使用金標免疫層析法檢測兒童腹瀉糞便標本輪狀病毒的結果分析

何達輝

深圳龍崗區第三人民醫院檢驗科(深圳 518100)

小兒腹瀉是臨床常見兒科疾病，該病嚴重影響患兒的身心健康。腹瀉的病因呈多樣化復雜性，如若未及時進行處理，極可能轉變為慢性腹瀉，同時還會伴有發育不良、營養不良等并發癥的發生，嚴重者甚至危及生命[1-2]。輪狀病毒(rotavirus，RV)是一種雙鏈核糖核酸病毒，主要通過感染患兒的小腸上皮細胞，造成的小兒腹瀉，臨床主要表現為急性腸胃炎，多以重癥腹瀉為主，據相關統計發現全球大約每年有33～59萬兒童因輪狀病毒致死[3]。目前，臨床上仍然缺乏較為直接而又有效的治療方法，故積極開展預防和控制措施對該病具有重要意義[4]。輪狀病毒的檢測方式眾多，如金標免疫層析法(gold immunochromatographic assay, GICA)、免疫熒光法、免疫電鏡法、核酸聚丙烯胺凝膠電泳法、酶聯免疫吸附法等[5-7]，檢測方法各有優缺點，但早期診斷輪狀病毒漏診率較大。為尋求流行病學特征，本文中現將輪狀病毒的檢測結果進行分析匯總。

1 資料與方法

1.1 資料來源

資料來源于本院2020年1月—2021年1月收治的86例兒童腹瀉者的糞便標本，其中男49例，女37例；年齡2個月～5歲，平均年齡(2.58±0.5)歲。其中74例患兒入院時即出現輪狀病毒的癥狀，表現為腹瀉、發熱、腹痛，常伴有嘔吐，而且患兒的糞便呈現蛋花樣，少部分病例患兒出現等滲性脫水。

1.2 儀器

儀器選取北京萬泰生物科技有限公司提供的A群輪狀病毒膠體金檢測試劑盒，主要組成成分：檢測卡、鋁箔袋、干燥劑、樣本稀釋管。檢測卡主要成分：塑料卡、塑料底板、吸水濾紙、硝酸纖維素膜、金墊，樣本稀釋管內樣本稀釋液，含NaCl的稀釋液。

1.3 金標免疫層析法

1.3.1 檢測方法

試劑盒以雙抗體夾心法為主，打開標本收集器，采用蓋子上附帶的取標本棒挑取糞便標本，大約60 mg糞便樣，如糞便稀薄可采取塑料吸管進行取樣，大約50 mL樣本量放置于收集器內，加入9倍生理鹽水稀釋后混勻，離心后取上層糞便清液，將糞便上清液滴入試劑條內，10 min后觀察結果。如果糞便樣本中含有A群RV，則檢測卡會出現一條紅色線，此狀況為陽性，如果未發現含有A群RV，則檢測卡內不會有變化，此狀況判為陰性。

1.4 統計學分析

文中統計學分析以SPSS 20.0統計學軟件進行處理，計數資料采用百分比表示，以P<0.05表示有統計學差異。

2 結 果

2.1 金標結果與RT-PCR結果比較

86例兒童腹瀉感染經金標免疫檢測為陽性者有80例；同時將86例糞便標本送往本市疾控中心采用RT-PCR檢測驗證有70例陽性，其中合并感染諾如病毒、星狀病毒、腺病毒各占9.30%(8例)、17.44%(15例)、24.42%(21例)。RT-PCR檢測出輪狀病毒陽性率為81.39%，金標免疫檢測出輪狀病毒陽性率為93.02%，兩種檢測方法相比，金標免疫檢測結果其準確度更高。

2.2 年齡與季節的構成比

由表1可見，年齡構成比中，1歲以下的嬰幼兒為31例，占38.75%，較為多見，其次為1歲、2歲的兒童，各占23.75%、25.00%。季節性以秋季和冬季為輪狀病毒的高發期，11-12月份36例，占45.00%，1-2月、9-10月18例、16例，占22.50%、20.00%。

表1 年齡與季節的構成比 (n,%)

2.3 不同性別患兒的輪狀病毒檢測情況

經研究發現，男童檢測RV陽性為45例，占56.25%，女童檢測RV陽性為35例，占43.75%，男女性別中陽性率比較，經統計學分析無差異性(χ2=2.500,P>0.05)。

3 討 論

腸道不僅僅是人體的消化系統，而且還是人體重要的免疫器官。在嬰幼兒時期小兒腹瀉最為常見，也是急性胃腸道紊亂性疾病，主要以腹瀉、脫水等癥狀為主，小兒腹瀉的發病機制復雜多樣化，因個體差異又存在明顯的不同，如有患兒發生牛奶過敏導致的腹瀉，還有患兒因胰島素功能發生障礙導致的腹瀉。嬰幼兒多是因為消化道尚未發育成熟，正常腸道菌群防御能力尚未建立完全，另人工喂養也是該病的易感因素[8]。嬰幼兒腹瀉的首要考慮因素是RV感染，在臨床又稱之為嬰幼兒秋季腹瀉，常伴有大便性狀的改變和大便次數增加，因糞口為RV的主要傳播途徑，主要感染小腸上皮細胞引發腹瀉，患兒發病后潛伏期一般為1～3 d，如未及時處理，極易誘發更多的并發癥，如消化道感染、中毒性感染、營養不良等，影響患兒的身心健康[9]，更嚴重者甚至造成患兒的死亡。大多數患兒發病因素均因手接觸到污染物或者受污染的食物直接侵襲腸道，加之身體抵抗力較弱，最后導致發生腹瀉。RV一旦侵襲患兒的胃腸道功能，則極易損傷腸道的功能和結構性，導致胃腸道功能紊亂，最終造成腹瀉，其病程時間多在一周左右，如不及時治療，則會加重患兒的脫水癥狀，更嚴重者甚至威脅到患兒的生命，故早期實施有效的診斷和治療至關重要。

GICA是一種新型的免疫檢測技術，主要以膠體金標為示蹤物。本文中86例兒童腹瀉感染經金標免疫檢測為陽性者80例；同時本市疾控中心采用RT-PCR檢測驗證陽性者70例，其中合并感染諾如病毒、星狀病毒、腺病毒各占9.30%(8例)、17.44%(15例)、24.42%(21例)。RT-PCR檢測出輪狀病毒陽性率為81.39%，金標免疫檢測出輪狀病毒陽性率為93.02%，兩種檢測方法相比，金標免疫檢測結果準確度更高，值得在醫院內長期使用。80例陽性率者在年齡構成比中發現，主要以5歲以下的兒童居多，其中1歲以下的嬰幼兒為31例，占38.75%，較為多見，其次為1歲、2歲的兒童，各占23.75%、25.00%。其主要原因是嬰幼兒年齡較小，自身的免疫功能沒有完全發育成熟，加之腸道負荷過重，極易發生感染，但隨著兒童的成長，年齡越大，其發病的病例數量也是越來越少。 消化道的感染是RV 的主要感染途徑，而且多發生于寒冷的季節[10]，本文中研究發現，秋季和冬季為高發期，主要為11-12月份38例，占44.19%，其次是1-2月、9-10月18例、16例，占22.50%、20.00%。炎熱的夏季不利于RV生存，RV在秋冬季節較為活躍，可通過污染的水、食物、衣物、玩具等間接傳播，故應加強冬季對兒童的保護措施，注意衛生，養成飯前便后勤洗手的好習慣[11-14]。文中男女性別比未見明顯統計學差異。

GICA于八十年代初期出現，由科學家Taylov和Faulk發明，其核心技術就是以相同條狀纖維層析，使樣品標記物發生免疫反應。免疫層析技術按原理可分為兩大類，第一類以酶為標記物，用于嗎啡、茶堿等小分子類藥物檢測，第二類以乳膠顆粒、膠體金等著色標記物，根據顯色條帶進行定量。膠體金免疫層析法主要用于檢測病毒抗原-抗體的標記，以膠體金為標記物，目前在臨床被廣泛應用，近幾年也廣泛應用于藥物殘留、寄生蟲、早孕等各項檢測中，屬于新型的免疫檢測技術。該類方法其操作簡單，而且成本較低，只需幾分鐘就可取得結果。本文中86例兒童腹瀉感染經金標免疫檢測有80例為陽性，陽性率為93.02%。目前金標免疫也被廣泛應用于臨床各種免疫學的檢測中。由此可見，金標免疫層析法有利于早期診斷小兒腹瀉，臨床推廣性較強。

目前，我國臨床上尚未將輪狀病毒的疫苗列為計劃性免疫，對于防治輪狀病毒的措施首選為口服接種疫苗，通過吸管吸取疫苗，每人口服劑量為3 mL,忌開水送服?？诜呙缈捎行Ы档透腥韭蔥15-18]。6～18月齡是輪狀病毒的高發年齡，但據相關資料顯示，兒童接種率并不高，可能與父母對兒童的防護意識有關。輪狀病毒屬于二類疫苗，大多數家長僅了解一類免費強制性的疫苗，往往忽略了二類，而且該類疫苗還有時間限制，許多家長往往在打與不打間做掙扎，導致錯過最佳的接種時間點。故應多開展關于預防接種輪狀病毒的宣傳教育工作，降低疾病的感染率。雖多數病例僅為輪狀病毒的感染，但還應更加重視合并有其他病原菌的感染[19-25]。如果暫時未接種疫苗，應該重視手的衛生習慣，大多數孩子都有吃手的小習慣，應該告知家長將其手洗干凈，讓病毒遠離。全國兒童預防接種日是每年的4月25日，世界衛生組織建議，應從6周齡開始盡早進行輪狀病毒疫苗的接種，做到早預防早保護?？傊鞔_病原菌，加強防護并采取及時有效的治療措施，可明顯提高患兒的治療效果。

綜上所述，兒童在幼兒期就應飯前、便后勤洗手，講衛生，勤通風，勤剪指甲，而且家長也應重視對其餐具的的消毒，從而減少兒童腹瀉的發生率，加強防護工作。輪狀病毒多以5歲以下的嬰幼兒為主，秋冬季節較為常見，使用金標免疫層析法檢測兒童腹瀉糞便標本輪狀病毒，其操作簡單，可快速準確地檢測出輪狀病毒。