調血降脂丸質量標準研究

閆偉亞

摘要：：目的：建立調血降脂丸質量標準。方法：采用TLC法對何首烏（制）、山楂進行定性鑒別，采用HPLC法對女貞子中特女貞苷進行含量測定。結果：何首烏（制）、山楂中熊果酸的薄層鑒別分離度好，斑點清晰、陰性無干擾，專屬性強;特女貞苷的含量線性范圍為0.1896-3.792μg（r=0.9999），平均回收率為99.41%，RSD為0.34%。結論：建立了調血降脂丸的質量標準，該方法操作方法簡便易行、準確、靈敏度高、穩定可靠，可用于控制該制劑的質量。

關鍵詞：調血降脂丸;TLC;何首烏（制）;熊果酸;HPLC;特女貞苷

【中圖分類號】 R283 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）13--02

ABSTRACT：? Objective： To establish an HPLC method for determination of Trevor privet glycosides? in TiaoXueJiangZhi pill. Method： Agilent-C18（250mm×4.6mm，5μm） column was used.The mobile? phase was consisting of methanol and water（40：60）with a flow rate of ml·min-1.The column temperature was set at 30℃.The detection wawelength? was 224 nm，and theinjecticn volume was 10μl.Result： The linear range of Trevor privet glycosides in TiaoXueJiangZhi pill was 0.1896-7.587μg （r=0.9999）. The average recovery of Trevor privet glycosides was 99.41%and RSD was 0.34%. Conclusion： The method is simple ，sensitive and accurte and can be used to determine Trevor privet glycosides? in TiaoXueJiangZhi pill and quality control of TiaoXueJiangZhi pill.

Key words： TiaoXueJiangZhi pill;Determination;HPLC;Trevor privet glycosides

調血降脂丸是由平頂山煤業（集團）有限責任公司總醫院生產的醫院中藥制劑[1]（豫藥制字Z04040039），處方由女貞子，何首烏（制）、丹參、山楂、大黃、澤瀉等味藥組成，具有補活血、祛濕瀉濁的功效。主要用于高血脂、高血粘綜合征，脂肪肝，肥胖癥;防治動脈粥樣硬化及冠心病等?，F行質量標準簡單，不能有效的控制藥品質量。女貞子是處方中的主藥，其有效成分是特女貞苷，因此，測定調血降脂丸制劑中特女貞苷含量對控制調血降脂丸的質量有著十分積極的意義。何首烏（制）、山楂也是調血降脂丸處方中的主要藥味，何首烏（制）具有補肝腎，益精血，烏須發，強筋骨功效，用于血虛萎黃，眩暈耳鳴，須發早白，腰膝酸軟，肢體麻木，崩漏帶下，久瘧體虛;高血脂。主要適宜人群是脂肪肝，三高，肥胖癥，失眠，脫發，少白頭及亞健康人群。山楂具有消食健胃、活血化淤、收斂止痢的功效，主要應用于降血脂、血壓、強心、抗心律不齊等，所以為了進一步提高標準，保證制劑的穩定可靠，我們采用TLC法對何首烏、山楂進行定性鑒別，采用HPLC法對女貞子中特女貞苷進行含量測定，以便更好地控制制劑調血降脂丸的質量。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀;DAD檢測器;色譜柱Agilent-C18（5μm，4.6mm×250mm）;XS205DU電子分析天平 [梅特勒 超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

特女貞苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111926-201404，含量97.3%），甲醇為色譜純，水為超純化水，其他試劑均為分析純。

調血降脂丸為平頂山煤業（集團）有限責任公司總醫院提供（批號為160317，160426，160521），缺位陰性對照樣品由平頂山煤業（集團）有限責任公司總醫院提供。

2 方法與結果

2.1何首烏薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液制備：取本品粉末0.5g，加乙醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。

2.1.2 對照溶液制備：另取何首烏對照藥材0.25g，同法制成對照藥材溶液。

2.1.3 陰性對照溶液的制備：除何首烏外，其他各藥按供試品處方量投料按調血降脂丸的制備工藝制成陰性對照，然后按供試品的制備方法，制成陰性對照溶液的制備。

2.1.4 照薄層色譜法（2015年版中國藥典通則0502）試驗，吸取上述五種種溶液各2μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上使成條狀，以三氣甲烷-甲醇（7：3）為展開劑，展至約3.5cm ，取出，晾干，再以三氯甲烷-甲醇（20： 1）為展開劑，展至約7cm，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。

2.1.5 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

1.樣品（批號：180317）2.樣品（批號：180426）3.樣品（批號：190221）

4.何首烏對照藥材? ?5.缺何首烏陰性對照

2.2山楂中熊果酸薄層鑒別

2.2.1供試品溶液制備：取本品粉末lg，加乙酸乙酯40ml超聲處理15分鐘，濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.2.2對照品溶液制備：取熊果酸對照品，加甲醇制成每l ml含l mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3陰性對照溶液的制備：除山楂外，其他各藥按供試品處方量投料按調血降脂丸的制備工藝制成陰性對照，然后按供試品的制備方法，制成陰性對照溶液的制備。

2.2.4試驗方法：照薄層色譜法（2015年版中國藥典通則0502）試驗，吸取上述五種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20： 4： 0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液（3-10），在80℃加熱至斑點顯色清晰。

2.2.5實驗結果：供試品色譜中，置紫外光燈（365nm）下檢視，顯相同的橙黃色熒光斑點。

1.樣品（批號：180317）2.樣品（批號：180426）3.樣品（批號：190221）

4.熊果酸對照品? ? ? 5.缺山楂陰性對照

2.3 女貞子中特女貞苷含量測定

2.3.1 色譜條件

Agilent-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相：甲醇-水（40：60），檢測波長為224nm，柱溫：30℃，流速為1.0ml·min-1，進樣量10μl。

2.3.2 對照品溶液的制備

精密稱取對照品特女貞苷9.48mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備[2]

取供試品2g，精密稱定，置具塞三角瓶中，加50%甲醇50ml，稱重，超聲處理（功率240W，頻率45kHz）30分鐘，放冷，加50%甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm 微孔濾膜濾過，即得。

2.3.4 陰性對照溶液的制備

除女貞子外，其他各藥按供試品處方量投料按調血降脂丸的制備工藝制成陰性對照，然后按供試品的制備方法，制成陰性對照溶液的制備。

2.3.5 系統適應性試驗

分別精密吸取2.2、2.3、2.4項下溶液，按2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，結果見圖 1。 特女貞苷的保留時間為14.207min，與相鄰雜質峰分離度均大于1.5，拖尾因子為0.72，峰形良好。陰性對照色譜圖在主成分色譜峰位置處無干擾，理論塔板數按特女貞苷計，不低于4000。

2.3.6 線性關系考察

分別吸取對照品溶液（0.1896mg·ml-1）1、3、5、8、10、20μl各進樣兩次，記錄峰面積分值，以特女貞苷峰面積積分值對進樣量進行回歸，得到回歸曲線y=109.25x+38.702，r=0.9999。結果表明其線性關系良好，線性范圍為：0.1896～3.792μg 。

2.3.7 精密度試驗

精密吸取上述對照品溶液10μL ，重復進樣6 次，按上述色譜條件測定峰面積。結果， RSD = 0.57% ，表明儀器精密度良好。

2.3.8重復性試驗

精密稱取同一批（批號： 160426） 樣品6 份，照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣，測定。結果，平均含量為1.202mg/g，RSD = 0.71 % ，表明本方法重復性良好。

2.3.9 穩定性試驗

取供試品溶液（批號： 160426） ，分別于0 、1 、2 、4 、8 、12h 各精密吸取10μL ， 按上述色譜條件測定峰面積積分值。結果，RSD = 0.64% ，表明供試品溶液在12h 內穩定。

2.3.10 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品9份，分別精密加入一定量的特女貞苷對照品，照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣10μL ，測定，計算回收率。結果詳見表1 。

結果表明，平均回收率均介于95% ～105%，符合要求。

2.3.11 樣品含量測定

按上述含量測定方法測定樣品中特女貞苷含量。結果見表2 。

3 結論

采用TLC法對何首烏、山楂進行定性鑒別時，考察了不同提取溶劑（甲醇、乙腈、乙醇、乙酸乙酯）和不同的提取方法（超聲提取、加熱回流提取、浸漬提?。μ崛⌒Ч皩傩缘挠绊?，發現以乙醇為溶劑，加熱回流1小時的制何首烏提取效果最佳，山楂的最佳提取方法為乙酸乙酯為溶劑，超聲提取15分鐘。同時參照中國藥典一部制何首烏、山楂項下的薄層色譜條件進行定性鑒別，該方法穩定可靠，操作簡便，專屬性較強。

根據女貞子中化學成分及性質[3]，在供試品制備的過程中，也曾考慮到其他樣品對女貞提取以及含量測定的影響[4-5]，考察了用不同濃度的甲醇進行提取和處理方法，在超聲、回流等方法的基礎上，經反復實驗，結果發現以50%甲醇和超聲提取30分鐘的效果最佳[6]，考慮到操作的方便性，可操作性，本實驗采取了50%甲醇超聲提取。

調血降脂丸是醫院制劑，在長期的臨床實踐中證明，就有良好的療效，但是長期以來，以薄層鑒別作為該藥的標準，沒有具體的質量控制標準，女貞子是調血降脂丸的主藥之一，本實驗通過用HPLC法對調血降脂丸中特女貞苷的含量進行測定。通過以上實驗，建立了調血降脂丸制劑的質量控制方法，該方法穩定可靠，操作簡便，專屬性較強，可以作為調血降脂丸制劑的質量控制標準的參考。

參考文獻：

[1]河南省食品藥品監督管理局醫療機構制劑標準.豫藥制字：Z04140004

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：化學工業出版社.2015：45-46

[3]郭培果.HPLC測定參茸珍寶片中特女貞苷的含量[J].中國現代應用藥學，2014，31（10）：1231-1234

[4]商桂春，袁大鵬，劉海濱.HPLC測定女珍顆粒中特女貞苷的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（4）：153-155

[5]陳玲，鮑蕾蕾，卞俊，李文慧，王曉麗.HPLC法測定舒肝靈茶中特女貞苷的含量[J]. 解放軍藥學學報，2015，（3）：250-251，271

[6]林偉鑫，李勇，吉國輝，江斌，何偉.HPLC法測定調脂膠囊中特女貞苷的含量[J].遼寧中醫雜志，2015，（3）：564-565.