◎ 金 凱,丁 萍,蔡燕斌
(1.江蘇君信新華安全科技有限公司,江蘇 張家港 215600;2.張家港檢驗認證有限公司,江蘇 張家港 215600)
脂肪是食物的重要成分之一,包括動物脂肪和植物脂肪。植物脂肪廣泛存在于許多植物的種子果實中,其中大豆使用最為廣泛。準確測定大豆的粗脂肪含量為收購大豆以質論價、計算出油率、研究大豆油料營養價值以及對其進行合理利用等提供參考,是評價產品品質和組織生產的重要依據[1],因此測定大豆中粗脂肪含量顯得尤為重要。測定大豆中粗脂肪含量的方法很多,目前最常用的有經典索氏抽提法[2-5]和索氏抽提儀法[4-5],近年來不少文獻對大豆粗脂肪含量測定影響因素進行分析[6-8],對兩種測定方法也做過對比[4]。目前多數實驗室使用索氏抽提儀測定粗脂肪,不同型號的儀器對樣品的前處理方法沒有明確的要求,對于儀器操作方法介紹的比較籠統,也未見有文獻關于這方面的相關報道。筆者采用索氏抽提儀,通過對稱樣量、浸提溶劑、沸騰溫度、沸騰時間、以及淋洗時間等條件的改進,最終篩選出了最優測定條件。
索氏抽提儀(FOSS 8000型);電熱鼓風干燥箱(DGH-9070A)。
石油醚60~90 ℃、石油醚30~60 ℃(分析純,國藥集團化學試劑有限公司)。
大豆樣品由張家港檢驗認證有限公司實驗室提供,使用前需要除去雜質和損傷粒,并使用刀式樣品磨研磨均勻。
稱取已磨碎充分混勻試樣0.5 g(準確至0.000 1 g),全部轉移到濾紙筒內;將濾紙筒放入索氏抽提器的抽提筒內,連接已干燥至恒重的接收瓶,由抽提器冷凝管上端加入60~90 ℃石油醚80 mL于接收瓶內;在沸騰溫度125 ℃,沸騰時間20 min,淋洗時間45 min,回收時間10 min的條件下,使石油醚不斷回流抽提,提取結束后,取下接收瓶,再于(100±5)℃干燥30 min,放干燥器內冷卻45 min后稱量,重復以上操作直至恒重。
使用30~60 ℃石油醚浸提,沸騰溫度為90 ℃,沸騰時間為1 h,淋洗時間為4 h,回收時間為10 min;使用60~90 ℃石油醚浸提,沸騰溫度為125 ℃,沸騰時間為20 min,淋洗時間為45 min,回收時間為10 min。分別使用兩種方法測定同一個大豆樣品,平行測定6次。結果如表1所示。
由表1可知,兩種測定粗脂肪方法中使用60~90 ℃石油醚,浸提時間短,相對標準偏差低,因此選用60~90 ℃石油醚作為浸提溶劑。
表1 兩種浸提溶劑的測定大豆的粗脂肪表
大豆的油分比較高,稱樣量太小則沒有代表性,太大浸提又不完全,分別稱取0.400 0 g、0.500 0 g、0.600 0 g和0.700 0 g已磨碎充分混勻試樣,按照實驗方法測定大豆的粗脂肪,稱樣量與脂肪含量的關系見表2。由表2可知,稱樣量為0.500 0 g時結果最佳。
表2 稱樣量與脂肪含量的關系表
將樣品全部轉移到濾紙筒內,將濾紙筒放入抽提筒內,連接已干燥至恒重的接收瓶,加入80 mL石油醚,在合適的沸騰溫度下沸騰、淋洗一段時間。影響測定結果的主要因素是沸騰溫度、沸騰時間、淋洗時間,為了找到既準確又省時的檢測條件,設計L9(34)的正交試驗,因素水平和實驗數據見表3和表4。最優條件測定結果與其他實驗室結果比較情況見表5。東海糧油實驗室采用國標GB 5009.6—2016第一法[9]測定,抽提時間為6~10 h。由表5可知,實驗條件A2B3C3是最準確又省時的,即在125 ℃沸騰溫度下,沸騰20 min,淋洗45 min。
表3 L9(34)因素水平表
表4 L9(34)試驗計劃、結果記錄及分析計算表
表5 最優條件測定結果與其他實驗室結果比較表
本文建立了索氏抽提儀測定大豆中粗脂肪的方法,該方法準確度高、精密度好,極大的縮短了操作時間,可用于批量樣品檢測,提升了檢測效率。該方法使用60~90 ℃石油醚浸提,該石油醚沸點高、不易揮發、毒性小,不僅減輕了對人體的危害,也減少了對環境的污染;實驗沸騰溫度高達125 ℃,能適應各種常規的實驗檢測條件,不同檢測環境對結果帶來的影響不大,檢測重復性好。