貓細小病毒病的研究進展

王志強，任建煒，溫建新

(青島農業大學動物醫學院，山東青島 266109)

貓細小病毒病(Feline panleukopenia，FP)又稱貓泛白細胞減少癥、貓瘟、貓傳染性腸炎，是由貓細小病毒(Feline Panleukopenia Virus，FPV)引起的一種急性高度接觸性傳染病，1歲齡以下的貓最容易感染，尤其是3～6月齡的幼貓，病貓主要表現為機體內白細胞數量急劇減少，FPV還對貓科動物的消化道系統造成巨大傷害，病貓表現出嚴重的消化道癥狀[1]。FP已經被歐洲、美洲的多個國家定義為貓最嚴重的傳染病之一。在我國FP全年均能發病，在每年的冬季及初春季節多發。目前FP的病例量占貓傳染病病例量的60%以上，是名副其實的貓科動物的頭號殺手。

1 貓細小病毒病的臨床癥狀

FPV侵入動物機體后通常會有1周左右的潛伏期，有的動物會長期少量帶毒[2]，當外界環境出現變化或出現應激反應時則發病。由于個體因素、外界環境因素、病毒毒株因素等影響，患病貓表現的臨床癥狀也多種多樣，通常會呈現雙相型熱，先升至40 ℃左右的高溫，隨后體溫恢復正常，1～2 d后又升至高溫狀態。發病早期通常會出現精神沉郁、食欲減退，甚至廢絕、腹瀉的癥狀，緊接著會出現脫水、貧血、頑固性腹瀉、嘔吐的癥狀，之后會出現便血、吐血、眼球下陷、體溫降低等嚴重癥狀，此時查血常規會發現白細胞數量降至2.0×109/L以下(正常為5.50×109/L～19.50×109/L)，淋巴細胞和嗜中性白細胞減少的數量最多[3]，接著白細胞會進一步降低，當白細胞數量降至1.0×109/L以下時，死亡率接近100%。最急性的病例常常會不見任何癥狀而突然死亡，常被懷疑為中毒死亡。妊娠母貓常會表現流產的癥狀，因為FPV可透過血胎屏障進行垂直傳播感染[2]。

2 貓細小病毒病的病理變化

被FPV感染的貓，尸體外觀通常為被毛粗亂，暗淡無光，出現眼球下陷，皮下組織干燥的脫水癥狀。剖檢的病理變化主要在消化道，表現為胃腸擴張，腸黏膜充血出血、壞死，腸系膜水腫?？漳c和回腸處出現滲出，腸絨毛變短或消失，腸壁增厚。腸系膜淋巴結腫大、充血出血，甚至壞死，呈現大理石樣花紋。肝臟、腎臟等實質器官變化不是很明顯，只是出現充血癥狀，脾臟會有針尖樣出血點[4]。

3 貓細小病毒病的臨床檢測方法

FP的檢測方法有快速試紙板檢測法、血凝和血凝抑制(HA-HI)試驗、電鏡觀察、免疫熒光試紙檢測、實時熒光PCR檢測等，但基于操作的方便性及營收狀況，主要的臨床確診方法有膠體金試紙板檢測、免疫熒光試紙檢測、實時熒光PCR檢測等方法。

3.1 膠體金試紙板檢測

膠體金試紙板檢測實際是利用膠體金免疫層析法的技術，以膠體金作為示蹤標志物，樣本抗原滴加到樣品孔內，發生層析作用至膠體金標記的抗體處與之結合，形成金標抗原抗體復合物，在檢測線處與固定抗體結合出現結果，層析至對照線處與二抗結合出現對照結果[5]。此方法操作簡單，檢測結果出具迅速，約5～10 min即可判定結果，當病毒含量較低時，容易出現假陰性或淡淡的一條標記，容易導致寵物醫生漏診，膠體金試紙板檢測方法逐漸被替代。

3.2 實時熒光PCR檢測

實時熒光PCR檢測是通過將標有熒光素的Taqman探針與處理后的抗原DNA、正反向引物混合，進行DNA擴增，擴增后DNA酶會將Taqman探針切斷，使得熒光素游離在體系內，進而通過特定光的照射，產生熒光，隨著反應的進行，熒光會呈現指數式增長，進而求得Ct值[6]。實時熒光PCR的檢測結果十分準確，即使較低含量的病毒亦可以檢出，并且可以同時檢測多個樣本，但目前儀器購買和使用成本均較高，市面上常見的8孔儀器大約需要6萬元，試劑均價也在100元/個左右，并且操作耗時相對較長，寵物醫院接受率較低，目前只有少數醫院使用。

3.3 免疫熒光試紙檢測

免疫熒光試紙檢測是一種新興的檢測技術，具有操作簡單、準確率相對較高的優點，目前被大多數醫院接受。免疫熒光試紙檢測采用的是熒光免疫層析技術，該試紙板由樣品墊、含熒光微球交聯的檢測抗體標記墊、含二抗的硝酸纖維素、吸水紙及底板組成。具體原理如下：在加樣孔處滴入抗原溶液，抗原溶液沿層析方向擴散至標記墊處，此時抗原被抗體結合形成抗原-抗體-熒光微球復合物，該復合物繼續擴散至硝酸纖維素膜處，與二抗結合，形成二抗-抗原-抗體-熒光微球復合物，未被二抗標記的復合物繼續層析被吸水紙吸收，最后根據熒光信號強度可以檢測出抗原的濃度，此法原理與膠體金試紙板類似，不過相比較而言，它的靈敏性比膠體金試紙板高很多。有研究表明，免疫熒光試紙板的靈敏度是普通膠體金試紙板的10倍，免疫熒光試紙板比實時熒光PCR檢測節省大量金錢成本和時間成本，正在被快速普及[7]。

4 貓細小病毒病的治療

臨床上對FP的治療一般都遵循對癥治療原則，采用鎮痛消炎、適當止吐、強力止瀉、營養支持、補液補鉀的治療方法?；疾∝堅谇?～2 d的治療是非常關鍵的，如果治療得當，病情將會逐漸好轉，體內白細胞數量將恢復正常，預后也將會良好；倘若治療不當或者遇到強毒株感染，在第3～4 d患貓就會出現便血、吐血等癥狀，白細胞數量會迅速下降至3.0×109/L以下，甚至會低至1.0×109/L，之后常常會愈后不良；并且被FPV感染后的第2～3 d，患貓就可對外界排毒，造成其他寵物貓的感染，最長可達30 d左右[8]。所以住院治療既是治療的需要，也是對家庭環境的保護。被FPV感染后的治療方案分為特異性治療和對癥治療。

特異性治療主要是抗病毒治療，首選是貓重組干擾素-ω(Feline recombinant interferon-ω, feIFN-ω)、FPV單克隆抗體等生物制品。臨床試驗發現feIFN-ω具有廣譜的抗病毒作用，對FP的治療有較好的效果，它主要通過與靶細胞表面的受體結合、調節機體的免疫效果、強化免疫細胞活性、誘導細胞產生抗體蛋白，從而從多方面抑制病毒的復制。feIFN-ω最早是在1994年由日本批準生產的用于貓杯狀病毒治療的生物制劑，慢慢的經過多年發展，也被用作FP病例的治療[9]。在國內的試驗研究證實，feIFN-ω對FPV有很好的臨床效果，feIFN-ω對 γ-球蛋白和免疫球蛋白的產生有較好的刺激作用[10]；其次，特異性治療可以選用FPV單克隆抗體和FPV血清等。目前常用的FPV單克隆抗體的效果不如CPV單克隆抗體效果已成為獸醫界的共識，許多生物制品廠家也在加速研發，并進行大量臨床投放試驗，其臨床效果還有待證實。

對癥治療主要是輔助性抗菌治療，這是治療方案中重要的一環，FPV入侵消化道系統，會給腸道帶來巨大的破壞作用，使得黏膜屏障損傷，有害菌會輕易的進入血液循環系統，造成敗血癥的發生，所以使用抗菌藥物會起到至關重要的作用。常用的藥物有頭孢菌素類藥物如頭孢噻呋、頭孢喹肟等，氟喹諾酮類藥物也可以起到較好的效果[11]，這些藥物對腸道內的厭氧菌、革蘭氏陰性菌的作用效果良好，對敗血癥的預防起到關鍵作用。針對嘔吐腹瀉的癥狀，常采用強力止瀉、適度止吐的方法，避免電解質的大量流失，止瀉藥物常采用穿心蓮注射液等藥物，可以在短時間內達到止瀉的效果。止吐一般采用檸檬酸馬羅匹坦等藥物，但應該注意使用的用量和頻率，過分的止吐會導致患貓出現腸套疊、腸梗阻等癥狀，更容易引起敗血癥的發生，所以在治療時應該時常關注寵物狀態，每天用B超進行掃查，降低發生率。對于補液常采用靜脈滴注5%的葡萄糖溶液、0.9%的生理鹽水溶液和乳酸林格溶液進行補液，靜脈補液可以較好的補充丟失的水分，調節PH值，補充流失的電解質；補液的量會參照患貓的脫水程度進行判定，通常為80～100 mL/kg；當血液膠體滲透壓出現變化時，還要對血漿蛋白進行補充，常用的有白蛋白和球蛋白等[12]。當出現便血癥狀時需要對其進行凝血治療。

5 貓細小病毒疫苗的研究進展

5.1 傳統疫苗概述

FP主要是通過注射疫苗的方式進行預防。目前預防FP的傳統疫苗主要有兩種，一種是美國碩騰公司生產的“妙三多”疫苗，此疫苗為滅活苗，不易產生病毒擴散的風險；另一種是美國默沙東(原荷蘭英特威)公司生產的“貓三聯”疫苗，它是一種弱毒苗?！懊钊唷笔俏覈壳拔ㄒ辉谟玫囊豢頕P疫苗?！懊钊唷币呙绯丝梢灶A防貓細小病毒病外，還可以預防貓杯狀病毒病和貓皰疹病毒病?！懊钊唷币呙绲某Ｒ幟庖叱绦驗椋贺?月齡時進行首免，3月齡時進行二免，4月齡時進行三免，如果錯過首免日期，二免、三免日期也隨之后延?；A免疫完成后，以后每年再進行加強免疫1次?！懊钊唷币呙绲腇PV毒株采用的是標準株FPV-CU4毒株，FPV-CU4毒株是在1990年報道的，目前FPV-CU4毒株被用作多種抗體的制備及疫苗生產。

5.2 新型疫苗概述

隨著分子生物學的飛速發展，許多學者正在加緊研制亞單位疫苗、基因工程疫苗等新型疫苗，用于FPV的預防?；蚬こ桃呙缡侵笇⒒虮磉_的蛋白加以純化，制作成抗原，從而達到制備新型疫苗的目的，這種疫苗具有安全性高、可量產等特點[13]。曾有報道指出，昆蟲的細胞表達系統可以表達VP2蛋白，作為制備疫苗的免疫原[14]。將表達的VP2蛋白注射小鼠，采集小鼠血清可將VP2的特異性中和抗體生產出來，而且產生速度較快[15]?；蛞呙缬址Q作核苷酸疫苗，是指將含有抗原基因的序列導入質粒中，以質粒作為載體注入到宿主體內，誘導產生免疫應答，達到預防疾病的目的[15]。目前我國關于VP2基因疫苗的研究表明將VP2基因的主要抗原表位克隆在表達載體pVAX1中，結果顯示能夠在細胞中產生較好的免疫原性，也可以在小鼠體內成功表達[16]。但是目前這些新型疫苗都還處于試驗階段，并沒有真正用于臨床，但這些技術已漸趨于成熟，相信隨著科技的不斷發展，新型疫苗的成本也將大大降低，最終實現臨床應用。