牙鲆“鲆優2號”試養效果評估

宋立民，劉肖蓮，賈 磊，蔡 超，姚學良，薄其康，郝 俊，丁子元

（天津市水產研究所，天津 300221）

牙鲆（Paralichthys olivaceus）是生活在我國渤海、黃海、東海以及日本、韓國和朝鮮等東亞國家沿岸海域的一種鲆鰈魚類，也是天然捕撈的重要經濟魚類之一[1]。鑒于近年來牙鲆野生資源急劇減少[2]，我國從20世紀90年代開始進行牙鲆的商業化人工育苗和養殖，經過多年的研究和推廣，目前已發展成為我國海水魚類養殖的主導品種之一[3-4]。牙鲆養殖曾在天津市海水魚養殖中占重要地位，大多采取工廠化養殖的方式[5]，主要分布于漢沽區，其次為塘沽區、大港區、農墾集團。據天津市水產局（現已并入天津市農業發展服務中心）統計，2012—2016年天津市上述各區牙鲆養殖年總產量依次為2 254、2 431、2 583、1 689、1 094 t，分別占到當地當年海水魚類養殖總產量的 61.5%、69.0%、70.6%、54.3%、38.6%。2017年以后，天津市牙鲆養殖產量下降趨勢明顯，究其原因主要為多種病害的頻發迫使漁民逐漸放棄傳統牙鲆的養殖[5-6]。其中，由遲緩愛德華氏菌引起的牙鲆腹水病，整個生長周期可發病，經常造成大批牙鲆死亡[4，7]，對養殖生產危害尤為嚴重。

為提高養殖牙鲆對腹水病的抵抗能力，黃海水產研究所陳松林團隊以近10年來建立的450多個牙鲆家系及篩選到的抗遲緩愛德華氏菌病家系為基礎，培育出牙鲆——“鲆優2號”。該品種不僅具有中、日、韓三大區域群體和抗鰻弧菌群體遺傳背景，而且具有花色好、生長速度快、抗遲緩愛德華氏菌引起的腹水病等優點[4，8]。為改善天津市牙鲆常規養殖品種疾病頻發的現狀，滿足養殖者的需要，振興當地鲆鰈魚類產業，促進漁民增產增收，本試驗從天津市牙鲆養殖種質改良需求出發，將“鲆優2號”引入天津，進行試驗養殖，以評估該品種在天津市的適應性，并通過一定的示范效應引導當地漁民改良養殖品種種質，從而為新品種的大規模引進和推廣養殖奠定技術基礎，增加當地水產養殖的經濟和生態效益，為建立健全新品種引進的評估規范提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

“鲆優2號”苗種購自山東省海陽市某公司，普通牙鲆苗種購自河北省秦皇島市某公司，挑選規格相近、健康無病的兩組試驗魚進行試養，試驗魚部分可量性狀初始值見表1。兩組樣本對應參數值差異不顯著（P>0.05）。試驗開始前，兩組試驗魚經過為期7 d的馴化暫養以適應環境和飼料。

表1 試驗牙鲆可量性狀初始值

1.2 試驗設計

試驗在天津市項目合作企業進行，分3個子試驗：“鲆優2號”牙鲆與普通牙鲆生長性能比較，發病情況調查和養殖尾水氮、磷指標檢測。試驗魚養殖方式為工廠化流水養殖，試養所用水泥池面積約42 m2，養殖水位0.45 m，水溫17.0～22.5℃，溶氧6.14～8.02 mg/L，pH 值 7.69～8.40，鹽度 27‰～29‰。不同規格苗種對應的放養密度見表2。設定“鲆優2號”牙鲆試驗池與普通牙鲆對照池各3個，管理操作相同。

表2 試驗牙鲆放養密度[6]

1.3 數據采集方法

1.3.1 生長性能指標測定

將試驗魚禁食24 h，采用氨基甲酸乙酯麻醉，分別隨機撈取“鲆優2號”牙鲆和普通牙鲆各30尾，逐尾稱重（精確到0.01 g），并用相機對每一尾魚進行標準圖片采集，然后使用Motic Images Plus 2.0軟件在電腦上對試驗魚進行各數量性狀的測定，包括全長、體長、頭長、體高（表3，圖1），并用比例尺校正為真實數據（精確到0.01 cm）。生長速度和形體指標采用以下公式[9-10]進行計算。

圖1 牙鲆可量性狀起止點模式圖[11]

表3 牙鲆可量性狀介紹

式中，W為試驗魚體重（g）；t2、t1分別為試驗終結和初始時樣本魚的日齡；W2和W1分別為測量時日齡t2和t1對應的體重；L為魚體長（cm）；L2和L1分別為測量時日齡t2和t1對應的體長；SD為標準差；X為平均值。

1.3.2 發病及成活率統計

試驗期間（2018年9月—2019年5月）仔細觀察病魚特征，按每30 d一次對試驗魚的死亡情況進行統計。存活率和死亡率計算方法[10]如下。

式中，N0和Nt分別為試驗魚放養尾數和階段性試驗結束時試驗魚的尾數。

1.3.3 尾水氮、磷指標測定

試驗周期為2019年3月5日—4月2日。按照“1.3.1”描述方法對樣本魚進行稱量，獲得樣本初始體重與終末體重數據?！蚌覂?號”牙鲆初始規格（0.29±0.06）kg/尾，普通牙鲆初始規格（0.25±0.04）kg/尾。

氮、磷指標檢測數據采用美國哈希公司生產的水質分析儀DR900進行測定，具體包含試驗魚養殖水體銨態氮、總氮、可溶性磷酸鹽、總磷。試驗期間，每7 d于換水前、后再次測定上述指標，做好記錄。

試驗養殖采用流水加換水方式，單日流水時長約22 h，水流速約為55 L/min，單日徹底換水兩次，計算用水總量為110 400 L

試驗魚單位體重增加量對環境中氮、磷的貢獻值按下式計算

式中，S0表示進水口氮、磷指標檢測值（mg/L）；St表示試驗尾水氮、磷指標檢測值（mg/L）；W0表示單個水泥池試驗魚初始總體重（g）；Wt表示試驗結束時單個水泥池魚總體重（g）。

1.4 數據分析

試驗數據采用Microsoft Excel 2010軟件進行統計。生長、體型、變異系數、死亡率、存活率、氮磷增量等指標比較結果采用百分比表示，計算公式為

式中，P2x表示以“鲆優2號”牙鲆試驗魚為樣本測定的指標數值；Px表示以普通牙鲆試驗魚為樣本測定的指標數值。

2 結果與分析

2.1 生長性能對比

2018年9月—2019年5月共采集9批次試驗魚樣本，分別測定了體重、全長、體長、頭長、體高等可量性狀。由表4可知，“鲆優2號”牙鲆絕對增重率高于普通牙鲆19.41%、絕對增長率高于普通牙鲆16.67%，表明“鲆優2號”牙鲆在生長速度方面具有一定優勢；試養期間，采集的9批樣本組中“鲆優2號”牙鲆平均肥滿度低于普通牙鲆22.87%，全長/體長值略低于普通牙鲆0.89%，其他體型參數無差別，不同群體間存在一定表型差異；“鲆優2號”牙鲆體重、全長、體長、頭長、體高測量數據的變異系數分別低于普通牙鲆8.07%、16.03%、16.07%、30.31%、27.88%，表明“鲆優2號”牙鲆群體內部表型差異小于普通牙鲆。

表4 試驗牙鲆生長、體型參數的比較

2.2 發病情況觀察

參考尚琨等[12]的方法，統計過程中將腹部明顯膨脹的活魚和解剖后腹腔有水樣物的死魚作為試驗魚患腹水病的標準。由圖2和圖3可知，腹水病和淋巴囊腫病為試驗魚的主要發生疾病，2018年9—11月試驗魚因患腹水病的死亡率最高；2019年2—3月試驗魚因患淋巴囊腫病的死亡率最高。試養期間，腹水病和淋巴囊腫病在“鲆優2號”牙鲆群體總死亡個體中分別占33.11%、61.44%；在普通牙鲆群體的死亡個體中分別占37.42%、55.05%，兩個群體死亡個體分配比例相近，淋巴囊腫病損失最為嚴重。

圖2 試養期間“鲆優2號”死亡情況

圖3 試養期間普通牙鲆死亡情況

由表5可知，“鲆優2號”牙鲆患腹水病的死亡率低于普通牙鲆73.95%、患淋巴囊腫病的死亡率低于普通牙鲆67.14%，且試驗期間“鲆優2號”牙鲆群體的最終成活率高于普通牙鲆群體31.07%，表明“鲆優2號”牙鲆具有較好的抗病優勢。

表5 兩組試驗牙鲆群體死亡情況比較 單位：%

2.3 尾水中氮、磷含量檢測

“鲆優2號”和普通牙鲆試養水池進水口氮、磷指標監測情況為：銨態氮含量低于檢測下限（0.01 mg/L），總氮含量為0.01 mg/L，可溶性磷酸鹽含量為0.01 mg/L，總磷含量為0.03 mg/L；尾水氮、磷指標檢測值范圍分別為：銨態氮0.40～1.2 mg/L，總氮0.8～2.1 mg/L，可溶性磷酸鹽0.05～0.62 mg/L，總磷0.86～1.42 mg/L。以單位體重增長量為前提，考慮尾水中新增銨態氮、總氮、可溶性磷酸鹽、總磷的含量（表6），“鲆優2號”牙鲆試驗組比普通牙鲆試驗組分別少48.56%、35.37%、29.68%、37.36%，可見飼養“鲆優2號”牙鲆產出高且對環境氮、磷相關的富營養化影響較小，飼養“鲆優2號”牙鲆具有較高的生態效益。

表6 試驗牙鲆單位體重增長量排放尾水中新增的氮、磷量 單位：g/kg

3 試養效果評估

3.1 “鲆優2號”牙鲆抗病性能評估

試養期間，試驗魚的發病癥狀有腹腔積水、腸道積液、腸道充血、淋巴囊腫、體表潰爛、下頜充血、魚鰭充血、鰓絲腫大、鰓絲褪色及其他癥狀，這些癥狀均在肖國華等[13]進行的牙鲆流行病學調查結果中被報道。鑒于本試驗引進的“鲆優2號”牙鲆主要抗病性能為抗遲緩愛德華氏菌引起的腹水癥，且試養過程中試驗魚的主要死亡病癥具有腹腔積水和淋巴囊腫（兩種癥狀死亡樣本數分別占死亡個體總數比例為>33%、>55%）的特點（表5），本試驗將腹水病、淋巴囊腫病作為重點病例進行了統計。

魚類“腹水癥”是以腹水的形式為主要臨床特征的一大類魚類疾病的總稱，已有資料表明牙鲆腹水病病原菌有遲緩愛德華氏菌、致病性嗜水氣單胞菌、溶血弧菌等[14]。本試驗過程中發生的腹水癥多伴隨體表（下頜、鰭、腹部等）充血，腸道炎癥（腸內積黏液、充血等），這與張曉君等[15]的描述相近。腹水病對牙鲆養殖危害嚴重，趙貴萍等[14]報道該病致死率可達80%～90%、尚琨等[12]報道該病死亡率達60%，本試驗過程中亦有腹水病發生，“鲆優2號”牙鲆和普通牙鲆兩群體中腹水病患病個體占比分別為2.98%和11.44%，證明“鲆優2號”牙鲆在天津市試養具有抗腹水病優勢。試驗期間，腹水病主要發生在氣溫較高的月份，這與其他研究結果相近[16-17]。

淋巴囊腫?。╨ymphocystis disease，LD）是由虹彩病毒科（Iridoviridae）淋巴囊腫病毒（lymphocystis disease virus，LDV）引起的一種魚類病毒性傳染病[18]。據報道，1997年我國首次大規模暴發該病[19]，牙鲆感染率可達90%[20]，患病魚幾乎全部喪失商業價值，對我國水產養殖影響巨大[21]，其暴發呈現典型的季節性規律[22]。本試驗“鲆優2號”牙鲆樣本群體發病期主要集中于2、3月，普通牙鲆群體則從1月延續到4月，發病周期和程度更為嚴重，表明“鲆優2號”牙鲆可能具有抗淋巴囊腫病的優勢，并具有一定的變異能力、選擇范圍和選擇潛力，可以為抗淋巴囊腫病新品種的選育提供可能。

3.2 “鲆優2號”牙鲆養殖生態效益評價

經實地調查發現，天津市養殖場用水水源主要有曝氣地下水和經過一定程度凈化的外海水，水質一般較為優良，但是經過養殖生產，由于魚體排泄、飼料溶解、微生物活動等，會產生尾水富營養化問題，對養殖對象的健康和環境造成一定影響。據報道，氨氮脅迫可使魚類鰓絲增生、黏液增厚、血細胞攜氧能力下降[23]、肝臟水腫、機體抗氧化能力下降[24]等，且氮和磷元素同為水體富營養化關鍵控制因子[25]。水產業的發展前途在于可持續、綠色、高效，需要經濟效益和生態效益并舉[26]，試驗對4種氮、磷指標進行了跟蹤測定，并將其作為環境影響代表因素，對試養效果進行了評估。

研究表明，池塘養殖1 kg鯉魚每天要排出0.30 g氨[27]，生產1 kg蝦會增加0.20 kg氮和0.05 kg磷[28]，而生產1 kg虹鱒需排出總磷和總氮的量分別為0.023 kg和0.100 kg[29]，生產1 kg黃顙魚總氮和總磷的增加量分別為10.72、5.53 g[30]。另有報道，棉花灘水庫養殖獲得1 kg魚將有70 g氮和14 g磷通過各種形式進入水體[31]。本試驗結果顯示，“鲆優2號”牙鲆樣本增長1 kg，尾水中銨態氮、總氮、可溶性磷酸鹽、總磷單日分別增加 2.15、4.55、1.09、3.32 g，普通牙鲆樣本則分別增加 4.18、7.04、1.55、5.30 g，可見水產養殖尾水中氮、磷排放量受養殖品種、養殖方式、試驗條件和環境的限制，所得結果不一，但是相同條件下同樣的產出，“鲆優2號”牙鲆產生的氮、磷值相對較小，理論上具有較高的生態效益。

4 討論與結論

天津市具有獨特的氣候、水環境資源[32-33]，區域內鲆鰈魚類養殖模式和管理方法有自身特點[5，34]，需要對引進的外地新品種進行試養評估。在品種選育中，生長速度和抗病性能是備受人們關注的重要經濟性狀[35-37]，同時配套管理是發揮新品種性能優勢的技術保障。在本試驗條件下經過選育的牙鲆新品種“鲆優2號”表現為更容易適應清掃池底、人工分選、倒池等操作，環境適應能力較強，表現出了明顯優于普通牙鲆的生長優勢，選育效果未受地域限制，此結果與相關報道一致[4]。在體型參數方面，造成“鲆優2號”牙鲆肥滿度和全長/體長值低于普通牙鲆的原因可能是人工定向選育形成的群體差異，需要增加測量體厚、尾鰭長等指標做進一步考量?！蚌覂?號”牙鲆具有提升當地漁業經濟效益的種質條件，適合在天津市推廣。

體重變異系數主要反映了某種魚類群體生長規格的一致性程度[38]，在養殖生產方面，體重變異系數反映出成魚出池規格的差異，體重變異系數越小，規格越相近，養殖效益越高[39]。從試驗結果看，“鲆優2號”牙鲆體重、全長、體長、頭長、體高測量數據的變異系數均低于普通牙鲆，表明“鲆優2號”牙鲆體型規格整齊、理論養殖效益好于普通牙鲆，具有一定的選育潛力。

本試驗圍繞以生長性能、抗病力為代表的經濟學指標以及氮、磷排放為代表的生態學指標開展試驗研究，對引進“鲆優2號”牙鲆進行當地試養綜合評價?！蚌覂?號”牙鲆與普通牙鲆相比具有生長快、抗病力強的優勢。養殖相同產量的“鲆優2號”牙鲆對環境造成的氮、磷富營養化程度小于普通牙鲆，由此可見，引進“鲆優2號”牙鲆可以作為天津市優化鲆鰈魚類養殖種質、提高養殖經濟效益和生態效益的途徑，“鲆優2號”牙鲆可以作為天津市推廣養殖的品種。

建議養殖戶充分利用現有設施，探索建立循環水養殖模式，消除尾水對環境富營養化的影響。鑒于淋巴囊腫病在試驗過程中對養殖產量造成極大損失，今后應加強抗淋巴囊腫病牙鲆選育的研究。