乳腺癌患者E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白的表達水平與新輔助化療療效的相關性

魏鵬，陳鵬

1.陜西省核工業二一五醫院普外一科，陜西 咸陽 712000；2.三原縣醫院普外二科，陜西 咸陽 713800

乳腺癌是一種婦科常見的惡性腫瘤，常發生在乳腺上皮以及導管上皮[1]。其發病率逐年升高，在婦科惡性腫瘤中已達首位，嚴重危害女性的生命健康[2]。早期患者可出現乳頭溢液、疼痛、乳頭形狀改變和腫塊等情況。目前臨床上常采用手術聯合化學和放射治療[3]。新輔助化療是一種新型化療方案，常運用于中晚期乳腺癌的治療，療效已受到國內外的普遍認可。但有研究表明，新輔助化療的臨床總體有效率為65%～90%，對于部分患者療效較低甚至無效，并且化療所引起的毒副反應也可能導致治療失敗，嚴重危害患者生命健康[4-5]。因此，迫切需要尋找能夠反映化療效果的指標來判定哪些人群適合接受新輔助化療治療。E-鈣黏附蛋白是鈣粘附蛋白家族中的一種跨膜蛋白的亞型，主要負責細胞的分化、分泌等功能，已被證實其參與惡性腫瘤的發展；肌切蛋白是一種重要的肌動蛋白結合蛋白，與腫瘤的發展與形成密切相關。近年來，兩種指標已被用于評估乳腺癌的療效和預后，但是目前將兩種指標運用于判定乳腺癌新輔助化療效果的相關研究較少[6]。本研究旨在探討乳腺癌患者E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白的表達水平及其與新輔助化療效果間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年4 月至2020 年4 月陜西省核工業二一五醫院收治的78 例乳腺癌患者作為研究對象。納入標準：(1)符合《乳腺癌綜合診治規范化手冊》[7]中乳腺癌診斷標準者；(2)符合《乳腺癌臨床診治實用手冊》[8]中新輔助化療適應證者；(3)精神正常者；(4)無大面積癌細胞轉移者；(5)生存時間在治療周期以上者；(6)治療前未接受其他治療者。排除標準：(1)存在其他血液體統疾病者；(2)存在肺、腦、腎等重要器官障礙者；(3)中途退出或死亡者。根據治療后的評價效果進行分組，將臨床完全緩解、病理完全緩解、臨床部分緩解者納入療效較好組，臨床穩定、臨床進展者納入療效較差組。療效較好組患者51 例，年齡29～71 歲，平均(50.24±10.21)歲；病程9～18 個月，平均(14.25±2.44)個月。療效較差組患者27 例，年齡29～70 歲，平均(50.15±10.19)歲；病程9～18 個月，平均(14.19±2.34)個月。兩組患者的一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經我院倫理委員會批準，所有患者及其家屬知情且簽署知情同意書。

1.2 評價標準 參考《乳腺癌綜合診治規范化手冊》[8]中評價標準：臨床完全有效：患者所有病灶均消失；病理完全緩解：患者手術后大體標本中癌殘留或癌成分基本消失；臨床部分緩解：基線病灶長徑降低30%以上；臨床穩定：患者病灶縮小未達到臨床部分緩解標準；臨床進展：基線病灶未見改善或者增加、出現新病灶。

1.3 治療方法 所有患者入院后接受穿刺檢查和影像學檢查，符合《乳腺癌綜合診治規范化手冊》中乳腺浸潤性癌診斷標準，在患者確診隨即進行新輔助化療治療。治療前患者均接受鹽酸恩丹西酮注射液(常州蘭陵制藥有限公司國藥準字H19980013)8 mg，使用前先將該注射液溶于25～50 mL 0.9%氯化鈉溶液中，然后靜脈注射，以預防胃腸道不適癥，在治療開始時輔以參芪扶正注射液(麗珠集團利民制藥廠國藥準字Z19990065)250 mL/d靜脈滴注。治療首日，對患者靜脈滴注表柔比星(輝瑞制藥有限公司國藥準字H20000496) 60 mg/m2，環磷酰胺注射液(江蘇恒瑞制藥有限公司國藥準字H10950292)600 mg/m2；第二天至第五天靜脈滴注5-氟尿嘧啶(北京斯利安藥業有限公司國藥準字H11020223)6～8 h。療程為5 d，每個患者接受4個周期化療，隨即進行手術治療。

1.4 組織E-鈣黏附蛋白和肌切蛋白免疫組化檢測 在患者接受治療前和治療4 個周期后進行檢查，進行組織切片制作，將玻片采用生理鹽水清理干凈后烘干，浸泡于二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各15 min，隨后將其浸泡于100%，95%，70%的酒精內3 min，隨后再用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗，將切片放于修復液中，放于水浴箱進行抗原修復，完成后將其取出，冷卻后使用PBS再次清洗，反復三次，在玻片上加入3%H2O2去離子水，待室溫培養后，采用PBS反復沖洗，甩干3次，隨后滴入一抗，在4℃中孵育過夜。復溫孵育，采用PBS 液進行沖洗5 min，反復3 次后滴入二抗孵育1 h，再進行PBS液進行沖洗5 min，反復3次后滴入顯色劑，10 min后通過顯微鏡觀察。再次染色3 min后使用自來水進行沖洗，通過1%鹽酸酒精進行分化，10 s后，采用自來水沖洗，再次烘干，滴入中性樹膠封片，干燥后隨即進行讀片。

1.5 E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白陽性評價標準 結果可見棕黃色顆粒，同時特異性分布于胞漿或者包膜，則可判定為陽性。定量分析采用圖像分析技術，使用Olympus 公司的圖像采集分析系統，將制作的玻片放于光鏡下進行分析，每個玻片選擇陽性細胞進行采集，并通過Image-Pro Plus6.0 軟件對所獲得的圖像進行平均積分光密度計算。所測得值為每個陽性細胞內的平均值。

1.6 觀察指標 (1)比較兩組患者的臨床特征；(2)比較兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白水平；(3)分析E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達與新輔助化療療效的相關性。

1.7 統計學方法 應用SPSS20.0軟件進行數據統計分析。計量資料符合正態分布，以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對樣本t 檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗，采用Pearson 相關系數分析E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達與新輔助化療療效的相關性。以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的臨床特征比較 兩組患者在絕經情況、腫瘤直徑、TNM 分期方面比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；療效較差組患者的淋巴結轉移率為88.88%，明顯高于療效較好組的11.76%，差異具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的臨床特征比較[例(%)]

2.2 兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白水平比較 治療前，兩組患者的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；治療后，兩組患者的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值明顯低于治療前，且療效較好組患者的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值明顯低于療效較差組，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值比較(±s，%)

表2 兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值比較(±s，%)

注：與療效較好組治療后比較，aP＜0.05。

組別療效較好組療效較差組例數5127時間治療前治療后t值P值治療前治療后t值P值E-鈣黏附蛋白30.25±5.5221.01±5.158.7410.00130.12±5.4225.58±5.13a 3.1610.003肌切蛋白26.75±5.5915.98±5.1810.0920.00126.82±5.5421.42±5.21a 3.6900.001

2.3 兩組患者治療后的E-鈣黏附蛋白表達陽性率比較 治療后，療效較好組患者中E-鈣黏附蛋白陽性24 例，陰性27 例，E-鈣黏附蛋白陽性率為47.05%(24/51)，陰性率為52.94%(27/51)；療效較差組患者中E-鈣黏附蛋白陽性25 例，陰性2 例，E-鈣黏附蛋白陽性率為92.59%(25/27)，陰性率為7.41% (2/27)。療效較好組患者的E-鈣黏附蛋白陽性率顯著低于療效較差組，差異具有顯著統計學意義(χ2=15.671，P＜0.01)。

2.4 兩組患者治療后的肌切蛋白表達陽性率比較 治療后，療效較好組患者中肌切蛋白陽性22 例，陰性29 例，肌切蛋白陽性率為43.14%(22/51)，陰性率為56.86%(29/51)；療效較差組患者中肌切蛋白陽性26 例，陰性1 例，肌切蛋白陽性率為96.30%(26/27)，陰性率為3.70%(1/27)。療效較好組患者的肌切蛋白陽性率顯著低于療效較差組，差異具有顯著統計學意義(χ2=21.077，P＜0.01)。

2.5 E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達與新輔助化療療效的相關性 經Pearson 相關性分析結果顯示，E-鈣黏附蛋白(r=-0.095，P＜0.01)、肌切蛋白(r=-4.27，P=0.031)表達與新輔助化療療效均呈負相關，見圖1。

圖1 E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達與新輔助化療療效的相關性

3 討論

在我國，乳腺癌的發病率逐年升高，成為女性發病率最高的惡性腫瘤，嚴重危害女性的生命健康[9]。乳腺癌在早期可表現為全身性病灶，采用單一局部組織切除手術治療難以進行徹底的治療，需要同時結合放療、化療的手段[10]。新輔助化療方案已成為乳腺癌規范化治療的重要部分，能夠有效改善患者的臨床分期，提高乳腺癌根治術的手術效果[11-12]。但是新輔助化療也具有一定的局限性，對于部分效果不佳的患者來說，不但會帶來較大的毒副反應，還會耽誤手術時間，導致患者錯過最佳治療時間，甚至出現大面積轉移的情況。因此探究新輔助化療效果的標志物進行有效的預測是極其重要的[13-14]。

E-鈣黏附蛋白是一種通過CDHI基因編碼的跨膜糖蛋白物質，是上皮細胞粘附分子，主要分布于上皮細胞當中，胞漿端與細胞骨架通過連環素間接相連，以構成復合體，可以對細胞間極性和粘附性進行介導，主要參與到各細胞間的連接中，其表達的下降能夠使細胞間的粘附性下降，降低細胞間的相連，使腫瘤細胞的轉移速度加快[15-16]。

本研究表示，經過新輔助化療治療后，兩組患者的E-鈣黏附蛋白平均積分光密度值降低，療效較好組的E-鈣黏附蛋白平均積分光密度值低于療效較差組，同時療效較好組中E-鈣黏附蛋白陽性率顯著低于療效較差組，陰性率顯著高于療效較差組，可能是由于化療破壞大部分腫瘤組織，使得腫瘤上皮細胞被破壞，引起E-鈣黏附蛋白水平下降。我們分析了E-鈣黏附蛋白與新輔助化療作用的相關性發現E-鈣黏附蛋白與新輔助化療效果呈負相關，在療效較好組中顯著降低，說明調節E-鈣黏附蛋白在癌細胞進展中的表達，能夠對新輔助化療藥物效果進行預測。

肌切蛋白是一種鈣離子依賴性蛋白，主要負責對分泌細胞的胞吐功能進行調控，肌切蛋白活化并對皮層肌動蛋白纖維網進行切割，對肌動蛋白網障礙進行清理[17-18]。同時肌切蛋白還能夠對上皮間質轉化進行調控，而上皮間質轉化能夠直接決定腫瘤細胞惡性程度。李妤等[19]研究發現，敏感組肌切蛋白平均積分光密度值較化療前降低，且對化療效果的預測價值較高。本研究中，經過新輔助化療治療后，兩組患者的肌切蛋白水平均降低，療效較好組的肌切蛋白水平低于療效較差組，同時療效較好組中肌切蛋白陽性率顯著低于療效較差組，陰性率顯著高于療效較差組，這與上述研究結果一致?？赡苁怯捎诩∏械鞍啄軌蛲ㄟ^ERK1/2和MAP激酶P38調節信號通路對細胞分化進行調控，在腫瘤的發展和預后當中起到重要的作用[20]。此外，我們分析了肌切蛋白與新輔助化療療效相關性，與E-鈣黏附蛋白結果一致，肌切蛋白與新輔助化療效果呈負相關，提示肌切蛋白可作為新輔組化療藥效評價的新指標。

綜上所述，乳腺癌患者體內E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白參與乳腺癌的發展，經過新輔助化療方案治療后，E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達顯著降低，且E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達與新輔助化療療效均呈負相關。