蘭州百合脫毒原種球繁育技術

吳 然，邊光亞，薛少紅，李旭青，宋 濤，齊春蔚，李振勤*

（1.石家莊市農林科學研究院，河北 石家莊 050021；2.石家莊市百合研究技術創新中心，河北 石家莊 050021；3.石家莊市花卉研究技術創新中心，河北 石家莊 050021；4.富邦農業高科技有限公司，河北 石家莊 050021；5.河北盛祥市政園林工程有限公司，河北 石家莊 050021）

蘭州百合（var.）為川百合變種，是我國唯一的甜百合，也是一種藥食同源的蔬菜，其鱗莖中富含蛋白質、淀粉、維生素、氨基酸和微量元素等多種成分，同時還含有百合皂苷、秋水仙堿等多種藥用成分，具有良好的營養保健功效。近年來，市場對蘭州百合的需求量不斷增加，其種植面積也在不斷擴大，2019年，蘭州百合種植面積達6 666.67 hm，產量約4萬t，外銷量3.5萬t左右。但是，蘭州百合種植戶多年來靠自然生長的母籽進行繁育，導致品種混雜、種球自然退化和病蟲害累積嚴重，從而致使商品種球產量下降、產品的獨頭率降低，難以滿足食、藥用百合市場對優質蘭州百合商品種球的需求。研究培育脫毒種球，實現蘭州百合的無毒化生產，是解決這些問題的最有效途徑。因此，通過開展脫毒及誘導培養、繼代增殖培養、生根培養以及組培種球的馴化移栽等試驗，總結形成了蘭州百合脫毒原種球繁育技術，利用該技術可獲得較高的莖尖存活率，達80%以上，同時病毒脫除率達85%以上?，F將繁育技術總結如下，供相關從業人員參考。

1 材料選擇

選擇種源明確、生長健壯、外觀無病毒癥狀的蘭州百合植株，挖取鱗莖后，選取周長≥10 cm鱗莖的中層鱗片作為繁殖材料。

2 脫毒原原種的獲得

2.1 培養基的制備

培養基的配制需按照NY/T 2306—2013《花卉種苗組培快繁技術規程》的要求執行。根據組培各階段要求培養基需附加不同生長調節劑，配制3種培養基，配方見表1。

表1 不同培養基配方

2.2 組培苗的獲得

2.2.1 外植體消毒

用毛筆蘸取洗潔精刷洗剝取的中層鱗片，洗凈后在流水狀態下沖洗2～3 h，置于超凈工作臺后移入無菌瓶，倒入75%酒精消毒1 min，再用無菌水沖洗3次，每次1 min；倒入0.1% HgCl，消毒8 min，無菌水沖洗3次，每次1 min，以便充分洗去殘留的HgCl。

2.2.2 接種

將消毒的鱗片用無菌濾紙吸干水分，沿鱗片邊緣切除1 mm的外圍部分，選取鱗片的中部至基部，切成長×寬約1 cm×1 cm的小塊，凸面向下平鋪放入誘導培養基中，每瓶1株。將接種好的外植體置于培養室進行培養，溫度24～26 ℃，光照12 h/d，光照強度2 000～3 000 lx。培養2周內，觀察污染情況，及時將長菌材料移出培養室。

2.2.3 誘導培養

外植體接種30 d后，鱗片傷口處形成愈傷組織，將獲得的愈傷組織切成0.5 cm×0.5 cm的團塊，接種到誘導培養基，置于培養室，溫度24～26 ℃，光照12 h/d，光照強度2 000～3 000 lx條件下培養約35 d后，可獲得0.5 cm以上的不定芽。

2.3 病毒的脫除

2.3.1 熱處理

將暗培養獲得的不定芽切下，轉入繼代培養基，置于光照培養箱，32 ℃適應7 d，然后在光照14 h/d、溫度（39±1）℃，黑暗10 h/d、溫度（25±1）℃條件下，交替處理25 d。

2.3.2 莖尖培養

以經過熱處理的組培苗為脫毒材料，選取生長正常的植株，在10～80倍解剖鏡下剝取0.2～0.5 mm莖尖放入誘導培養基中，每瓶接種1株，置于培養室，在25～30 ℃條件下暗培養2～3個月，在培養期間每隔30 d轉接1次，使其繁殖成無性系，單個觀察培養并分留樣品進行病毒檢測。

2.3.3 病毒檢測

病毒的檢測符合NY/T 1744—2009《切花百合脫毒種球標準》的規定。采用多重RT-PCR法對分留的樣品進行百合主要病毒病的檢測，包括：黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、百合無癥病毒（Lily symptomless virus，LSV）和百合斑駁病毒（Lily mosettle virus，LMoV）的檢測，檢測引物參照陳進等的引物序列。根據檢測結果，保留陰性的材料為無毒種源進行擴繁，淘汰陽性材料。

2.4 脫毒原原種繁殖

2.4.1 鱗莖的誘導和增殖

將莖尖培養獲得的病毒檢測為陰性的無毒材料轉入繼代培養基，進行增殖培養，置于培養室，在24～26 ℃條件下暗培養30～40 d，將增殖生成的叢生芽分割為單株，繼續轉入繼代培養基，每瓶接種5～6株，24～26 ℃條件下暗培養30～40 d，可誘導出大小不等的百合小鱗莖。

2.4.2 生根培養

將分化出的小鱗莖轉入生根培養基中進行生根培養，每瓶接種5～6株，置于培養室，24～26 ℃條件下暗培養，一般40～50 d鱗莖直徑可達0.5～1.0 cm的出瓶標準。

3 脫毒原種球的獲得

3.1 設施條件

選擇在背風向陽、排灌便利、前茬作物不為蔥蒜等球莖類作物的地塊建設大棚，棚上覆蓋遮陽網，保證夏季棚內最高溫低于25 ℃，門口及通風口安裝防蟲網。

3.2 種植前準備

3.2.1 基質配制和消毒

按草炭∶珍珠巖∶河沙＝2∶1∶1的體積比例混勻基質，然后用40%福爾馬林50倍液均勻噴灑配制好的基質進行消毒，噴灑完畢后用塑料薄膜覆蓋24 h，然后揭膜風干2周左右，以消除殘留藥物危害。

3.2.2 栽植床準備

棚內建造栽植床，床面寬100～120 cm，床高140～150 cm，床深15～30 cm，2床間留距離25～30 cm的操作通道。

3.2.3 種植前材料處理

將達到出瓶標準的脫毒原原種整瓶放入4 ℃低溫冷藏室，暗培養60～70 d，用以打破休眠。種植前選擇生長健壯、根系發達的小鱗莖整瓶放入溫度15～20 ℃的棚室內，打開瓶蓋后煉苗3 d，然后將鱗莖從瓶內取出，立即清洗并盡快種植。

3.3 種植

將基質平鋪于栽植床，厚度8～12 cm，將鱗莖按照100～120個/m的密度種植，種植后覆蓋基質1～2 cm，然后澆透定根水。

3.4 栽培管理

3.4.1 溫度管理

出苗前棚內溫度宜保持在白天13～15 ℃，夜間5～10 ℃，空氣濕度70%～80%；出苗后整個生長期白天宜在18～25 ℃，夜間宜8～12 ℃，空氣濕度80%～90%。

3.4.2 水肥管理

根據氣候和基質的含水狀況合理澆水，整個生長期需保證基質持水量在60%～70%；展葉后至現蕾前，每隔20 d左右根施0.1%尿素＋0.1%磷酸二氫鉀＋0.1%硝酸鈣；現蕾后葉面噴施氨基酸水溶肥料（Cu＋Mn＋Zn＋B≥20 g/L，氨基酸≥100 g/L）水劑稀釋1 000倍液，每隔20 d噴施1次，共噴施2～3次。

3.4.3 摘蕾

花蕾長至1 cm左右時，應立即摘除。

3.5 病蟲害防治

百合病蟲害防治以預防為主，結合農業防治、生物防治和化學防治。發現感染病毒的植株，需及時拔除銷毀。發現病蟲害，及時噴藥，化學農藥的使用需符合NY/T 393—2020《綠色食品農藥使用準則》的規定。

3.6 種球采收

待植株枯萎后，小心將種球挖出，周長在14 cm以上的種球可作為生產商品球的繁殖材料，周長14 cm以下的種球，翌年繼續種植。