“壯醫水蛭活體療法 ”治療用水蛭四級凈化流程

周維海 李煥華 梁子茂 潘韋情 梁江洪

1.廣西科康科技集團有限公司，廣西 南寧 530007；2.廣西國際壯醫醫院,廣西 南寧 530001

水蛭，俗稱螞蟥，而螞蟥唾液腺分泌的水蛭素，則是當今世界上發現的抗凝血酶活性最高的天然物質，從而注定了其與醫藥領域有著密切的淵源。

人類在醫療發展進程中應用水蛭的歷史可追溯到古埃及、古羅馬和古希臘時期。法國外科醫生Francois Broussais(1772～1838)于19世紀初將水蛭吸血應用于人體治療而引起轟動，2004年8月，法國Ricarimpex公司飼養的水蛭獲得美國FDA醫用許可證及國際ISO9001認證[1]。經現代藥理學研究[2]表明，吸血水蛭在吸吮血液分泌的唾液里含有許多復合狀態的生物活性成份，主要為天然水蛭素，它是一種小分子單鏈多肽，是顯著并專一的凝血酶特異性抑制劑，也是迄今為止人類發現的最強的抗凝血天然物質，且引起出血的副作用較小。另外還有抑菌成分、鎮痛成分、抗血栓、抗腫瘤等等。俄羅斯國家衛生部也已正式批準部分水蛭類藥物可用于冠心病等的臨床治療[1]。

在中國，水蛭活體療法及入藥使用也見諸多部典籍，如《本草拾遺》、《神農本草經》、《千金方》等等均有外治癰疽痞腫，內治血瘀經閉的作用[3]。水蛭生物療法又稱“蜞針療法”，在廣西等壯民族地區，人們稱為“壯醫水蛭治療”或“壯醫水蛭活體療法”，主要是采用生長于本地、也是我國古代用于臨床治療主要品種之一的“金邊螞蟥”(菲牛蛭)在人體的特定穴位上進行叮咬吸血、并分泌水蛭素等活性物質而達到治病的目的[7]。2011年，金邊螞蟥(菲牛蛭)作為廣西特色藥用動物資源被收錄于《廣西壯族自治區壯藥質量標準》第二卷[8]；2013年被收錄于《云南省中藥材標準》[9]。近年來，由于“壯醫水蛭活體療法”簡、便、驗、廉的特點，其運用越來越廣泛，主要涉及痛癥、類風濕性關節炎、痛風急性發作、外科術后、皮膚病等，廣西壯族自治區已將其列入民族醫醫療服務項目[6]。因此，對于治療用的活體水蛭的需求量越來越大，質量要求也越來越高。而在我國，該領域的相關標準尚屬空白，鑒于此，為了配合完成廣西國際壯醫醫院承擔的“活體水蛭療法治療肌筋膜炎的臨床研究”(編號：Z20180119)課題，廣西科康科技集團有限公司在菲牛蛭養殖、凈化及天然水蛭素提取二十多年耕耘的基礎上，進一步從各階段梳理優化菲牛蛭凈化流程，形成專供“壯醫水蛭活體療法”人體治療的菲牛蛭活體四級凈化相關標準或指標，填補國內“醫用水蛭”標準的空白。

1 “壯醫水蛭活體療法”治療用水蛭四級凈化流程規范

在普通藥用水蛭養殖標準的基礎上，必須經過一、二、三、四級凈化，經第三方專業機構對相關病原微生物的檢驗合格后，方能作為“醫用水蛭”用于患者身體進行活體治療。

本流程主要適用于廣西科康科技集團有限公司提供給廣西國際壯醫醫院承擔的“活體水蛭療法治療肌筋膜炎的臨床研究”(編號：Z20180119)課題及所有使用于人體治療的活體菲牛蛭的凈化養殖過程。該公司生產的治療用活體菲牛蛭依次嚴格經過以下4個等級的養殖周期總共4個月的凈化養殖，最后經第三方檢測不含有特定的病原微生物和寄生蟲。

本流程主要對菲牛蛭的成蟲選擇、場地、環境、包括溫度、空氣、水質以及凈化養殖的技術要求、養殖周期、質量控制、衛生檢測等方面進行規范化、標準化認定。分階段描述如下。

1.1 一級凈化 只經過一級凈化養殖的活體水蛭還不能用于水蛭活體治療，必須輸送到第二級凈化養殖室繼續進行凈化養殖。

1.1.1 活體成蟲選擇 挑選本公司陸川養殖場按“廣西菲牛蛭規范化養殖標準操作規程(sop)”[4]養殖、繁育二代以上的菲牛蛭(金邊螞蟥)健康成蟲，體重4～8 g。

1.1.2 養殖環境 場地： 符合養殖環保要求的室內飼養池。單池內空：2 m(長)×1 m(寬)×0.15 m(深)， 貼白色瓷磚，設獨立給排水和防逃設施；室內門窗完好，有防蟲紗網，有強制通風設施； 溫度：室內溫度控制在17～32 ℃； 空氣：保持空氣自然流通、無污染，室內無異常臭味；水質：100 m深以下地下水源，PH值6～8(呈中性)，含鹽量小于4%，溶氧量 1 mL/L以上；噪音：養殖場地禁止高聲喧嘩、機車馬達等噪音；光線： 避免陽光直射，盡量創造黑暗環境。

1.1.3 養殖技術要求 放養前準備： 放養前5～10 d干池并進行消毒處理，用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm強氯精消毒養殖池及其周圍環境。放養前2天水池先注水；養殖密度： 500～600條/平米；換水頻率： 溫度不同可以分為幾種情況如表1。

表1 一級凈化不同環境溫度換水頻率

換水之前應將水蛭和飼養池里面的排泄物用水清洗干凈，避免雜質的殘留；投喂：整個養殖周期不喂食，待其體內雜物自然排泄凈化；監察：養殖周期中每天至少進行2次巡檢，發現有病、死或體型不符合4～8 g范圍者要及時檢出并妥善處理。本養殖周期內不能中途補充新的水蛭到養殖池內；養殖周期：30 d；質控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，體長8～16 cm。進入下一環節凈化養殖；記錄表：做臺賬記錄，分工作記錄和工作報表(報表另印)。內容包括巡回檢查、清洗換水、生長情況、病死情況、現場環境狀況(溫度、濕度、空氣質量等)，所飼養的水蛭做到分批登記，可追溯來源去向。

1.1.4 飼養員要求 飼養員要求身體健康，無傳染性疾病，無外傷，注意個人衛生，進入養殖區域必須穿戴統一的工作服裝。飼養周期內采取飼養員負責制，即養殖周期內不能換人，飼養員要對本批次養殖負責，是本批次產品質量問題的直接追責者。

1.2 二級凈化養殖 經過二級凈化養殖的活體水蛭還不能用于水蛭活體治療，必須輸送到第三級凈化養殖室繼續進行凈化養殖。

1.2.1 活體成蟲選擇 經第一級凈化飼養后合格健康的金邊螞蟥(菲牛蛭) ，體重在3～6 g之間。

1.2.2 養殖環境 同第一級凈化養殖要求。

1.2.3 養殖技術要求 放養前準備：同第一級凈化養殖；養殖密度：每平方米水面放養400～500條；換水頻率： 溫度不同可以分為幾種情況如下表2。

表2 二級凈化不同環境溫度換水頻率

投喂 ：整個養殖周期不喂食；監察：養殖周期中每天至少進行2次巡檢，發現有病、死或體型不符合3～6 g范圍者要及時檢出并妥善處理，本養殖周期內不能中途補充新的水蛭到養殖池內；養殖周期：30 d；質控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，活力好；記錄表：同第一級養殖凈化要求。

1.2.4 飼養員要求 同第一級養殖凈化要求。

1.3 三級凈化養殖 只經過三級凈化養殖的活體水蛭還不能用于水蛭活體治療，必須輸送到第四級凈化養殖室繼續進行凈化養殖。

1.3.1 活體成蟲選擇 經第二級凈化飼養后合格健康的金邊螞蟥(菲牛蛭)，體重2～6 g。

1.3.2 養殖環境 場所：選擇符合養殖環保要求的養殖室，安裝冷暖空調，防蟲、通風設施等。統一使用5000 mL的專用玻璃凈化養殖瓶飼養。養殖瓶按要求做好標簽統一整齊擺放在專用貨架上； 空氣：保持空氣自然流通、無污染，室內無異常臭味；溫度：室溫20～30 ℃；水質：同第一級凈化要求；噪音：養殖場地禁止高聲喧嘩、機車馬達等噪音；光線：避免陽光直射，盡量創造黑暗環境。

1.3.3 養殖技術要求 養殖容器：5000 mL玻璃瓶，提前5 d用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm強氯消毒，并清洗干凈。放養前2 d養殖瓶先注水；養殖密度：30～50條/瓶；換水頻率：溫度不同可以分為幾種情況如下表3。

表3 三級凈化不同環境溫度換水頻率

投喂 ：整個養殖周期不喂食；監察：養殖周期中每天至少進行2次巡檢，發現有病、殘及過大過小的應檢出妥善處理，中途不能補充新的水蛭到養殖瓶內。周期內發現有病死水蛭的，該養殖瓶的水蛭終止凈化養殖并妥善處理；養殖周期：30 d；質控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，活力好；記錄表：同第一級養殖凈化要求。

1.3.4 飼養員要求 同第一級養殖凈化要求。

1.4 四級凈化養殖 只有經過第四級凈化養殖并檢驗合格的活體水蛭才是合格的醫用水蛭，可以安全用于水蛭活體治療。

1.4.1 活體成蟲選擇 經第三級凈化飼養后合格健康的金邊螞蟥(菲牛蛭) ，體重2～5 g。

1.4.2 凈化養殖環境 場所：選擇符合養殖環保要求的類GMP實驗生產場所，空氣：潔凈程度達10萬級以上，統一使用5000 mL的專用玻璃凈化養殖瓶飼養。養殖瓶按要求做好標簽統一整齊擺放在專用貨架上；溫度：室溫20～30 ℃；水質：100 m深以下地下水源，經過RO膜凈化處理，達飲用純凈水要求,PH值呈中性，溶氧量為1 mL/L以上；噪音：養殖場地禁止高聲喧嘩、機車馬達等噪音，室內禁用電子電器設備；光線：避免陽光直射，盡量創造黑暗環境。

1.4.3 養殖技術要求 養殖容器：5000 mL玻璃瓶，提前5 d用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm強氯精消毒，并清洗干凈。放養前2天養殖瓶先注水；養殖密度：20～30條/瓶；換水頻率：溫度不同可以分為幾種情況如下表4。

表4 四級凈化不同環境溫度換水頻率

投喂：同第一級養殖凈化要求，整個周期不投喂；監察：每天至少進行2次巡檢，發現有病、殘及過大過小的應檢出妥善處理，中途不能補充新的水蛭到養殖瓶內。周期內發現有病死水蛭的，該養殖瓶的水蛭終止凈化養殖并妥善處理；養殖周期 ：30 d；質控檢測：外觀性狀健康正常，體長直，體長7～15 cm；記錄表：同第一級養殖凈化要求。

1.4.4 飼養員要求 同第一級養殖凈化要求。

2 病原菌及微生物檢測

廣西科康科技集團有限公司出品的活體治療用菲牛蛭是委托第三方微生物權威檢測機構，對活體進行“沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌、溶血性鏈球菌、副溶血性弧菌、單核細胞增生李斯特氏菌、致瀉大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌”等九項專業級檢測，以確保每條菲牛蛭均達到人體治療級別。

3 “治療用菲牛蛭”四級凈化流程簡圖

二代以上人工繁育健康菲牛蛭成蟲→一級凈化養殖(無喂食，500～600條/平方米池養30 d)→二級凈化養殖(無喂食，400～500條/平方米池養30 d)→三級凈化養殖(無喂食，30～50條/5000 mL凈化養殖瓶相對恒溫環境養30 d)→四級凈化養殖(無喂食，20～30條/5000 mL凈化養殖瓶相對恒溫，10萬級無菌環境下養殖30 d)→按要求檢驗合格→出品。

4 結語

“壯醫水蛭活體療法”是一種外治療法，作為一種侵入性外治療法，其安全性及可操作性是醫生和患者關注的重點之一，特別是部分患者在生活過程中曾經有過活體水蛭叮咬的經歷，會產生比較大的心理恐懼。如何消除患者的心理影響并切實保護患者的生命安全，是治療必須要首先解決的問題。廣西科康科技集團有限公司長期致力于活體水蛭等的研究，而水蛭的凈化養殖是保證臨床活體治療安全的關鍵所在，所以一定要有科學、規范的操作規程。本流程于2016年修訂執行，至2018年1月為配合提供給廣西國際壯醫醫院承擔的“活體水蛭療法治療肌筋膜炎的臨床研究”(編號：Z20180119)課題[5]用的菲牛蛭活體而進一步優化，并沿用至今，共為廣西國際壯醫醫院、百色市中醫醫院、桂林市南溪山醫院及各級各類診所、中醫館、工作室等提供科研及治療用菲牛蛭活體約127011條，參與體驗“壯醫水蛭活體療法”約21168人次，未出現出血、感染、嚴重過敏等不良反應?！皦厌t水蛭治療”等民間療法，綠色環保、安全可靠，“簡、便、廉、驗”，值得進一步研究推廣。