唐 奕
(邵陽市食品藥品檢驗所,湖南邵陽 422000)
食品企業在產品中添加甜味劑(安賽蜜、糖精鈉)和防腐劑(苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸),以改善食品的口感、延長保質期[1]?!妒称钒踩珖覙藴?食品添加劑使用標準》(GB 2760—2014)對適用范圍和限量要求都作出了明確規定[2]。目前這5種食品添加劑使用多個方法標準進行檢測,同時測定的報道甚少,造成檢驗效率低,實驗成本高[3]。本試驗在GB 5009.28—2016[4]、GB 5009.121—2016[5]、GB/T 5009.140—2003[6]的基礎上,優化試驗條件,同時測定以上5種食品添加劑,以科學高效保障食品質量安全。
Agilent 1260高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器、配自動進樣器);mini UV超純水機。
安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸,國家標準物質,1000 μg/mL,北京海岸鴻蒙標準物質技術有限公司;甲醇,色譜純;乙酸銨、亞鐵氰化 鉀、乙酸鋅、硫酸鋅和氫氧化鈉,分析純。
試驗樣品為碳酸飲料、含乳飲料、辣椒醬,市售。
1.2.1 色譜條件
色譜柱:C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流動相:甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液(7∶93);流速:1 mL/min;檢測波長:230 nm;柱溫:40 ℃;進樣量:10 μL。
1.2.2 標準溶液配制
安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標準中間溶液(250 μg/mL):分別準確吸取 12.5 mL安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸標準儲備溶液(均為1000 μg/mL)于50 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。
安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標準系列工作溶液:分別準確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標準中間溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL和5.00 mL于10 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,配制成質量濃度分別為25 μg/mL、50 μg/mL、75 μg/mL、100 μg/mL和125 μg/mL的混合標準系列工作溶液。
1.2.3 流動相比例
試驗選用甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液作為流動相,分別采用5∶95、7∶93、10∶90這3種不同的比例進行混合標準溶液的測定。
1.2.4 樣品預處理
稱取約2 g碳酸飲料于50 mL具塞離心管中,加水約25 mL,渦旋混勻,超聲20 min,加水定容至刻度,過0.22 μm濾膜,待測[3]。
稱取約2 g含乳飲料、辣椒醬于50 mL具塞離心管中,加水約25 mL,渦旋混勻,超聲20 min,冷卻至室溫,加沉淀劑以沉淀蛋白質,混勻,加水定容至刻度,于8000 r/min離心,取適量上清液過0.22 μm 濾膜,待測。本次試驗選用兩種沉淀劑進行比較測定:沉淀劑1為亞鐵氰化鉀溶液(106 g/L)+乙酸鋅溶液(220 g/L)各2 mL;沉淀劑2為硫酸鋅(120 g/L)+ 氫氧化鈉(20g/L)各2 mL。
流動相比例的變化直接影響分離效果、出峰時間和順序,結果顯示甲醇∶乙酸銨溶液比例為5∶95時30 min全部分離,分離效果好,具體情況見圖1;比例為7∶93時25 min全部分離,分離效果好,具體情況見圖2;比例為10∶90時20 min全部分離,分離效果欠佳,出峰順序略有改變,糖精鈉在山梨酸前面出峰,兩個峰略有重疊,當樣品基質復雜時,容易出現雜質與目標物質分離不開,影響測定結果,具體情況見圖3。綜合考慮,本試驗選擇甲醇與乙酸銨的比例7∶93進行檢測。
圖1 甲醇∶乙酸銨=5∶95時色譜圖
圖2 甲醇∶乙酸銨=7∶93時色譜圖
圖3 甲醇∶乙酸銨=10∶90時色譜圖
按1.2.1條件進行混合標準系列工作溶液的測定,以保留時間和峰面積對濃度分別進行線性回歸,5種添加劑在25~125 μg/mL范圍內呈現良好的線性關系,安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙 酸相關系數分別為0.9999、1.0000、1.0000、0.9999和0.9999。
按本方法進行樣品制備,分別在試樣中加入5.0 mL 安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸 (50 μg/mL)混合標液(理論加標量為0.25 mg),根據樣品類別分別預處理后按1.2.1條件進行測定,做2個平行樣。其中,含乳飲料和辣椒醬采用2種沉淀劑進行前處理,然后測定。同時做樣品空白。
表1~表3結果顯示,5種添加劑的平均回收率為82.6%~104.4%,相對標準偏差為1.3%~4.6%。表2、表3結果顯示,2種沉淀劑回收率、精密度均達到理想效果。
表1 回收率測定結果及精密度(碳酸飲料)
表2 回收率測定結果及精密度(含乳飲料)
表3 回收率測定結果及精密度(辣椒醬)
本文建立了同時測定食品中5種添加劑的高效液相色譜法,該方法簡單快速,分離效果好,回收率高,精密度好,提高了檢測效率,降低了檢驗成本。選用的2種沉淀劑(亞鐵氰化鉀溶液+乙酸鋅溶液、硫酸鋅+氫氧化鈉)回收效果好,均適用于樣品中蛋白質的沉淀處理。