寧德市醫院體檢人群及住院患者HTLV?I感染情況分析

葉仁清 葉作東 傅芬蕊 齊育英

作者單位：寧德師范學院附屬寧德市醫院檢驗科，福建，寧德352000

人類嗜T 淋巴細胞病毒I 型（Human T?lympho?tropic virus type?I，HTLV?I）屬逆轉錄病毒科（Retro?viridae），RNA 腫瘤病毒亞科（Oncovirubae），是首個發現的人類逆轉錄病毒［1?2］，臨床上可引起成年人T淋巴細胞白血?。ˋdult T?cell leukemia，ATL）、熱帶痙攣性下肢癱瘓以及HTLV 相關性多肌炎、淋巴結炎及相關性脊髓病等嚴重疾?。?］。目前全球已有約1 000 萬～2 000 萬人感染了HTLV?I［4］，造成嚴重的衛生經濟負擔。研究顯示，福建省是我國HTLV?I 高流行區，其中寧德市的感染率呈現較高水平［5］。目前關于寧德市HTLV?I 具體感染情況相關的報道都是基于獻血人群的研究，一定程度上不能代表全體人群。本文通過對體檢人群及病患人群的篩查，旨在了解近年來寧德市人群HTLV?I 感染的流行情況及分析感染不同年齡段、性別與感染狀況的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2019年4月至2019年12月在寧德市醫院體檢和住院患者的新鮮血清及部分全血標本9 269份，其中2 274 份為全市體檢標本，3 405 份為隨機選取的門診體檢標本，3 590 份為隨機選取的住院患者標本。9 269 份標本中，男性為4 205 例，女性為5 064 例，標本年齡分布見表1，年齡中位數為46 歲。

表1 研究標本年齡分布表［n（%）］Table 1 Age distribution of sample［n（%）］

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑

HTLV?I/II 抗體檢測試劑盒（ELISA 法）（批號：T20190302B，96 人份/盒）、HTLV?I 核酸檢測試劑盒（PCR?熒光探針法）（批號：HPQ20190101，48 人份/盒）和DNA/RNA 提取試劑盒（磁珠法）（批號：20190101，48 人份/盒）均來源于北京萬泰生物藥業股份有限公司。

1.2.2 儀器

鄭州安圖生物工程有限公司酶標儀（PHPMO型）、臺灣圓點半自動核酸提取儀（SLA?32）、美國伯樂實時熒光定量PCR 儀（CFX96）、美國ABI DNA 測序儀（3730XL）。

1.3 方法

1.3.1 抗HTLV?I/II 初篩

使用北京萬泰HTLV?I/II 抗體檢測試劑盒（雙抗原夾心酶聯免疫法）對9 269 份標本進行抗體檢測，對初次檢測陽性標本進行雙孔復查，復查結果仍為陽性者判定為ELISA 初篩陽性。

1.3.2 HTLV?I 確證試驗

使用北京萬泰HTLV?I 型核酸檢測試劑盒（PCR?熒光探針法）對初篩陽性病例的血細胞標本進行PCR 確證實驗。

1.3.3 測序分析

據HTLV?I 型插入序列pol、tax 基因信息，在NCBI 中查找高度保守參考序列，使用軟件Primer Premier 3.0 進行引物設計，將保存初篩陽性者血細胞標本進行核酸提取，目的基因經PCR 擴增后進行測序，測序結果在GenBank 中與NCBI 網站上已發表的HTLV?I 型pol 或tax 基因序列進行比對分析。HTLV?I pol 基因（上游引物序列5′?TGGGC?GCTACCTGAACTTC?3′，下游引物序列5′?GGC?CACTGCTGCTTGGACT?3′，產物293 bp），HTLV?I tax 基因（上游引物序列5′?GGCCTTCCTCAC?CAATGTTC?3′，下游引物序列5′?GGATATTT?GGGCTCATGGTC?3′，產物469 bp），同源性均在98%以上判定為HTLV?I 陽性。

1.4 統計學方法

采用SPSS2 6.0 軟件進行統計學分析；計數資料以n（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗；檢驗水準P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HTLV?I 檢測結果

對寧德市9 269 份血清標本進行HTLV?I/II 抗體篩查，經初篩和確證后93 份標本判定為HTLV?I抗體陽性，陽性率為1.00%。HTLV?I PCR 檢測和HTLV?I 基因測序分析結果一致率100%。

2.2 HTLV?I 感染的年齡分布

76～98 歲年齡組陽性率最高達到2.11%，其次是61～75 歲年齡組，HTLV?I 陽性率達1.97%，0～17歲年齡組最低為0.00%。見表2。

表2 不同年齡組HTLV?I 陽性率［n（%）］Table 2 The infection rate of HTLV?I in different age groups［n（%）］

2.3 HTLV?I 感染的性別差異

男性HTLV?I 抗體陽性率為0.88%，女性HTLV?I 抗體陽性率為1.11%，兩者比較，差異無統計學意義（P>0.05），不同年齡組間男性、女性HTLV?抗體陽性率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表3。

表3 不同性別組HTLV?I 陽性率［n（%）］Table 3 The infection rate of HTLV?I in different gender groups［n（%）］

2.4 不同年齡及性別組標本HTLV?I 陽性率

不同性別組隨著年齡增長，HTLV?I 陽性率均呈現明顯上升趨勢。見圖1。

圖1 不同年齡及性別組標本HTLV?I 陽性率Figure 1 The infection rate of HTLV?I in different age and gender groups

3 討論

對HTLV?I 感染引起的相關疾病至今尚未成功研究出有效的治療藥物和預防性疫苗，也未發現有效免疫性抗體產生或自行清除的報道［1，6］。目前唯一有效辦法就是及時發現HTLV?I 感染者，采取措施切斷其傳播途徑［7］。

1985年曾毅等［8］首次對來自全國28 個省市的9269 份血清樣本篩查并進一步確證HTLV?I 抗體陽性率為0.08%。隨著更多的HTLV?I 篩查調查的開展，更多地區和人群中HTLV?I 感染情況逐漸被發現，其中主要集中在東南沿海地區。季陽等［9］調查了1997年～1998年四川、福建、新疆、浙江、山東和湖北六省區的無償獻血者，血清HTLV?I 抗體陽性率為0.02%，感染者均為東南沿海地區獻血者。而我國現有報道中，寧德市HTLV?1 的感染率呈現較高水平，陳長榮等［10］在2004 至2009年對福建省131 823 份無償獻血標本進行HTLV 抗體篩查后發現，檢出陽性標本中來自寧德市的標本遠高于其他地區，占比高達33.33%（8/24）。徐東峰等［11］在2013年對福建省寧德地區無償獻血者進行HTLV?I抗體篩查，確認陽性率為0.34%。歐山海等［12］對2016年～2018年無償獻血者的?I 抗體篩查結果中報道寧德市抗體陽性率為0.18%。本文調查結果說明了寧德市屬于HTLV?I 高流行地區。與該地區現有報道相比，HTLV?I 抗體陽性率顯著增加，主要是由于篩查人群的差異，之前有關該地區的研究對象均為獻血者，本文篩查對象為體檢人群及門診和住院患者，一定程度上更能代表普遍群體。同時也需要謹防人群的感染率增加。HTLV的傳播途徑包括垂直感染、性接觸傳播、共用針頭如靜脈注射毒癮者以及輸血傳播等［13］，研究發現HTLV 感染常表現出明顯的家庭聚集性［14］，并具有區域集中的特點［15］，寧德市作為HTLV?1 感染率相對較高的地區，若疏于防治可能導致感染率進一步提升。在世界上其他國家和地區的調查中曾提到人群的年齡和性別是HTLV?I 的危險因素［16］，本研究結果顯示性別因素不是HTLV?I 流行的危險因素，與王惠榕等［5］報道結果一致。

本文首次對寧德市醫院體檢人群及住院患者中HTLV?I 感染情況進行調查，統計得到HTLV?I感染率為1.00%，高于該地區獻血人群HTLV?1 感染率的報道，可能由于獻血人群整體健康水平更高造成了結果的差異。本文調查結果進一步豐富了HTLV?1 流行病統計的樣本來源，為制定科學的防控措施提供參考。造成人群差異更深層次的機理在本文中并未開展研究，在后續的調查工作中應關注篩查人群不同導致的流行病統計學結果差異。另外，此次調查結果顯示性別對HTLV?I 感染率的影響并不顯著，而隨著年齡增長，HTLV?I 感染率呈現明顯上升趨勢，因此應重點關注對中老年人群HTLV?I 的篩查和預防。