急性冠心病事件發生的主要原因是冠脈粥樣斑塊穩定性下降，易損斑塊的纖維帽破裂、血栓形成。據不完全統計，超過70%的急性心肌梗死并發于管腔狹窄＜50%的冠脈病變處斑塊破裂，約20%的急性心肌梗死并發于管腔狹窄＞70%的冠脈病變處斑塊破裂[4]，提示粥樣斑塊的不穩定性相較于冠脈狹窄程度及波及范圍，對患者的危害更大，因此，臨床中的重中之重是對不穩定斑塊的及早識別及有效干預。冠脈CT三維成像可有效評估粥樣斑塊的性質，其評定的鈣化斑塊為穩定斑塊，軟斑塊為不穩定斑塊，纖維斑塊介于二者之間[7]。光學相關斷層掃描（OCT）是一種高分辨率的腔內影像學技術，測量的斑塊纖維帽厚度越小、脂質弧越高，斑塊愈不穩定，是目前判斷活體斑塊穩定性的“金標準”[8]。本研究通過對患者進行冠脈CT三維成像及OTC檢查，結果顯示，ACS患者斑塊多為不穩定的軟斑塊，SAP患者多為穩定的鈣化斑塊，且ACS患者斑塊的脂質弧、斑塊破裂及血栓明顯高于SAP組，斑塊纖維帽厚度明顯低于SAP組。結果提示，ACS患者相較于SAP，病變血管處粥樣斑塊極不穩定，斑塊纖維帽較薄易破裂形成血栓，這也與既往的文獻報道是一致的。

表1 三組對象外周血EMMPRIN表達水平及一般資料的比較

表2 ACS組和SAP組斑塊特征的比較

表3 不同斑塊類型患者外周血EMMPRIN表達水平的比較

圖1 外周血EMMPRIN表達水平與斑塊特征的相關性

粥樣斑塊穩定性的下降是冠心病發生發展的重要因素，因此尋找影響斑塊穩定性的因素迫在眉睫。有研究[9]顯示，細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子（EMMPRIN）可促進一系列基質金屬蛋白酶（MMP）的活化，而活化的MMP可降解斑塊基質成分，引起斑塊纖維帽變薄、易破損。趙玉軍等[10]研究也顯示，冠心病患者外周血EMMPRIN表達水平的上升與粥樣斑塊性質不穩定密切相關，這些結果都提示，EMMPRIN是影響粥樣斑塊穩定性的重要因素。EMMPRIN是一種廣泛分布于細胞膜表面的糖蛋白，其基因定位于人19號染色體19p13.3，其廣泛表達于機體造血及非造血細胞中，參與胚胎發育、傷口愈合、炎癥和心血管疾病的發生發展過程[11]。近年來，很多研究顯示，EMMPRIN與粥樣斑塊的穩定性下降密切相關。楊麗霞等[4]研究顯示，ACS患者血小板表面的EMMPRIN、GPIV水平明顯升高，且二者與斑塊的穩定性下降顯著相關；曾文珺[12]研究顯示，EMMPRIN在動脈粥樣硬化患者的血小板中高表達，其可促進機體單核細胞分泌MMP-9、腫瘤壞死因子等，通過炎癥機制及MMP促進斑塊的形成及破裂。還有研究顯示[13]，EMMPRIN在動脈粥樣硬化患者的血管平滑肌細胞中也高表達，其可促進平滑肌細胞分泌MMP-2，MMP-2，不僅分解斑塊基質成分導致其穩定性下降，還可以促進平滑肌細胞的增生和遷移。巨噬細胞也是冠脈粥樣斑塊發生發展的重要炎性細胞，有多項研究[14,15]顯示，EMMPRIN在巨噬細胞中高表達，其主要通過促進巨噬細胞分泌MMP-2、MMP-9、MMP-14等增加，進而促進斑塊的發生發展、不穩定及破裂。

本研究結果顯示，冠心病患者的外周血EMMPRIN水平明顯高于健康人，且ACS患者的外周血EMMPRIN水平明顯高于SAP患者；軟斑塊患者的外周血EMMPRIN水平明顯高于纖維斑塊和鈣化斑塊患者，且纖維斑塊患者高于鈣化斑塊患者。相關性分析顯示，外周血EMMPRIN水平與斑塊穩定性及斑塊纖維帽厚度呈明顯的負相關，與斑塊脂質弧呈明顯的正相關。提示冠心病患者外周血EMMPRIN水平明顯升高，患者病情越重；斑塊性質越不穩定，其表達水平亦愈高，且外周血EMMPRIN水平與斑塊不穩定性呈現了較好的量化關系，可能的原因是冠心病患者外周血EMMPRIN水平升高，通過刺激機體血小板、血管平滑肌細胞及巨噬細胞分泌大量的MMP，通過MMP降解斑塊基質成分、引起斑塊穩定性下降、易破損及血栓形成[4,12-15]。

綜上所述，冠心病患者外周血EMMPRIN表達水平明顯升高，且與斑塊穩定性下降顯著相關，臨床中積極監測EMMPRIN表達水平有助于冠心病的早期診斷及預防。