食管鱗狀細胞癌組織PTOV1，IGBP1的表達與臨床病理特征和預后相關性研究

徐 超，徐 珊，竇 燕，閆玲新，孔曉明，郭改莉（邯鄲市中心醫院消化科，河北邯鄲 056001）

食管癌是臨床上常見的惡性腫瘤，據有關調查統計數據顯示，2018年全球食管癌的新發病例數為57.20萬人，死亡人數50.90萬例，嚴重危害人們的健康[1]。近年來，隨著治療技術的不斷發展，大量的食管癌患者均可得到有效的治療，但由于食管癌早期臨床癥狀隱匿，大部分患者發現時已處于中晚期，患者預后普遍較差[2]。因此，尋找食管癌早期診斷及預后判斷的標志物對于提高患者生存率具有重要意義。前列腺腫瘤過表達蛋白1(prostate tumor overexpressed 1, PTOV1)是一種保守的銜接蛋白，最初在前列腺癌中發現，具有調節細胞周期，促進細胞有絲分裂的作用[3]。目前已有研究報道，在宮頸癌[4]、卵巢癌[5]、前列腺癌[6]中存在PTOV1高表達。免疫球蛋白結合蛋白1(immunoglobulin binding protein，IGBP1)是一種在多種組織中廣泛存在的蛋白，具有抗凋亡、調節細胞周期的作用，鱗狀細胞癌是食管癌的主要類型，占食管癌的90%以上，食管癌的發生與細胞有絲分裂異常、增殖和凋亡失衡等有密切關系[7]。PTOV1和IGBP1在食管癌的發生發展中可能起到重要的作用，但目前國內對于食管鱗狀細胞癌組織中PTOV1，IGBP1表達情況及與臨床病理特征和預后的關系尚未見報道。鑒于此，本研究探討食管鱗狀細胞癌組織PTOV1，IGBP1的表達及與臨床病理特征和預后不良的關系，旨在為食管鱗狀細胞癌的臨床診治提供依據，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2013年6月～2015年11月期間邯鄲市中心醫院收治的食管鱗狀細胞癌患者70例，其中男性45例、女性25例，年齡40～79（59.82±7.69）歲；腫瘤大?。骸?cm 28例、＞2cm 42例；組織學分級：低分化38例、中分化22例、高分化10例；TNM分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期26例、Ⅲ期32例。納入標準：①所有患者均符合《病理學》中的食管鱗狀細胞癌的有關規定[8]，經腹、右胸兩切口食管鱗狀細胞癌切除手術治療，術后經病理確診為食管鱗狀細胞癌；②患者初次發病，具有腫瘤組織及對應癌旁組織（距離腫瘤邊緣＞3cm），病歷資料完整；③患者術前未經放療、化療及免疫治療；④患者及其家屬對研究知情同意且簽署同意書。排除標準：①治療時并發其他系統腫瘤者；②病情嚴重，預計生存期＜6個月者；③并發免疫系統疾病及血液系統疾病者。本研究經過邯鄲市中心醫院倫理學委員會審查同意。

1.2 儀器與試劑 兔抗人PTOV1單克隆抗體（上海邦景實業有限公司），兔抗人IGBP1單克隆抗體（上海澤葉生物科技有限公司），DAB顯色液（武漢純度生物科技有限公司），免疫組化染色試劑盒（武漢純度生物科技有限公司），IXplore Pro倒置顯微鏡（日本Olympus）。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學SP法：將手術切除的癌組織、癌旁組織經10g/dl中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，制成4μm連續切片。經過梯度乙醇水化，3g/dl H2O2消化內源性過氧化物酶，PBS沖洗后高溫高壓抗原修復，加入山羊血清封閉抗原，并加入兔抗人PTOV1單克隆抗體、兔抗人IGBP1單克隆抗體，飽和濕度過夜，加入生物學二抗體，辣根過氧化物酶標記，DAB顯色，蘇木素復染，返藍，梯度乙醇脫水，透明，樹膠封片。

1.3.2 免疫組織化學結果判定：采用免疫組織化學半定量判定標準：①標本染色評分：以PBS代替生物學一抗作陰性對照，用試劑盒配套陽性樣本作為陽性對照。無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；②陽性細胞比例評分：陽性細胞比例≤10% 1分；陽性細胞比例11%～50% 2分；陽性細胞比例51%～75% 3分；陽性細胞比例＞75% 4分。將兩項積分乘積得總積分：0～3分為（－），4～5分為（+），6～7分為（++），8分以上為（+++）。+～+++判定為陽性[9]。

1.3.3 隨訪：所有患者出院后通過門診復查或電話隨訪，隨訪5年，隨訪截止時間為2020年11月，患者生存時間為就診日期至隨訪截止日期或死亡日期，記錄患者生存情況。

1.4 統計學分析 采用SPSS23.0軟件進行統計學分析。計數資料以率（%）表示，組間比較實施卡方檢驗。應用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，實施Log-rank檢驗。應用COX比例風險回歸模型分析食管鱗狀細胞癌患者預后不良的危險因素。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 食管鱗狀細胞癌組織及癌旁組織中PTOV1，IGBP1蛋白表達情況 見表1。食管鱗狀細胞癌組織PTOV1，IGBP1蛋白陽性率顯著高于癌旁組織，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

表1 食管鱗狀細胞癌組織及癌旁組織中PTOV1，IGBP1蛋白表達情況 [n=70，n(%)]

2.2 PTOV1，IGBP1蛋白與食管鱗狀細胞癌患者臨床病理特征的關系 見表2。不同年齡、性別、腫瘤大小食管鱗狀細胞癌組織中PTOV1蛋白陽性率、IGBP1蛋白陽性率比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。組織學低分化，TNM分期Ⅲ期食管鱗狀細胞癌組織PTOV1蛋白陽性率、IGBP1蛋白陽性率均顯著高于組織學中高分化，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期食管鱗狀細胞癌組織，差異有統計學意義（均P＜0.05）。

表2 PTOV1，IGBP1蛋白與食管鱗狀細胞癌患者臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3 不同 PTOV1，IGBP1蛋白表達情況食管鱗狀細胞癌患者預后情況 見圖1。截至2020年11月，共有66例患者完成隨訪，失訪4例，失訪率5.71%；患者存活36例，死亡30例。繪制生存曲線結果顯示，PTOV1蛋白陽性表達患者5年生存率低于PTOV1蛋白陰性表達患者，IGBP1蛋白陽性表達患者5年生存率低于IGBP1蛋白陰性表達患 者（Log-rankχ2=8.122, 6.987,P=0.002, 0.007）。

圖1 不同PTOV1，IGBP1蛋白表達情況食管鱗狀細胞癌患者生存曲線

2.4 食管鱗狀細胞癌患者預后不良影響因素的COX比例風險回歸模型分析 見表3。建立COX比例風險回歸模型，結果顯示組織學低分化、TNM分期Ⅲ期、PTOV1蛋白陽性、IGBP1蛋白陽性是食管鱗狀細胞癌患者預后不良的危險因素（P＜0.05）。

表3 食管鱗狀細胞癌患者預后不良影響因素的COX比例風險回歸模型分析

3 討論

我國是食管癌的高發國家，每年因食管癌死亡的患者約為37萬例，占全球的一半以上[10]。食管癌的發病具有很強的地域分布特征，我國以河北、河南、山西等地為食管癌高發地區[11]。近年來，盡管食管癌的治療技術不斷的發展，使得大量的食管癌患者得到了有效救治，但患者的臨床預后并未得到根本性的改善，其主要原因在于食管癌具有較強的侵襲性，發病機制復雜，早期發病隱匿，大部分患者發現時已處于中晚期，預后通常較差[12-13]。目前，對于食管癌的發病機制仍未完全明確，相關研究表明，食管癌的發生是基于基因水平表達異常并引起細胞增殖、分化異常所致[14]。研究食管癌相關分子表達及與臨床病理特征和預后不良的關系對于指導治療、提高患者預后具有重要意義。

PTOV1基因位于染色體19q13.3，可以分別編碼一個由416個氨基酸組成的蛋白及一個由374個氨基酸組成的蛋白[15]。研究表明，PTOV1啟動子區域有轉錄因子SP1和SP2結合的保守區域及雄性激素反應原件[16]。CUI等[17]報道，在乳腺癌中PTOV1可以通過激活Wnt/β-catenin信號通路引起乳腺細胞惡性轉變，促進乳腺癌的發生和發展。SANTAMARíA 等[18]報道，PTOV1可以作用于脂茷蛋白flotillin-1，影響細胞周期，促進細胞有絲分裂。YANG等[19]報道，PTOV1可以抑制Notch信號通路下游多個靶基因，促進細胞癌變。IGBP1是一種參與細胞分化的調控蛋白[20]。以往有報道顯示，IGBP1能與蛋白磷酸酶A2相結合，起到抗凋亡、調節細胞周期的作用，通過miR-3941抑制IGBP1表達后可以降低肺腺癌細胞增殖，促進肺腺癌細胞凋亡[21]。LncRNA-IGBP1-AS1可以通過下調IGBP1，降低乳腺癌的增殖和侵襲能力，提示IGBP1可以促進乳腺癌的發生和發展[22]。

我們通過對食管鱗狀細胞癌組織和癌旁組織PTOV1，IGBP1蛋白表達進行了比較，分析發現食管鱗狀細胞癌存在PTOV1，IGBP1蛋白的異常高表達，提示PTOV1，IGBP1蛋白表達升高可能促進食管鱗狀細胞癌的發生。進一步分析發現PTOV1，IGBP1蛋白表達可能與食管鱗狀細胞癌患者組織分化程度、TNM分期有密切關系。目前尚無PTOV1，IGBP1蛋白與食管鱗狀細胞癌的相關報道。黃麗斯等[23]報道，在子宮內膜癌中PTOV1與患者組織分化程度、子宮內膜癌浸潤密切相關。結合之前的文獻研究報道，筆者推測PTOV1可能通過激活Wnt/β-catenin信號通路促進食管鱗狀細胞癌的發生和發展；PTOV1可能與flotillin-1相互作用，促進食管鱗狀細胞癌變；PTOV1可能通過抑制Notch信號通路，促進食管鱗狀細胞癌發生和發展；IGBP1可能與蛋白磷酸酶A2相結合，抑制凋亡，促進食管鱗狀細胞癌細胞增殖。

本研究對患者進行了5年隨訪結果顯示，PTOV1蛋白陰性表達，IGBP1蛋白陰性表達患者生存情況較好。分析其原因可能與PTOV1，IGBP1蛋白陽性表達患者組織學分化低、腫瘤惡性程度更高、可能存在淋巴轉移有關。而組織學低分化、TNM分期Ⅲ期、PTOV1蛋白陽性、IGBP1蛋白陽性是食管鱗狀細胞癌患者預后不良的危險因素。提示檢測PTOV1，IGBP1蛋白表達情況可以為食管鱗狀細胞癌患者的預后判斷提供依據，或許可以為食管鱗狀細胞癌新藥開發提供新的研究方向。但本研究也存在樣本量較少，僅通過對病例的病理標本研究，未涉及到細胞和信號通路的研究等不足，研究仍有待于今后進一步優化及豐富。

綜上所述，食管鱗狀細胞癌組織中存在PTOV1，IGBP1蛋白異常高表達，兩者與食管鱗狀細胞癌的組織分化程度、TNM分期及預后有一定關系，組織學低分化、TNM分期Ⅲ期、PTOV1蛋白陽性、IGBP1蛋白陽性是食管鱗狀細胞癌患者預后不良的危險因素，可能為食管鱗狀細胞癌患者的預后判斷提供依據。