益智清心顆粒對自發性高血壓大鼠主要安全性指標的影響

郭曼萍，趙俊男，施偉麗，陳 瑤，徐鳳芹，叢偉紅

益智清心顆粒源于清宮壽桃丸，為國醫大師陳可冀院士臨床治療高血壓、認知障礙等疾病的經驗方。清宮壽桃丸由人參、天冬、麥冬、枸杞子、地黃、當歸、分心木等組成，是乾隆皇帝的宮廷保健養生秘方，陳可冀院士在20世紀80年代主持挖掘清代宮廷醫藥檔案時將其整理并用于大眾。相關研究表明，清宮壽桃丸治療老年認知障礙、高血壓、冠心病、糖尿病、脂代謝異常、慢性腎功能不全等方面具有較好的療效[1-6]。

中藥的有效性與安全性問題一直是關注的熱點。目前，臨床常借助常規血液學分析、血液生化檢測、尿樣分析和病理學檢查等判斷中藥的安全性[7]，血液中溶血相關指標、肝腎功能相關指標是常用的安全性評價指標。本研究觀察對自發性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)給予益智清心顆粒干預11周后外周血紅細胞、血紅蛋白、膽紅素、肝腎功能等指標改變，探討用藥安全性，以期為臨床應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料及儀器 2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)K3采血管，生產批號D160433W；5 mL血清促凝管，生產批號A16013WC，由西苑醫院提供；全自動生化分析儀(瑞士羅氏公司Cobas8000)、全自動血液分析儀(日本東亞SYSMEX株式會Sysmex XE-5000)由西苑醫院檢驗科提供。

1.2 實驗動物 12周齡無特定病原體(SPF)級Wistar Kyoto(WKY)大鼠12只，SPF級SHR大鼠60只，雌雄各半，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。SPF級動物房適應性飼養3 d后分為6組：對照組(WKY大鼠)、模型組(SHR大鼠)、厄貝沙坦+多奈哌齊組(SHR大鼠)、益智清心顆粒低劑量組(SHR大鼠)、益智清心顆粒中劑量組(SHR大鼠)、益智清心顆粒高劑量組(SHR大鼠)，每組12只，雌雄各半。給予規律光照(晝夜各12 h)，自由飲食飲水，環境溫度(20±2)℃，相對濕度45%～70%。

1.3 實驗藥物及給藥方法 厄貝沙坦片(安博維)，每片0.15 g，賽諾菲(杭州)制藥有限公司生產，生產批號：J20130049；鹽酸多奈哌齊(安理申)，每片5 mg，衛材(中國)藥業有限公司生產，生產批號：H20070181；益智清心顆粒(組成：枸杞子、益智仁等)，由中國中醫科學院西苑醫院制劑室提供。厄貝沙坦+多奈哌齊組按厄貝沙坦片15.50 mg/(kg·d)+鹽酸多奈哌齊0.52 mg/(kg·d)灌胃給藥；益智清心顆粒低劑量組、益智清心顆粒中劑量組、益智清心顆粒高劑量組分別按益智清心顆粒1.82 g/(kg·d)、3.64 g/(kg·d)、7.28 g/(kg·d)灌胃給藥，模型組及對照組給予等體積生理鹽水灌胃。所有大鼠均給藥11周。

1.4 觀察指標

1.4.1 大鼠體重 各組大鼠每周測量體重1次，觀察各組大鼠體重變化。

1.4.2 大鼠溶血相關指標 實驗結束后腹主動脈采血，檢測血漿紅細胞計數、血細胞比容、平均紅細胞體積、紅細胞體積分布、紅細胞分布寬度；血紅蛋白、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度；血清直接膽紅素、間接膽紅素及總膽紅素水平。

1.4.3 大鼠肝腎功能指標 實驗結束后腹主動脈采血，檢測肝功能指標：天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、γ谷氨酰轉肽酶(γ-GT)；檢測腎功能指標：肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 結 果

2.1 藥物對大鼠體重的影響 分別統計雄性和雌性大鼠體重，結果顯示：與對照組比較，模型組雌鼠體重降低(P<0.01)；與模型組比較，第1周～第4周厄貝沙坦+多奈哌齊組和益智清心顆粒低劑量組、益智清心顆粒高劑量組雌鼠體重增加(P<0.01)。詳見表1。與模型組比較，厄貝沙坦+多奈哌齊組和益智清心顆粒低劑量組、益智清心顆粒中劑量組、益智清心顆粒高劑量組雄鼠體重增加(P<0.05或P<0.01)。詳見表2。

表1 各組雌鼠體重比較(±s) 單位：g

表2 各組雄鼠體重比較(±s) 單位：g

2.2 益智清心顆粒對溶血相關指標的影響 與對照組比較，模型組紅細胞分布寬度降低(P<0.01)。詳見表3。與模型組比較，益智清心顆粒低劑量組平均血紅蛋白濃度降低(P<0.05)。詳見表4。與對照組比較，模型組間接膽紅素水平升高(P<0.05)；與模型組比較，益智清心顆粒高劑量組間接膽紅素、直接膽紅素、總膽紅素水平降低(P<0.05或P<0.01)。詳見表5。

表3 各組大鼠紅細胞相關指標比較(±s)

表4 各組大鼠血紅蛋白相關指標比較(±s)

表5 各組大鼠膽紅素相關指標比較(±s) 單位：μmol/L

2.3 藥物對大鼠肝功能的影響 與對照組比較，模型組AST、γ-GT水平升高(P<0.01)。詳見表6。

表6 各組大鼠肝功能指標比較(±s) 單位：U/L

2.4 藥物對大鼠腎功能的影響 與對照組比較，模型組尿素氮、尿酸水平升高(P<0.01)。詳見表7。

表7 各組大鼠腎功能指標比較(±s)

3 討 論

目前，我國中醫藥事業發展迅速，同時中藥的安全性問題備受關注[8]。傳統觀念認為中藥是天然的、無毒副作用，近年來發生的中草藥不良反應給人們帶來疑惑和憂慮，因此需要科學評價中藥療效。益智清心顆粒具有補腎生精、清心肝之火的功效，陳可冀院士臨床主要用于高血壓病、老年性癡呆等心腦血管疾病的治療。相關研究表明，SHR可作為認知功能紊亂治療藥物的動物模型[9-12]。本研究以SHR為動物模型，給藥11周后觀察益智清心顆粒對SHR紅細胞、血紅蛋白、血清膽紅素指標的影響，同時監測肝、腎功能相關指標。

溶血為紅細胞完整性損害。紅細胞功能障礙與心血管疾病嚴重并發癥密切相關，如高血壓、出血、腦卒中、心律失常和炎癥，尤其是老年病人[13]。血紅蛋白在血管內溶血期間從細胞釋放到血漿中，通過促進血小板聚集和黏附，增加血液黏度，導致微循環功能障礙，增加外周阻力，致血壓升高[14]。血清膽紅素包括直接膽紅素和間接膽紅素，主要是由體內衰老的紅細胞發生裂解釋放出的血紅蛋白產生[15]。機體總膽紅素及直接膽紅素濃度升高反映較嚴重的肝細胞損害[16-18]。本研究結果顯示，與模型組比較，益智清心顆粒低劑量組平均血紅蛋白濃度降低(P<0.05)，益智清心顆粒高劑量組膽紅素相關指標水平降低(P<0.05)；提示服用益智清心顆粒未導致明顯溶血反應，平均血紅蛋白濃度、膽紅素相關指標水平下降可能是益智清心顆粒的藥效作用。

藥物常見的不良反應是對肝腎功能的影響[19-20]。本研究結果顯示，模型組AST、γ-GT、尿酸、尿素氮水平較對照組升高，提示隨著血壓升高，模型組肝腎功能出現一定損傷；益智清心顆粒組與模型組ALT、AST、γ-GT、尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，提示給予益智清心顆粒治療未加重SHR肝腎損害。

本研究中益智清心顆粒高劑量組、益智清心顆粒低劑量組雌鼠體重與益智清心顆粒高劑量組、益智清心顆粒中劑量組、益智清心顆粒低劑量組雄鼠體重較對照組升高，可能與給予益智清心顆粒治療降低了SHR自發性活動有關[21]。

綜上所述，經過11周的益智清心顆粒灌胃給藥，SHR肝腎功能未見明顯異常，且未發生溶血反應，說明益智清心顆粒具有一定的安全性。本研究給予益智清心顆粒治療未發現明顯不良反應，以上數據為益智清心顆粒在高血壓合并認知障礙的臨床應用提供了依據。