貴港市孕期女性耳聾基因篩查結果分析及耳聾出生缺陷的防控策略

鐘文富，黃菁雯，曾灝，葉慧芬，毛錦江，羅裕，楊日榮

(1.廣西醫科大學基礎醫學院免疫學教研室，廣西 南寧 530021；2.貴港市人民醫院檢驗科，廣西 貴港 537100； 3.廣西壯族自治區人民醫院檢驗科，廣西 南寧 530021)

0 引言

耳聾是最常見的出生缺陷之一，新生兒中聽力缺陷患兒出生概率約為1/1000[1]。聽力障礙給個人和家庭帶來沉重的經濟負擔和精神壓力，是嚴重影響人口素質和經濟發展的重大疾患。對孕婦進行耳聾基因篩查，必要時行產前診斷，可以幫助評估生產聾兒的風險，最終避免出生缺陷的發生。本研究對2200名聽力正常的孕婦進行基因篩查和產后隨訪，了解本地區耳聾基因突變的攜帶率，并對高危孕婦行產前診斷及遺傳咨詢，及時阻止耳聾患兒的出生，有效降低出生缺陷的發生率。

1 材料與方法

1.1 研究對象

為了得到箱梁翼緣板的準確正應力，將預應力加在兩腹板上的點10位置處，如圖1所示，兩根鋼束的預應力合力大小均為300 N。在ANSYS中利用LINK8單元模擬預應力作用，通過賦予初始應變得到所需預應力。研究初期，也曾用等效荷載加在同一位置處，提取的結果和用LINK8單元算出來的結果進行對比分析，最后發現誤差較小，說明用LINK8單元模擬縱向預應力筋是準確的?？缰惺┘拥募泻奢dP亦可模擬車輪荷載作用下在跨中的等效集中力。

選擇2200例聽力正常的孕婦為研究對象，向其進行耳聾基因篩查內容宣教后，孕婦接受篩查并簽署知情同意書。

1.2 實驗儀器

Waters高效液相色譜儀：Waters515二元梯度泵，Waters2487DualλUV檢測器。0.45 μm微孔濾膜(天津菲羅門)，旋轉蒸發儀(上海亞榮RE-52型)。GA3，IAA和ABA標準樣品均為Fluka公司的HPLC試劑，乙腈和甲醇為色譜級，實驗用水均為二次蒸餾水。

8點了，營業部里的人陸續來上班了，大家都像往常一樣打著招呼，可大家都覺得彼此的眼神和話語里好像多了些內容，到底是什么內容，大家都不好說，也不能說。

通過電話、網絡等多種途徑對已分娩孕婦進行了隨訪，4例新生兒聽力初篩未通過，42天復查通過，尚未發現先天性耳聾患兒出生。

2200例孕婦中檢查出耳聾基因攜帶者53例，攜帶率為2.41%。具體結果見表1。

為了慶祝李家莊整體建成李家社區，縣電視臺拍攝了一部《從農民到市民的跨躍》的專題片，采訪的第一個對象就是我。當村支書李順（對了，現在叫社區主任）帶著記者上樓時，我正癡迷地看著我那個小魚塘。

《后漢書》卷七十八《宦者列傳》張讓傳：“(靈)帝本侯家，宿貧，每嘆桓帝不能作家居，故聚為私藏，復寄小黃門常侍錢各數千萬。常云：‘張常侍是我公，趙常侍是我母?！盵31](第9冊，P2536)早年的貧窮并不必然導致關心民生疾苦，反而極有可能導致極端的貪婪。靈帝已是帝王之尊尚且如此，又何怪乎貪腐橫行。正是基于此，我們反思錢穆所謂“全民政治”，平民進入政府是否必然保障政府關心平民？徐復觀的反駁顯然極有道理，“陳世美現象”就是最好的證明。一個人為了自己向上爬可以拋妻棄子，又怎能指望如此之人為民請命呢！

4個常見耳聾基因中的13個熱點突變。

1.5 樣本的檢測

抽取被檢者2mL靜脈血，提取樣本DNA進行PCR擴增，將PCR產物變性、冰水浴后進行膜條雜交，經過洗膜封閉膜等操作后顯色觀察結果。

1.4 檢測位點

1.6 建議耳聾基因攜帶者的丈夫也進行同型基因檢測，采樣后送至廣州凱普檢驗所行Sanger測序。1.7 對攜帶同基因型的夫婦提供遺傳咨詢，在夫婦充分知情同意情況下進行產前診斷，經超聲介導行羊膜腔穿刺術抽取羊水，提取羊水細胞DNA進行基因檢測。

1.8 孕婦生育后，對新生兒的聽力狀態進行追蹤隨訪。

DNA提取試劑盒(廣州凱普)，耳聾易感基因檢測試劑盒(廣州凱普)。

2 結果

2.1 孕婦耳聾基因篩查結果

1.3 實驗試劑

表1 2200例孕婦耳聾基因突變類型及突變率(n=2200)

2.2 配偶基因檢測結果

50例攜帶有GJB2或者SLC26A4 基因變異孕婦的丈夫，40例同意行相應基因檢測，其中37例未檢測出基因變異，3例檢測出基因變異。具體結果見表2。

就目前我國槍械的性能來說,其總體性能與國外同類產品相比確實具有一定差距。我國某型號步槍的綜合性能相當于美國的M16A2、俄羅斯的AK74M。該步槍的機械系統復雜,各種原因引起的故障問題不可避免。由于步槍多為單人手提武器,伴隨士兵行動,使用時多為貼身操作,一旦發生故障,即有危害人身安全的可能[1-3],因此步槍故障問題的研究具有十分重要的意義。

表2 3個家庭耳聾基因檢測結果

2.3 攜帶相同變異基因家庭的妊娠結局

攜帶相同變異基因家庭經過充分的遺傳咨詢和知情同意，1號孕婦接受產前診斷，羊水檢測結果為c.235delC純合突變，最終選擇終止妊娠；2號與3號夫婦拒絕產前診斷，胎兒足月生產，均通過聽力篩查并做了基因篩查。胎兒基因結果見表3

表3 3例胎兒基因檢測結果

2.4 產后隨訪

核酸提取儀，PCR擴增儀，雜交儀，冰盒等。

3 討論

每年新增的耳聾患兒絕大部分出生于聽力正常的家庭，目前尚無有效的治療辦法，對家庭和社會產生巨大的壓力。其中影響最大的是先天性耳聾，如果不能在言語發育前及時干預，不僅可能因聾至啞，甚至可能影響其認知、智力等的發育。因此，推廣孕期耳聾基因篩查及對先天性耳聾早發現、早干預，對降低耳聾出生缺陷和對改善耳聾患兒生活質量意義重大。

夏 季 ：峰 時 段（8：00-11：00、13：00-15：00，18：00-21：00），平時段（6：00-8：00、11：00-13：00、15：00-18：00，21：00-22：00），谷時段（22：00-次日6：00）；峰時段電價 1.132 元/kWh，平時段電價0.700元/kWh，谷時段電價0.264元/kWh。

有調查發現超50%的非綜合征型耳聾是因為GJB2、GJB3、SLC26A4及線粒體12SrRNA這四個基因突變引起，其中GJB2基因突變占比最高[2]。目前我國耳聾基因篩查主要是針對4個基因中的9-20個位點。據報道，篩查9個位點平均攜帶率為4.3%，篩查20個位點平均攜帶率為4.7%，隨著檢測位點的擴大，檢出率增加[3]。盡管增加了檢測位點，但僅提高很有限的檢出率，同時檢測成本也隨之增加，因此各地區因根據自身流調依據，找出本地區突變率高的位點，選擇適合本地區的篩查方案，節約檢測成本的同時也提高檢出率。本調查受檢孕婦接受了4個基因13個位點的篩查，只檢出53例，四個耳聾基因中的7種突變位點，攜帶率排在前3位的熱點突變依次為235delC、IVS7-2A＞G、1229C＞T，本研究結果符合此前235delC為國內最常見基因突變的結論[4]。本次研究貴港地區耳聾基因攜帶率為2.41%，低于張昊晴等的報道[5]，考慮的原因有：(1)研究數量較少，抽樣誤差所致；檢測位點偏少，或者檢測的位點并非本地區熱點；(2)檢測方法學限制，相比二代測序，測序方法能檢測到少見、新發突變或者臨床意義不明確的突變；(3)耳聾基因具有較高的遺傳異質性，不同地區、不同民族有各自的特點[6]。因此，后續需增加研究樣本量，找出本地區覆蓋率高的耳聾基因突變位點， 制定更適合本地的篩查方案服務臨床。

GJB2突變后可導致感音神經性耳聾，患者多為先天性耳聾，發病時間早，臨床表現嚴重，以235delC突變最常見。本研究一孕婦產前診斷羊水結果為GJB2 235delC純合子突變，純合子突變臨床表現為出生后即有重度甚至極重度耳聾，經充分考慮家屬要求終止妊娠，避免了先天性聾兒的出生。

隨著基因測序技術的發展，大量未知的突變位點被發現，因缺乏臨床數據的支持，許多臨床意義不明確的變異位點給臨床遺傳咨詢帶來了巨大的困擾。本研究中丈夫的 GJB2 基因測序結果中發現2例c.109G＞A突變，近年研究發現 c.109G＞A 普遍存在于亞洲人群中，且該變異位點的致病性存在很大分歧[7]，主要是c.109G＞A純合子或者復合其他突變在臨床表現差異性極大，這給遺傳咨詢和產前診斷的工作開展帶來了困惑。本研究中，經遺傳咨詢告知夫婦c.109G＞A位點變異的臨床表現差異性很大，充分考慮后拒絕產前診斷，胎兒足月出生且通過聽力篩查。其中一例新生兒基因型為c.109G＞A/c.235delA復合雜合變異，后期這類攜帶者的臨床表現并不清楚，定期的聽力檢測及長期的追蹤隨訪，對明確c.109G＞A/c.235delA復合雜合變異的致病性有重要意義。針對這類攜帶者的遺傳咨詢需小心謹慎，明確告知該基因型的遺傳表型多樣化，并讓家屬充分知情選擇是否進行產前診斷及胎兒抉擇。

SLC26A4 基因變異可導致后天中度以上感音神經性耳聾，多為語后聾[8]，也俗稱“一巴掌打聾”?；純撼錾鷷r大部分聽力正常，多在1歲后逐漸出現癥狀，表現為聽力逐漸下降，因此必須在患兒聽力損失不重的時候及早發現并積極干預，及早驗配助聽器；并對患者家屬進行看護指導，避免劇烈活動及頭部撞擊引起耳道破裂造成遲發性耳聾。少部分成年后由于頭部受到碰撞、打擊等刺激后出現聽力減退甚至進展為耳聾，具有表型差異性，容易被忽略。因此，通過篩查及早發現高危人群，并加強對高危人群的管理和宣教，能有效避免后天性遺傳性耳聾發生和發展。本研究SLC26A4 基因的檢出率是僅次于 GJB2 基因，本地區攜帶率為 1.09%，最常見突變位點有兩個，即IVS7-2A＞G和1229C＞T，與大規模流調的結果有差異[9]，可能原因是SLC26A4基因突變位點存在明顯的地域差異。

線粒體12SrRNA基因突變會導致藥物性耳聾，表現為母系遺傳[10]。線粒體12SrRNA基因突變位點以1555A＞G最常見，一旦誤用氨基糖苷類抗生素，將導致細胞內線粒體功能障礙，即使少量的氨基糖苷類抗生素也可能導致不可逆的聽力損傷。本次調查發現2例孕婦為藥物性耳聾基因攜帶者，占0.09%，較耿國興等報道[11]的比率偏低。當前，藥物性耳聾尚無有效的治療措施，通過篩查及時發現攜帶者，對該基因攜帶者及其母系家族成員提供遺傳咨詢及相關用藥的指導，能有效避免因誤用藥物導致耳聾的悲劇發生。

GJB3基因是夏家輝院士定位并克隆的第一個本土基因，與進行性高頻耳聾相關。GJB3基因c.537C＞T位點變異的致病性爭議較大[12]，因此很多遺傳咨詢專家不建議對該基因進行產前診斷。本研究中僅檢出 1例 GJB3 c.538C＞T 變異位點攜帶者，自述無耳聾家族史且目前聽力正常。GJB3 基因突變在我國人群中發病率普遍不高，本地區 GJB3 基因攜帶率也僅為0.045%。針對目前GJB3基因突變的致病性尚存異議，遺傳咨詢醫生需結合臨床表現，謹慎給出對于 GJB3 c.538C＞T的遺傳咨詢，并通過長期隨訪其聽力進展來增加臨床數據。

她處于極度的絕望，坐在風雪中，仰望天空，雪在空中凝固了，風在空中凝固了，一切在這一刻都停止了呼吸，就連高高的煙囪上面飄散出來的濃煙和熱氣，這一刻也定格成一種僵硬的造型。

本實驗采用PCR+導流雜交方法僅對常見的4種基因13個位點的耳聾基因進行篩查，不可避免會漏檢部分突變位點，這是本研究的局限性。二代測序技術的研發應用，將成為極具潛力的耳聾基因篩查和診斷工具，其高通量的性能非常適合大規模人群的普篩及流行病學的調查[13]，對耳聾出生缺陷的防治意義非凡，但鑒于測序成本高，儀器設備昂貴，目前臨床推廣難度較大。

本研究對孕期女性進行常見耳聾基因篩查，同時對攜帶者的丈夫進行基因測序，針對高危孕婦行產前診斷可有效避免聾兒的出生，實現耳聾出生缺陷的二級防控[14-15]。高攜帶率是我國耳聾殘疾高發的根本原因，因此，建議把耳聾基因篩查納入婚檢、產檢及新生兒聽力篩查項目，早發現早干預，從根本上阻斷致病基因的傳遞，降低耳聾出生缺陷的發生。