淺析系統性紅斑狼瘡外周血固有淋巴細胞變化與其臨床相關性

李璐　杜勇　李敬　師曉強　賈艷輝

【摘要】目的：深入探析系統性紅斑狼瘡病患者外周血當中固有淋巴細胞變化及其臨床相關性。方法：任意篩選從2017年11月到2018年5月治療于我院的風濕免疫科病患者，并且符合相應年齡段，且規避免疫有關病癥及其家族史遺傳的身體健康群體，流式細胞術檢測外周血當中ILC、B細胞、CD4+T與CD8+T細胞百分比值，解析ILC各亞組之間的變動偏差，區別于B細胞、T細胞亞群相互間的關聯性。酶聯免疫吸附實驗檢測血漿當中包括細胞介素（IL）-4、-33與干擾素-γ等細胞因子水準，并且解析ILC亞群和各因子的關聯性。結果：具體劃分為SLE活動組，即P=0.0037;SLE穩定組，即P=0.0462，分開跟健康對照組進行比較，外周血當中ILC百分比完全上升，伴隨著ILC2百分比的提升，而SLE疾病活動度評價也隨之下降，兩者呈現負相關，SLE病患者當中ILC2即r=0.1543，P=0.0288與ILC3百分比即r=0.3136，P=0.0011對比IL-4水準呈現正相關。結論：SLE病患者ILC細胞百分比失調和病癥活動有著緊密關系，細胞因子出現不尋常表現也摻雜當中，需要深入研究功能與作用。

【關鍵詞】系統性紅斑狼瘡;固有淋巴細胞;臨床相關性

【中圖分類號】R593.241 【文獻標識碼】A

【基金項目】保定市科技計劃項目：艾拉莫德對系統性紅斑狼瘡患者B淋巴細胞的影響及臨床療效研究;（編號：2041ZF323）

系統性紅斑狼瘡的簡稱為SLE，其是一種多系統受累的自身免疫性疾病，在人體內形成對于核蛋白復合物的致病性身體抗體針對包含腎臟在內絕大多數器官有極大的損害影響。通過探究從中找出各種固有免疫細胞加入到SLE的發病中，參照ILC細胞因子譜把其劃分為三大亞群，呈現出分泌干擾素-γ特性，集中分散在黏膜和組織當中。接下來文章主要研究了ILC在SLE中的表現水平，及其跟細胞因子有慣性，進一步深入研究LLC在SLE具體實踐中的影響。

1 研究對象

具體探究對象為任意篩選從2017年到2018年5月在我院診治風濕免疫科SLE病患者40名，整體病患者完全符合1997年SLE劃分標準，當中男性1名，女性39名，平均歲數42.0+2.2歲。根據SLE病癥活動度-2K把SLE病患者劃分成為活動組與穩定組，每組各20名，篩選同期在我院體檢中心體檢歲數達標的人群，同時規避免疫有關病癥及其家族遺傳病史的健康對照者15名。按照我院倫理委員會的相關制度，已獲得全體研究對象及其家屬簽字知情同意書。

2 方法

2.1 實驗室檢查數據

采集SLE病患者實驗室檢查材料，比如：抗核抗體、血紅細胞沉降率、C-反應蛋白、類風濕因子及其免疫球蛋白等，并且綜合病患者臨床病癥實施SLEDAI詳盡評估。

2.2 重點試劑和儀器

其中流式熒光抗體為：CD56-PE，CD11b-PE，CD16-PE，CD14-PE，CD19-PE，CD11C-PE，CD20-PE，FeRIa-PE，CD3-PE，CD123-PE，CD127-PerCP/Cy5.5，CD161-AF700，CD336-APC，CD117-BV421，CD45-FITC，CD294-PE/Cy7，CD19-PE/Cy7，CD4-FITC，CD3-PaificBlue，CD8-PerCP/Cy5.5;儀器具體包含：BDFACSCCantoII流式細胞儀、Biocell2010酶標儀。

2.3 外周血單個核細胞制備

需要空腹抽取兩組數據5ml外周抗凝血，通過Ficoll密度梯度離心法分離，最終獲得PBMC懸液，且計算數值。

2.4 測定ILC細胞群測

獲取200μlPBMC懸液中添加到抗體CD56，CD11b，CD16，CD14，CD19，CD1IC，CD20，FcRlo，CD3，CD123，CD127，CD161，CD336.CD117，CD45，CD294，待避光孵育30分鐘之后，采取磷酸鹽緩沖液沖洗，添加300μulPBS重懸，流式細胞術檢測ILC細胞比例。

2.5 測定外周免疫細胞亞群

獲取200μlPBMC懸液添加到抗體CD3，CD4，CD8，CD19;待避光孵育30分鐘后，使用PBS沖洗，添加300μlPBS重懸，流式細胞術T、B細胞群比例。

2.6 ELISA檢測二組研究對象血漿中細胞因子表達水準

遵照ELSA試劑盒當中說明書檢測L-4.-33與干擾素-γ具體濃度，試劑盒完全購買于外國公司。

2.7 統計學處置

采取SPSS17.0統計軟件實施數據解析。全部數據完全達到正態分布，每組計量材料使用獨立樣本t檢驗方式，三組及其三組之上材料運用方差解析，結果為P<0.05具備統計學意義。

3 結果

3.1 SLE病患者臨床材料對比二組病患者的SLEDAI評分與ESR呈現上升趨勢，差異具備統計學意義;活動組C3水準對比穩定組有所下降，差異具備統計學意義;然而，RF、CRP、IgG及其C4水準二組之間差異不具備統計學意義。詳見表1所示。

3.2 三組對象ILC百分比對比

第一，SLE活動組和對照比較，ILC比例呈現上升趨勢，即22.33+2.52）%比（14.56+1.28）%，t=2.488，P=0.0181，ILC2比例呈現下降趨勢，即（8.67+0.83）%比（42.48+3.46）%，t=10.79，P<0.0001;ILC3百分比在SLE活動組中下降（5.72±1.08）%比（14.35+2.40）%，t=3.504，P=0.0013。第二，SLE穩定組和對照組比較，二組之間ILC1與ILC3群百分比之間沒有顯著差異，ILC2百分比在SLE穩定組中對比健康對照組顯著下降，第三，SLE兩組病患者對比，活動組對比穩定組的ILC1比例上升，LC2比例顯著下降，ILC3在兩組之間差異化不具備統計學意義。

3.3 SLE病患者外周血T、B細胞百分比與ILC百分比關聯性

第一，SLE穩定組當中ILC各亞群和CD4+T、CD8+T與CD19+B細胞沒有明顯關聯性，全部P>0.05;第二，SLE活動組病患者外周血中，伴隨著外周ILC2百分比例上升，而CD4+T細胞比例有所降低，兩者有互相關聯性，ILC1與ILC3細胞和CD4+T、CD8+T及其CD19+B細胞百分比完全沒有明顯關聯性。

3.4 SLE病患者外周血LC細胞比例和臨床血清學標準關聯性解析

SLE病患者外周ILC百分比和ESR、RF及其CRP等不具備明顯關聯性，全部P>0.05。隨著SLE病患者外周ILC2百分比上升，血清當中的IgG含量下降，二者體現出負相關。

3.5 SLE病患者外周血PBMC當中ILC占比及其疾病活動度相關性

ILC2百分比上升時，而SLEDAI評分卻漸漸下降，二者體現出負相關，然而，在ILC1和ILC3群中沒有相關性，差異化不具備統計學意義。不一樣活動度的SLE病患者外周ILC表達水平不一樣，跟對照組進行比較，SLE穩定組當中ILC百分比上升，即（3.79+0.39）%比（6.59+1.19）%，t=2.077，P=0.0462;SLE活動組中ILC百分比明顯上升，即（3.79+0.39）%比（12.58+2.40）%，t=3.129，P=0.0037;SLE兩組對比，活動組即（6.59+1.19）%比（12.58+2.40）%，t=2.155，P=0.0379，病患者外周血中ILC百分比先祖上升，活動組LEDAI評分對比穩定組呈現上升趨勢。

3.6 三組對象干擾素-γ、IL4和IL-33表現水準對比

SLE活動組當中干擾素γ水準對比SLE穩定組與健康對照組有所上升，SLE二組病患者差異不具備統計學意義。SLE兩組患者血漿IL4水平完全比健康對照組上升;然而，SLE活動組對比穩定組IL4水平略微上升，但是無差異化統計學意義。IL-33表達水平，SLE活動組分開跟與健康對照組及其SLE穩定組對比全部呈現下降，SLE穩定組與健康對照組差異不具備統計學意義。

3.7 SLE病患者外周血ILC亞群比例和細胞因子相關性分析

SLE病患者外周LC2與ILC3百分比跟血清當中IL-4水平呈現相關性，ILCI與血清IL-4水平沒有顯著相關性，其他亞群和IL-33和干擾素-γ也沒有顯著相關性，P>0.05。

4 討論

SLE其實為免疫調節系統錯亂的自身免疫性并贈，呈現的特性為形成很多自身抗體與多系統受累，且病患者身體內T、B細胞異?；罨?，同時跟細胞因子的變化有關聯。通過探究表明，先天細胞與淋巴細胞相互間放大的互相影響促使耐受性欠缺，造成本身反應性B細胞激活與連續產生。此次探究得出結論：ILC各亞群在SLE病患者外周血中的比例跟健康對照組對比差異具備統計學意義。

ILC有不一樣活動度SLE病患者外周血比例區別性非常顯著，干擾素-γ為介導細胞之間互相影響的關鍵因子，經過調整TLR，抗原呈遞與淋巴細胞募集到生發中心，推動身體內部抗體形成?；诖?，干擾素-γ為驅動消耗性病癥與整體身體炎癥的關鍵原因，此次探究結果也證實了干擾素-γ在SLE病發中的影響。

ILC2分泌IL-4、-5和-9等2型細胞因子，部分炎性細胞因子介導各種炎性反應，可影響到T、B與DC等細胞。其DC細胞與單核細胞分解的IL-I2影響下，增強分解干擾素-γ的功能。其他探究得出結論，可塑性ILC2s能夠下調CATA3的表達，致使細胞走向類ILCI樣的狀態。不僅如此，SLE病患者血清中IgG水準隨著ILC百分比例上升而提升，同時SLE活動組外周血C3補體水準對比SLE穩定組顯著下降，致使保護性免疫轉向病理狀態。

ILC3亞群具備非常強的可塑性與異質性，其在特定環境中轉向ILC1群，具體探究表明，NKp46+T-be+ex-ILC3針對促炎細胞因子刺激的應答中失去了RORyt表達，且在功能與表型跟ILC105很相似。除了1L-17與-22，NCR+IILC3與ex1LC3也可分泌干擾素-γ與-ɑ加入到保護性免疫，隨之慢性活化的ILC3引導爆發性炎性反應造成病癥產生。ILC3活化后的分解IL-2、-6、-17、-10，有助于T與B細胞應答的啟動或調整。

通過此次探究得出結論，ILC細胞百分比與疾病活動度有一定相關性，ILC百分比提升并無法控制自身炎性反應，同時不一樣病癥活動度情況下，各亞群差異化完全不同。ILC不但呈現出百分比提升，同時跟適應性免疫反應細胞相互間的影響逐漸增強，由此得出結論，ILC細胞具備“雙刃”功能，其在SLE發病機制中影響需要深入探究。

5 總結

總而言之，SLE病患者尤其在病癥發病期內，身體內總T細胞及其亞群數量分配出現了異動情況，T細胞亞群、B細胞及其NK細胞的變動在病患者發病當中產生了巨大影響。當檢測病患者外周血淋巴細胞亞群，有針對性地全方位掌握機體免疫情況，才能精準地推斷出病情與指導臨床診治起到了積極的作用。

參考文獻：

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[3]周紅霞.系統性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細胞中TLR9的表達及其臨床意義[J].海南醫學院學報，2012，18（11）.

作者簡介：

李璐，女，漢族，河北省保定市人，碩士研究生，主治醫師，研究方向：狼瘡腎炎治療。

杜勇，男，漢族，河北省保定市人，碩士研究生，講師，主治醫師，研究方向：狼瘡腎炎治療。