II期宮頸鱗癌患者MTHFR和GSTP1基因多態性與化療敏感度及預后的相關性研究

朱家鳳，蘇 琦(西北婦女兒童醫院藥劑科，西安 710061)

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一[1-2]，盡管近年來宮頸癌的綜合防治水平逐漸提高，但晚期宮頸癌患者復發和耐藥機制尚不清楚[3-5]。新輔助化療(neoadjuvant chemotherapy,NACT)是宮頸癌的規范治療方法，可顯著改善宮頸癌患者的預后，基于順鉑聯合5 氟尿嘧啶（PF）化療方案是治療宮頸癌的常見方案[6]。前期研究發現，患者的遺傳背景如單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism,SNP)可影響化療藥物在機體內的藥物代謝動力學，導致不同患者對化療的敏感度和耐受性的不同[7-8]。對參與藥物代謝以及DNA 合成和修復的基因編碼酶，如：亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)和谷胱甘肽S 轉移P1(glutathione S transferase P1，GSTP1)的多態性研究對于提高化療效果、改善預后具有重要的意義[9]。本研究聚焦于MTHFRrs1801131和GSTP1-rs1695 位點的多態性與II期宮頸鱗癌化療敏感度及預后的關系，以期為臨床治療提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2015年1月～2016年1月西北婦女兒童醫院收治的80 例行PF 化療方案的II期宮頸鱗癌患者為研究對象。年齡42～68 歲，平均年齡45.88±9.52 歲。本研究經西北婦女兒童醫院倫理委員會批準，患者及家屬簽署知情同意書。

納入標準：①患者及家屬簽署知情同意書；②我院倫理委員會審批同意；③病理學證實宮頸鱗癌；④宮頸癌國際婦產科聯盟(FIGO)臨床分期為II期；⑤無心肝腎功能衰竭。

排除標準：① 并發其他惡性腫瘤；②鉑類或5-氟尿嘧啶類化療過敏；③病理診斷為腺癌或不明確者。

1.2 儀器與試劑 5-氟尿嘧啶(上海旭東海普藥業有限公司，國藥準字H31020593)，順鉑(昆明貴研藥業有限公司，國藥準字H53020409)，實時熒光定量PCR 儀，DNA 測序儀以及DNA 提取試劑盒均購自美國賽默飛公司，引物由上海生工公司設計合成。

1.3 方法 化療方案：所有宮頸癌患者采用PF 化療方案：5-氟尿嘧啶500mg/m2微量泵入和順鉑20mg/m2靜脈滴注，行2 個療程化療，間隔20 天，當患者出現嚴重不良反應時停止用藥，并依據血藥濃度的結果調整用藥劑量?；熀蟮? 天評估化療敏感度，2 周后行宮頸癌根治術。

基因多態性檢測：患者化療前抽取靜脈血，離心后按照試劑盒的說明書提取外周血中的DNA。采用PCR 法檢測MTHFR-rs1801131和GSTP1-rs1695 位點的多態性，DNA 測序儀對擴增結果進行分析，確定研究位點等位基因的情況。

化療敏感度評價：化療敏感度評價參見實體腫瘤的療效評價標準1.1 版（response evaluation criteria in solid tumor,RECIST version 1.1），化療療效分為完全緩解(complete remission,CR)、部分緩解(partial remission,PR)、疾病進展(progression of disease,PD)和疾病穩定(stable disease,SD)?；熋舾卸x為CR+PR，化療不敏感定義為PD+SD。

隨訪：對化療后病人采取來院隨訪或者電話隨訪，總體隨訪時間為60 個月，隨訪主要指標為總體生存率(overall survival,OS)。

1.4 統計學分析 所有數據資料采用SPSS24.0 統計軟件進行處理、分析,分類變量以率來表示，采用χ2檢驗分析SNP和相關指標的關系，Kaplan-Meier 曲線法評估宮頸癌患者的生存率。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 MTHFR-rs1801131和GSTP1-rs1695 位點基因型分布的比較 80 例宮頸癌化療患者的MTHFRrs1801131和GSTP1-rs1695 位點的分布符合Hardy-Weinberg 平衡(χ2=2.069，5.123，均P＞0.05)，具有群體代表性。MTHFR-rs1801131 位點中AA[62(77.50%)]基因型占比高于AC[10(12.50%)]和CC[8(10.00%)]基因型(χ2=105.450，P＜0.001)，GSTP1-rs1695 位點中AA[52(65.00%)]基因型占比高于AG[19(23.75%)]和GG[9(11.25%)]基因型(χ2=56.963，P＜0.001)，差異均有統計學意義。

2.2 MTHFR-rs1801131和GSTP1-rs1695 位點基因型與化療敏感度的關系 見表1。MTHFR-rs1801131位點AA 基因型的化療敏感度為24.19%，AC/CC型為33.33%，其差異無統計學意義(χ2=0.602，P=0.438)。GSTP1-rs1695 位點AA 基因型和AG/GG基因型的化療敏感度分別為17.31%和39.29%，G等位基因型對化療的敏感度更強并且其差異具有統計學意義(χ2=4.689，P=0.030)。

表1 MTHFR-rs1801131和GSTP1-rs1695 位點基因型與化療敏感度的關系

2.3 MTHFR-rs1801131和GSTP1-rs1695 位點基因型與預后的相關性 見圖1。通過隨訪患者的OS，發現MTHFR-rs1801131 位點AA 基因型5年生存率為75.81%，AC/CC 型為50.00%。與AA 基因型相比，AC/CC 型患者的5年生存率較短(Logrank=5.035，P=0.0248)。GSTP1-rs1695 位點AA 基因型和AG/GG 基因型的5年生存率分別為78.85%和71.43%，差異無統計學意義(Log-rank=0.594 0，P=0.440 9)。

圖1 MTHFR-rs1801131和GSTP1-rs1695 位點基因型的生存曲線

3 討論

宮頸癌是發展中國家最常見的女性惡性腫瘤之一，也是女性死亡的主要原因。目前宮頸癌的患病率和年輕患者的數量逐年增加，以手術為主的綜合治療是宮頸癌的主要治療模式[10]。許多學者認為新輔助化療可提高腫瘤手術切除率，減少盆腔浸潤和遠處轉移的發生，但由于腫瘤的異質性及個體差異的原因，仍然會出現化療不敏感甚至化療失敗。因此，探究宮頸癌患者化療敏感度及預后的影響因素對于指導臨床治療具有重要的意義。宮頸癌最常見的病理類型是鱗癌，其次是宮頸腺癌和宮頸腺鱗癌。雖然三種病理類型存在差異，但美國國家綜合癌癥網絡指南和國際婦產科聯盟（FIGO）指南并未將三種類型宮頸癌的治療進行區分[11]。因此，本研究選取宮頸鱗癌患者作為研究對象，以探討化療敏感度及預后的影響因素。

隨著藥物基因組學的進步，參與藥物代謝動力學相關酶的基因多態性逐漸為人們所了解，多項研究報道了其基因的多態性影響了患者對化療的敏感度以及預后效果[12]。MTHFR 是葉酸代謝途徑中的關節代謝酶，其可將5,10-亞甲基四氫葉酸轉化為具有生物學功能的5-甲基四氫葉酸，進而參與DNA 合成、修飾和甲基化等過程。研究報道MTHFR 基因位點的突變可直接影響5-氟尿嘧啶在體內代謝的過程，進而影響化療效果。劉暢等[13]人研究發現MTHFR C667T 位點發生C-T 突變降低了5-氟尿嘧啶和卡培他濱化療對胃癌患者的療效。此外，趙帥等[14]人也報道，MTHFR-rs1801131 位點的突變可作為獨立因素引起結腸癌患者新輔助化療療效的下降。然而，MTHFR-rs1801131 位點與II期宮頸鱗癌化療敏感度及預后的關系未見相關報道。本研究發現II期宮頸鱗癌患者MTHFRrs1801131 位點AC/CC 型患者的5年生存率短于AA 基因型患者，這與其在結腸癌中報道結果相一致[15]。

GSTP1 是一種胞質解毒酶，功能障礙的GSTP1可產生大量ROS誘導的氧化應激，從而參與食管癌、胃癌、肺癌、乳腺癌和結直腸癌等多種腫瘤的發病機制[16]。文獻報道，GSTP1-rs1695 位點A 到 G的突變可引起DNA 損傷修復效率的變化，并導致鉑類化療藥物的代謝改變。此外，GSTP1-rs1695 位點A 到G 也可導致結腸癌對鉑類化療藥物的敏感度增強。目前GSTP1-rs1695 位點的多態性在宮頸癌化療敏感度中未見報道，本研究發現GSTP1-rs1695位點AA 基因型和AG/GG 基因型的化療敏感度分別為17.31%和39.29%，G 等位基因型對化療的敏感度更強，且差異有統計學意義。周力恒[17]也在采用紫杉醇聯合順鉑化療的乳腺癌患者中觀察到了與我們相一致的結果。

同一基因可能存在多個突變位點，本研究僅選擇同一基因中一個突變位點，闡明此位點與化療敏感度及預后的相關性，這是本研究的局限性，并沒有納入全部位點，無進行分析位點間協同作用的單倍體分析。未來我們將通過全基因組測序分析，以獲得所有的相關基因及突變位點。分析位點之間的協同作用和不同基因之間的交互作用，以期對宮頸癌化療敏感度和預后進行更深的理解。

綜上所述，MTHFR-rs1801131 位點的多態性可影響II期宮頸鱗癌患者的化療預后，C 等位基因突變可導致更短的5年生存率；GSTP1-rs1695 位點的多態性則與 II期宮頸鱗癌患者的化療敏感度相關，G 等位基因突變可引起更敏感的化療效果。