酶制劑+益生菌與植物提取物協同對肉雞生產性能、免疫能力及抗氧化能力的影響

劉沛堯，張紹波，李京都，張李文，高 思，陳慧君，熊 鵬，齊智利

(華中農業大學動物科學技術學院1，武漢 430070)(武漢城市職業學院2，武漢 430064)(山東理工大學3，淄博 255000)

中華人民共和國農業農村部194號文件規定自2020年7月1日起，飼料生產企業停止生產含有促生長類藥物飼料添加劑(中藥類除外)的商品飼料，也就意味著抗生素不能再作為飼料添加劑使用，因此為了維持企業的生產效益，尋找合適的抗生素替代物成為非常迫切的瓶頸問題。大蒜素是大蒜(AlliumsativumL)中提取的有效成分，是由蒜氨酸經蒜氨酸酶催化后產生[1]。大蒜素具有抗氧化、抗炎、抑菌、抗癌和調節免疫等功效，長期使用于食品和藥品等領域。Gong等[2]發現β-胡蘿卜素、姜黃素、大蒜素和丁酸鈉同時使用能夠提升母雞的免疫力，并且對后代的生長性能和免疫能力也有一定的影響，推測是由于腸道形態變化導致，而Nathan等[3]發現大蒜提取物二硫化二烯丙基(DADS)和三硫化二烯丙基(DATS)具有提高肉雞日增重以及腸道絨毛高度的功能。非淀粉多糖(NSP)是谷物中的抗營養因子，會增加腸道黏度，減緩營養物質的遷移和吸收，飼料中添加非淀粉多糖酶能夠顯著提高飼料轉化率[4]。芽孢桿菌(Bacillus)能夠產生多種細胞外酶，包括淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、纖維素酶和木聚糖酶等[5]，這對于家禽消化利用飼料中的營養物質有積極的功效，但芽孢桿菌與非淀粉多糖酶和植物提取物協同在飼料中協同使用的研究較少。本實驗旨在研究非淀粉多糖酶制劑和芽孢桿菌以及植物提取物對肉雞生長性能的影響，為提高肉雞尋找合適的抗生素替代物提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料及地點

添加劑A含有芽孢桿菌與非淀粉多糖酶制劑，添加劑B含有芽孢桿菌、非淀粉多糖酶制劑與大蒜素。

飼養實驗于湖北省武漢市華中農業大學飼料監測站進行，選用192只體況良好的1日齡黑羽肉雞進行實驗，肉雞品種為天露黑雞2號。

1.2 實驗方法與飼養管理

將黑羽肉雞隨機分為8個組：對照組(基礎日糧)、抗生素組(基礎日糧+250 g/t 4%恩拉霉素)及實驗Ⅰ～Ⅵ組，實驗Ⅰ、Ⅱ與Ⅲ組分別飼喂基礎日糧+100、300、500 g/t的添加劑A，實驗Ⅳ、Ⅴ與Ⅵ分別飼喂200、500、800 g/t的添加劑B。每組4個重復，每個重復6只雞。每日飼喂2次(上午8：00與下午4：00)，采用籠養飼喂，自由飲水，實驗基礎日糧參考NRC(1994)制定，具體配方及營養水平如表1所示。

表1 基礎日糧組成及營養水平(風干基礎)/%

1.2.1 生長性能測定

實驗雞3周齡，禁食12 h，自由飲水，對每個重復進行稱重，并計算平均日采食量、平均日增重、料重比。

1.2.2 血清生化檢測

實驗雞3周齡時，禁食12 h，自由飲水，對每個重復的實驗雞進行稱重，并分別選取對照組、抗生素組及添加劑A組和添加劑B組中平均日增重最高的一組，每個重復隨機抽取1只雞，共16只，采集實驗雞血清樣本，3 000 r/min離心15 min，取上清液，得到血清，使用深圳邁瑞 BS-420 型全自動生化分析儀檢測血清中葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)的含量使用硫代巴比妥酸法檢測樣本中丙二醛(MDA)、比色法檢測總抗氧化能力(T-AOC)與谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、羥胺法檢測超氧化物歧化酶(SOD)、可見光法檢測過氧化氫酶(CAT)。

使用ELISA試劑盒檢測血清中免疫球蛋白G(IgG)、白細胞介素1β(IL-1β)、白細胞介素6(IL-6)、白細胞介素10(IL-10)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)。

1.3 數據處理

采用IBM SPSS Statistics 26 進行統計分析，使用單因素ANOVA檢驗進行顯著性分析，對不同處理組進行單因素方差分析，用SNK法對各測定數據進行多重比較。統計結果采用“平均值±標準誤”(Mean±SEM)的形式表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準，P<0.01作為差異極顯著性判斷標準。

2 結果與分析

2.1 添加劑A與添加劑B對肉雞生長性能的影響

實驗肉雞平均日采食量、日增重、料肉比如表2所示，對照組肉雞日增重與體重極顯著低于抗生素組及實驗組(P<0.01)。

表2 添加劑A與添加劑B對肉雞生長性能的影響

2.2 添加劑A與添加劑B對肉雞血清生化指標的影響

實驗肉雞血清生化指標結果如表3所示，與對照組相比，實驗組肉雞血清中尿素氮BUN、總膽固醇TC、甘油三酯TG濃度極顯著下降(P<0.01)，實驗肉雞血清中葡萄糖濃度下降，差異顯著(P<0.05)。

表3 添加劑A與添加劑B對肉雞血清常規指標的影響/mmol/L

2.3 添加劑A與添加劑B對肉雞抗氧化指標的影響

實驗肉雞血清抗氧化指標結果如表4所示，實驗雞血清中丙二醛MDA含量極顯著升高(P<0.01)，肉雞血清中過氧化氫酶CAT、總抗氧化能力T-AOC、超氧化物歧化酶SOD與谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px含量極顯著下降(P<0.01)。

表4 添加劑A與添加劑B對肉雞抗氧化能力的影響/U/mL

2.4 添加劑A與添加劑B對肉雞免疫指標的影響

實驗肉雞血清免疫指標結果如表5所示，實驗組血清中IgG與IL-10含量極顯著下降(P<0.01)，IL-1β與TNF-α含量極顯著上升(P<0.01)。

表5 添加劑A與添加劑B對肉雞免疫能力的影響/pg/mL

3 討論

平均日增重是衡量動物生長發育情況的重要指標，本實驗結果發現，添加劑A與添加劑B能夠極顯著提高黑羽肉雞平均日增重(P<0.01)，并且有促進實驗肉雞增加平均采食量趨勢(P<0.1)，但對實驗肉雞料重比無明顯影響(P>0.05)，這說明添加劑A與添加劑B能夠促進黑羽肉雞生長發育，具有與恩拉霉素相類似的作用，并且大蒜素[6]和益生菌[7]能夠提高肉雞的日增重，玉米中含有木聚糖和纖維素等非淀粉多糖，會增加食糜的黏度，降低機體對飼料的吸收與利用，Bilal等[8]報告稱非淀粉多糖酶制劑能夠降低肉雞料重比，但在本實驗中并未得到相同結果，這可能是由于添加量的不同或飼料營養成分不同所導致的。

本實驗中，與對照組相比，添加劑A組與添加劑B組均降低了血清中葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿素氮含量，Abdel-Daim 等[9]研究發現大蒜素會降低小鼠的血清尿素氮含量，本實驗中也得出了類似結果，但本實驗差異顯著(P<0.05)，這可能是腎小管離子在吸收增加從而使正常血清電解質水平恢復引起的，而Abdel-Hafeez等[10]通過研究益生菌與益生元對肉雞的影響，發現益生菌對肉雞血清總蛋白和葡萄糖沒有明顯影響，這與本實驗結果不同，實驗抗生素組血清葡萄糖濃度顯著下降，可能是因為抗生素對肉雞腎臟功能產生影響，導致血清葡萄糖濃度下降。Aminlari等[11]通過在小鼠上的實驗發現芽孢桿菌會降低小鼠血清中膽固醇濃度，與本實驗結果相同。實驗雞血清總膽固醇和甘油三酯含量下降，可能是由于肝臟產生病變導致，但屠宰中并未見到肝組織明顯病變，具體原因有待進一步研究。

Jang等[12]在研究中發現大蒜素具有抗氧化性能，能夠增加SOD的活性，并降低GSH-Px濃度，益生菌能夠產生抗氧化酶，如谷胱甘肽轉移酶、谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽過氧化物酶超氧化物歧化酶和過氧化氫酶等，能夠清除活性氧ROS，提高機體抗氧化能力[13]，但在本實驗中，添加劑A與添加劑B降低了實驗肉雞血清SOD及GSH-Px等的濃度，并且導致肉雞總抗氧化能力(T-AOC)降低，而抗生素及芽孢桿菌具有調節細胞因子的表達來降低腸道的形態學和免疫學變化的特性[14]，這可能是SOD及抗氧化能力降低的原因。

抗生素單獨使用會對動物體腎臟造成危害，提高動物血清中TNF-α濃度，這與本實驗結果一致，而大蒜素與抗生素聯合使用能夠降低TNF-α濃度[15]，但本實驗結果顯示，飼喂大蒜素會提高肉雞血清TNF-α濃度，說明在實驗過程中，添加劑A與添加劑B對實驗雞都具有刺激性，降低了實驗雞的免疫能力。血清免疫球蛋白是動物體免疫功能的重要指標[16]，Long等[17]在肉雞上利用同樣具有抗氧化與抗炎等能力的枸杞多糖進行實驗，發現實驗組肉雞血清IL-6濃度顯著下降，TNF-α含量上升。而本實驗結果顯示，添加劑A組與添加劑B組免疫指標及抗氧化指標低于對照組，這可能是由于實驗中的致炎因子導致各組出現炎癥，而添加劑A組、添加劑B組和抗生素組抗病能力較強，免疫指標及抗氧化指標波動較小，對照組出現炎癥反應，使各項免疫指標及抗氧化指標升高。

添加劑A組與添加劑B組之間各項指標并無顯著差異，大蒜素對于嗜酸乳桿菌具有抑制作用[18]，嗜酸桿菌在肉雞42日齡時成為優勢菌群[19]，而本實驗實驗期為21 d，這可能是大蒜素未能使添加劑A組與添加劑B組出現顯著差異的原因之一。

4 結論

實驗結果表明，添加劑A與添加劑B作為飼料添加劑能夠提高黑羽肉雞的生產性能，但會對黑羽肉雞免疫能力及抗氧化能力造成影響。在黑羽肉雞飼料添加劑中具有與恩拉霉素相似的效果。