探討熊去氧膽酸膠囊原料的粉碎工藝及不同粉碎工藝對該藥中有關物質體外溶出度的影響

邱科先

〔安士制藥（中山）有限公司，廣東 中山 528437〕

熊去氧膽酸膠囊是臨床上治療固醇性膽囊結石、膽汁淤積性肝病及膽汁返流性胃炎等疾病的常用藥。我國的醫藥市場上有很多熊去氧膽酸類藥品（大多是片劑），其藥物成分與該藥的原研藥品之間存在一定的差異。在本世紀初，我國藥監總局批準從國外進口該藥的原研藥品。但這類進口藥品的售價較高，給患者帶來較大的經濟壓力。為了減輕患者的負擔，讓更多的患者能服用到藥效好、價格低、副作用小的熊去氧膽酸類藥物，我公司仿照該藥的原研藥品優思弗膠囊對熊去氧膽酸膠囊進行了制備。在制備熊去氧膽酸膠囊的過程中，我們發現，用不同的粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊原料，其中有關物質的體外溶出度存在很大的差異[1]。在本次研究中，我們對熊去氧膽酸膠囊原料的粉碎工藝進行了探討，并分析采用不同的粉碎工藝對該藥中有關物質體外溶出度的影響。

1 制備熊去氧膽酸膠囊的實驗儀器

制備熊去氧膽酸膠囊時所需要的實驗儀器見表1。

表1 制備熊去氧膽酸膠囊的實驗儀器及說明

2 熊去氧膽酸膠囊的處方說明、產品標準及處方工藝

2.1 熊去氧膽酸膠囊的處方說明及產品標準

熊去氧膽酸膠囊的處方說明見表2，該藥的產品標準見表3

表2 熊去氧膽酸膠囊的處方說明（按1000粒計）

表3 熊去氧膽酸膠囊的產品標準

2.2 熊去氧膽酸膠囊的處方工藝

取300 g制備熊去氧膽酸膠囊的原料，將其分成10份，分別用高速萬能粉碎機、錘式粉碎機、低溫粉碎機、行星式球磨機、氣流粉碎機五種粉碎機對其進行粉碎處理[2]。處理完畢后，將其中有關物質合格的原料與處方填充劑均勻地混合在一起，然后加入黏合劑進行制粒[3]。制粒完成后，在60℃的環境下對制備好的藥物進行干燥處理。最后，將經過干燥處理的藥物灌裝成膠囊，并進行包裝。

3 對用不同粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊原料中的有關物質進行檢測

3.1 進行波長檢測

嚴格按照處方取用熊去氧膽酸對照品，并用甲醇將其制備成濃度為3 mg/mL的溶液。用紫外分光光度計（UV）對所得的溶液進行掃描，掃描的波長為200～400 nm。由于熊去氧膽酸的最大吸收波段為205 nm，故該波長被看作高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）的檢測波長[4]。

3.2 進行溶液配制

嚴格按照處方配制系統適用性溶液、膽酸對照品溶液、7-酮基膽石酸對照品溶液、鵝去氧膽酸對照品溶液、膽石酸對照品溶液、其他雜質對照品溶液和供試品溶液。

3.3 確定色譜條件及進行系統適用性試驗

用Luna C18色譜柱，用乙腈-0.001 mol·L-1為流動相，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為40℃，檢測波長為205 nm，進樣量為30μl。取系統適用性溶液，按以上的色譜條件進樣。

3.4 進行有關物質測定

取供試品溶液和有關物質的對照品溶液，在上述的色譜條件下進行測定。有關物質的選用標準為：膽酸含量在0.5%以下，7-酮基膽石酸含量在0.4%以下，鵝去氧膽酸含量在1.0%以下，膽石酸含量在0.1%以下[5]。在供試品溶液中，除上述物質以外，其他雜質的總量在0.5%以下。詳見表4。

表4 用不同粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊原料中有關物質的檢測結果

由表4可知，在處理制備熊去氧膽酸膠囊的原料時，將高速萬能粉碎機、錘式粉碎機、低溫粉碎機的工作時間分別設定為1 min、3 min、7 min，會導致所得物中的有關物質中的總雜增加明顯。用行星式球磨機、氣流粉碎機進行處理時，所得物中有關物質的含量變化不大[6]。因此，在本次研究中，僅將用行星式球磨機和氣流粉碎機處理的熊去氧膽酸膠囊原料用于該藥的制備，并對熊去氧膽酸膠囊原料中有關物質的體外溶出度進行評價。

4 對熊去氧膽酸膠囊原料中有關物質的體外溶出度進行評價

4.1 色譜條件

取空白溶出介質和自制的熊去氧膽酸溶出液，分別進樣，并記錄色譜。

4.2 線性范圍

取熊去氧膽酸膠囊原料，嚴格按照要求用溶出介質將其溶解制備成不同濃度的溶液，然后按照上述的色譜條件（見3.3）對溶液進行測定，得出在0.01～0.50 mg/mL的濃度范圍內，熊去氧膽酸的線性關系良好。

4.3 進行精密度試驗、重復性試驗、穩定性試驗和回收率試驗

嚴格按照規定對熊去氧膽酸溶液進行精密度試驗、重復性試驗、穩定性試驗和回收率試驗。檢驗儀器的精密度、按照上述色譜條件進樣測定的重復性、穩定性、熊去氧膽酸的回收率，以確保檢測的有效性。

4.4 溶出介質的選擇

參照原研藥品優思弗的質量標準，選用pH為7.5的磷酸鹽緩沖液（PSB）作為溶出介質。熊去氧膽酸在該緩沖液中的溶解度為0.992 mg/mL，溶出介質的體積為900 mL，符合熊去氧膽酸的漏槽條件。

4.5 溶出度的測定

取適量的熊去氧膽酸膠囊原料，按照我國藥典中規定的溶出測定法，以900 mL pH為7.5的PSB作為溶出介質，然后在6個時間點提取溶液（見表5），每次提取5 mL，并進行0.45 μm的過濾，然后將續溶液作為供試品溶液。嚴格按照要求取熊去氧膽酸對照品溶液，向其中加入氫氧化鈉溶液進行溶解，并用pH為7.5的PSB溶解液進行稀釋。稀釋后，每1 mL的溶液中含有0.28 mg的對照品溶液。分別選取50μL的上述兩種溶液，按照上述的色譜條件（見3.3）進樣測定，并用外標法以峰面積計算累計的溶出度。

表5 用不同的粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊體外溶出度的對比

由表5可知，用不同的粉碎工藝得到的熊去氧膽酸膠囊原料粒徑存在很大的差異。用行星式球磨機粉碎3 min、5 min、用氣流粉碎機粉碎所得的熊去氧膽酸膠囊原料制成的藥品，其中有關物質的體外溶出度基本符合原研藥品的標準。其中，用以行星式球磨機粉碎3 min所得的熊去氧膽酸膠囊原料制成的藥品，其體外溶出度與原研藥品的擬合度最高。因此，該工藝是熊去氧膽酸膠囊原料最佳的處理工藝[7]。氣流粉碎方式也基本上可以達到相似結果，但效率相對低一些。

4.6 粒徑

利用馬爾文2000激光粒度儀分別對熊去氧膽酸的普通原料藥、粉碎原料、參比品、研制品及穩定性樣品的晶型進行研究，結果顯示，其原料藥、研制品與參比品的晶形、粒徑一致。下圖附普通原料和微粉原料粒度分布檢測部分結果

原料批號 粒度分布測定結果(μm)批號 d（0.1） d（0.5） d（0.9）X12006，普通原料 3.865 20.812 82.578 D19001 0.816 5.214 20.501 D19002 0.844 5.296 20.537

4.7 晶型

應用《中華人民共和國藥典》（2015年版四部）中0451 X射線粉末衍射法第二法中的粉末X射線衍射法，分別對熊去氧膽酸的原料藥、研制品、參比制劑的晶型進行研究，結果顯示，熊去氧膽酸的原料藥、研制品和參比制劑的晶型一致。參比制劑的批號為18B01832L，研制品的批號為G00119R。

4.8 一致性評價

參照日本橙皮書設定的熊去氧膽酸的溶出條件、BP2016熊去氧膽酸膠囊的質量標準及優思弗質量標準中的溶出條件，得出溶出介質條件。設定取樣的時間點、測定方法，得出熊去氧膽酸膠囊自制品與市售原研藥品優思弗在四種介質中溶出度的測定結果。詳見表6。

表6 熊去氧膽酸膠囊自制品與市售原研藥品優思弗在四種介質中溶出度的測定結果

由表6可知，熊去氧膽酸膠囊自制品與原研藥品優思弗在四種不同溶出介質中的F2因子均大于50（其中有兩個介質溶出太低，不計算F2），表明這兩種藥品的溶出曲線具有很高的相似性，其體外溶出行為基本一致。

5 討論

熊去氧膽酸膠囊原料的粉碎工藝是仿制其原研藥品優思弗的關鍵。而且，用不同的粉碎工藝對熊去氧膽酸膠囊的原料進行處理后，所得物中有關物質的含量存在較大的差異。用球磨機、氣流粉碎機等較為溫和的粉碎工藝對熊去氧膽酸膠囊原料進行處理后，所得物中有關物質增加的幅度較小，基本符合規定的標準。用高速萬能粉碎機等粉碎工藝對熊去氧膽酸膠囊原料進行處理后，由于粉碎的方式較為劇烈，所得物中有關物質的含量有時規定的標準[8]。

用相同的粉碎工藝（如行星式球磨機粉碎工藝）對熊去氧膽酸膠囊的原料進行處理時，設定的粉碎時間不同，所得物中有關物質的平均粒徑、分布寬度均存在明顯的差異[9]。因此，在本次研究中，我們著重對用球磨機和氣流粉碎機這兩種粉碎工藝處理的熊去氧膽酸膠囊原料，用四種介質進行溶出度的測定。對熊去氧膽酸膠囊自制品與市售原研藥品優思弗在四種介質中的溶出度進行一致性評價的結果表明，用行星式球磨機粉碎3 min的工藝所得的熊去氧膽酸膠囊原料配制而成的熊去氧膽酸膠囊，其中有關物質的體外溶出度與由德國?？酥扑幑旧a的原研藥品優思弗相一致。這說明，該工藝是熊去氧膽酸膠囊原料最佳的粉碎工藝，用該工藝可制備出高質量的熊去氧膽酸膠囊。