MAGE-C1、MAGE-C2 在乳腺癌組織中表達水平及意義

陳慰慰，袁小兵，許 偉

（南通大學附屬如皋醫院，江蘇省如皋市人民醫院普外科，如皋 226500）

流行病學研究證實，2010～2017 年我國乳腺癌的發病率高達283～482/10 萬人［1，3］。臨床乳腺癌的發病率可以顯著降低乳腺癌患者的生活質量，提高乳腺癌患者的疾病發展率［3，4］。在研究乳腺癌發病機制的過程中，發現各種細胞因子的表達可能影響乳腺癌的惡性程度，進而促進乳腺癌的發生發展。黑色素瘤抗原基因（MAGE）是睪丸相關因子家族成員，其能夠通過激活癌細胞內的腫瘤信號通路，提高乳腺導管上皮細胞核DNA 的轉錄激活速度，進而促進乳腺癌的臨床病理特征的進展［4］。部分研究人員認為，MAGE 在乳腺癌和肝細胞癌中的表達增加與乳腺癌、肝癌患者的生存密切相關［6］，但對于MAGE 的表達與乳腺癌病情發生發展的關系研究不足。為了揭示MAGE 的表達與乳腺癌病情發生發展的關系，為臨床上乳腺癌患者的診療提供理論方面的參考，本次研究選取2017 年1 月至2018 年4 月在我院治療的乳腺癌患者78 例，探討了MAGE 不同亞型在乳腺癌中的表達情況，并分析了MAGE 與乳腺癌患者臨床病理特征的關系，相關報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月～2018 年4 月在我院治療的乳腺癌患者78 例（乳腺癌組），年齡30～70 歲，平均年齡46.20 歲，納入標準：（1）均經病理組織學確診；（2）女性患者；（3）術前未行放化療等治療；（4）臨床病理資料完整；（4）患者及家屬知情同意。排除標準：（1）合并有其他系統惡性腫瘤；（2）臨床病理資料欠缺。同時選取乳腺良性病變患者70 例作為對照組，年齡31～69 歲，平均年齡45.50 歲。

1.2 免疫組化染色 室溫下采用石蠟進行連續切片，脫蠟至水后采用H2O2孵育10min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，利用8%的蛋白粉封閉液（商品名：BSA 購自南京博奧生物科技公司）封閉2h，倒去封閉液后加入一抗（兔來源 濃度1：1000-1500），4℃冰箱過夜，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，加入二抗（鼠來源 1：400-500），室溫孵育20～30min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標記物，室溫孵育10min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，滴加顯色劑（DAB 購自南京博奧生物科技公司），復染，脫水，封片。

1.3 結果判斷 MAGE-C1、MAGE-C2 主要表達于胞質，部分可表達于胞核；采用半定量積分方法，染色強度：無著色：0 分、淡黃色：1 分、棕黃色：2 分、棕褐色：3 分；陽性細胞比例：＜5%為0 分、6%～10%為1 分、11%～20%為2 分、21%～50%為3 分、＞50%為4 分。染色強度和陽性比較比例得分之和，≥3 分為陽性表達。1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0 進行統計分析，MAGE-C1、MAGE-C2 蛋白陽性表達率等比較使用χ2檢驗，MAGE-C1 和MAGE-C2 相關性采用Spearman 秩相關分析。檢驗水準α為0.05。

2 結果

2.1 乳腺癌組和對照組MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白表達 乳腺癌組MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白陽性表達率分別為62.82%和44.87%，明顯高于對照組（P<0.05），見表1 和圖1。

表1 乳腺癌組和對照組MAGE-C1和MAGE-C2蛋白表達

圖1 免疫組化染色圖（×200；A：對照組MAGE-C1陰性表達；B：對照組MAGE-C2陰性表達；C：乳腺癌組MAGE-C1陽性表達；D：乳腺癌組MAGE-C2陽性表達）

2.2 MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白表達與乳腺癌臨床病理特征關系 組織學分級Ⅲ級MAGE-C1 蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ級和Ⅱ級（P<0.05）；組織學分級Ⅲ級、浸潤性導管癌MAGE-C2 蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ級、浸潤性小葉癌和乳腺髓樣癌（P<0.05）。見表2。

表2 MAGE-C1和MAGE-C2蛋白表達與乳腺癌臨床病理特征關系

2.3 乳腺癌MAGE-C1 蛋白與MAGE-C2 蛋白表達相關性分析 乳腺癌MAGE-C1 蛋白與MAGE-C2 蛋白表達呈正相關（rs=0.427，P<0.05），見表3。

表3 乳腺癌MAGE-C1蛋白與MAGE-C2蛋白表達相關性分析

3 討論

環境因素和遺傳因素影響乳腺癌的發生，促進乳腺癌臨床病理特征的進展展［7，8］。乳腺癌作為生殖系統常見的惡性腫瘤，其生存期不到46 個月，包括綜合治療后3 年內病死率仍可超過25%［9，10］。另一方面，臨床研究缺乏有效的生物活性血清分子對乳腺癌進行早期診斷，本次研究揭示了腫瘤相關蛋白的表達陽性率問題，可以為揭示乳腺癌的發病機制，為乳腺癌的靶向免疫治療提供依據，同時也可以為乳腺癌的早期高危人群的血清學篩查提供依據。

生物制劑濃度的變化對促進癌細胞早期、中期和晚期核異質性的發展起著重要作用，它能影響患者的生存和預后，調節腫瘤細胞的生物學特性。MAGE-C1 主要存在于睪丸組織、胚胎組織及部分神經組織中，其對于HIPPO 信號通路的激活增加乳腺癌上皮細胞DNA 轉錄的風險，增強了啟動子并激活了增強子，提高乳腺導管上皮細胞的浸潤粘附能力［11］。MAGE-C2 主要存在于部分神經組織及間質組織中，其能夠與乳腺癌細胞膜內的轉錄基因的結合，促進其甲基化的修飾，致使乳腺癌上皮細胞錯配修復能力下降，癌基因突變風險增加［12-13］。

本研究通過探討乳腺癌病灶組織中MAGE-C1、M A G E-C 2 的表達分析可見，在病例組患者中，MAGE-C1、MAGE-C2 的表達陽性率明顯升高，高于乳腺良性病變組織，差異明顯，提示了MAGE-C1、MAGE-C2 的高表達均能夠參與到乳腺癌的病情進展過程。通過收集各種相關文獻，筆者認為這主要是由于MAGE-C1 和MAGE-C2 的幾方面作用［14］：（1）MAGE-C1 的上升能夠導致乳腺癌細胞內腫瘤相關因子表達濃度的上升，增加了癌細胞的轉錄激活程度；（2）MAGE-C2 的表達上升能夠導致癌細胞內AKT 或者NF-KB 信號通路的激活，增加了乳腺癌細胞啟動子或者增強子的上調程度。 易彤波等［15］研究者也認為，MAGE-C 在乳腺癌患者中的陽性表達率高于平均水平，尤其是腫瘤負荷明顯或轉移率高的患者。通過免疫組化染色分析研究可見，在乳腺癌細胞異型性較為明顯的區域，MAGE-C1、MAGE-C2 的染色程度可進一步的加深，提示MAGE-C1、MAGE-C2 的表達可能影響到了乳腺癌細胞的形態。乳腺癌相關指標與臨床病理特征的相關性研究在探討乳腺癌相關指標與臨床病理特征相關性的過程中，發現在組織學分級較晚的患者中，MAGE-C1 的表達明顯上升，而在組織學分級較晚或浸潤性導管癌的患者中，MAGE-C2 的表達陽性率可進一步的上升，提示MAGE-C1、MAGE-C2 的表達與乳腺癌患者的臨床病理特征的病情進展緊密相關，這主要由于二者的表達陽性率的上升，能夠導致乳腺癌細胞排列極性的改變，提高了癌細胞的組織學分級。但部分研究者還認為MAGE-C1、MAGE-C2 的表達與乳腺癌患者的臨床分期或者淋巴結轉移有關［16］，本次研究并未相關結論，考慮可能與相關細胞因子的檢測靈敏度的差別有關。最后本研究發現，乳腺癌MAGE-C1 蛋白與MAGE-C2 蛋白表達呈正相關，提示了二者在促進乳腺癌的病情進展過程中可能發揮了一定的協同作用。

綜上所述，在乳腺癌患者中，MAGE-C1、MAGE-C2的表達陽性率可明顯的上升，同時M A G E-C 1、MAGE-C2 的表達與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關。在后續的研究中我們將繼續探討MAGE-C1 和MAGE-C2 在乳腺癌中的表達及其與臨床預后的關系。