通脈降脂合劑安全性研究

孫振平，于德龍，仲 娜，裴 琳

（1. 青島市食品藥品檢驗研究院，山東 青島 266071 ；2. 青島市城陽區人民醫院，山東 青島 266108）

通脈降脂合劑為醫院自行研制的中藥制劑，由何首烏、澤瀉、茵陳、西洋參、靈芝、山楂、丹參、三七組成，具有祛痰利濕[1-2]、補腎活血的功效?，F代藥理學研究表明，通脈降脂合劑可降脂、抗血小板聚集，用于治療高脂血癥[3]、血栓性疾病[4-5]等具有良好的療效。但此藥的毒性作用易被忽視。為了全面、客觀、科學地評價本品有無毒性，本實驗參照《藥物研究技術指導原則》[6]的相關規定，對通脈降脂合劑進行了毒理學研究[7]，對該藥的安全性進行評價。

1 試劑與動物

通脈降脂合劑是由八味中藥飲片熬制而成的中藥湯劑，批號：2019-10-11，規格：500 mL/ 瓶，將其制備成最大濃度為原溶液6 倍（即生藥濃度7.2 g/mL）的藥液。昆明種小鼠，SPF 級，體重為18 ～22 g ；Wistar 大鼠，SPF 級，體重為200 ～250 g。這兩種小鼠均由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供。實驗動物生產許可證號：SCXK（魯）20190003。動物實驗室環境為SPF 級：室溫20 ～25 ℃，相對濕度40% ～70%。大鼠每籠5 只，雌雄（♀♂）分籠飼養，喂顆粒飼料（由濟南康大飼料有限公司提供），自由飲水，大鼠籠每周更換2 次，每周稱動物體重、飼料、飲水各1 次。

2 方法

2.1 小鼠急性毒性試驗[8-9]

2.1.1 通脈降脂合劑半數致死量（LD50）測定試驗選用小鼠10 只，♀♂各半，以最大給藥濃度7.2 g/mL（生藥）及最大灌胃體積40 mL/kg 給小鼠灌胃，結果顯示通脈降脂合劑最大濃度達生藥量288 g/kg，觀察7 d 均未出現死亡。限于藥物濃度及給藥體積不能再增大，不能測出其LD50。

2.1.2 通脈降脂合劑最大耐受量（MTD）測定試驗選用小鼠40 只，♀♂各半，采用S-PLUS 軟件按區組設計分為給藥組和陰性對照組，給藥組單次給予通脈降脂合劑0.4 mL:10 g，相當于生藥7.2 g/mL，對照組給予等量蒸餾水。兩組小鼠均于給藥前禁食不禁水16 h，給藥后連續觀察14 d，觀察內容包括小鼠的外觀形態、精神狀態、行為活動、糞便分泌物等。測定每只小鼠給藥第0 天、第7 天、第14 天的體重，對給藥組與陰性對照組進行比較。結果顯示所有小鼠均未出現任何毒性反應及死亡現象，體重增長正常，大體解剖觀察無異常。測得通脈降脂合劑對小鼠的最大耐受量（MTD）為生藥288 g/kg ，此劑量相當于臨床成人口服劑量的288 倍，未出現任何毒性反應及死亡情況。

2.2 長期毒性試驗[9]

2.2.1 動物與藥物 SPF 級Wistar 大鼠80 只，♀♂各半，采用S-PLUS 軟件按區組設計分組，分為空白對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組， 每組各20 只，♀♂各半。通脈降脂合劑：6 倍濃縮液（即生藥7.2 g/mL）作為原液。

2.2.2 劑量分組 通脈降脂合劑的臨床成人口服劑量：每日2 次，每次 25 mL，即臨床劑量為生藥1 g/kg（按體重60 kg 計）。通脈降脂合劑的急性毒性試驗未測出小鼠的LD50，其MTD 為生藥288 g/kg，亦未見小鼠出現明顯的毒性反應。按最大灌胃容量20 mL/kg 對大鼠進行長期毒性試驗，分別以原液（生藥144 g/kg）、原液1/2 濃度（生藥72 g/kg）、原液1/4 濃度（生藥 36g/kg）為高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠灌胃給藥，空白對照組大鼠給予蒸餾水灌胃。

2.2.3 給藥方法與檢測 為大鼠測體重，給藥前觀察4 d，大鼠的一般情況良好，每天灌胃給藥1 次，連續給藥5周，每周測體重1 次（♀♂分別統計），并與空白對照組比較。每周稱動物飼料1 次，計算攝食量。每周稱動物飲水1 次，計算飲水量。檢測時間：給藥5 周后。每組分別取10 只大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，5 min 后背位固定于小動物手術臺上，自股靜脈采血，行血液學與血液生化學檢測，并行系統尸解及病理組織學檢查。其余大鼠停止給藥，飼養照常，進行恢復性觀察，以了解毒性反應的可逆程度和可能出現的遲發性毒性反應，觀察內容與給藥期間相同。停止給藥后2 周，將各組動物全部采血處死，做相應檢查，檢查方法同上。檢測指標：一般觀察：外觀體征和行為活動（包括神態萎靡、蜷縮不動或過度興奮、躁動驚跳、肌肉麻痹或震顫、步態異常等），皮毛光澤度、貼身或稀疏豎散，糞便性狀、顏色，食量及體重變化，對死亡或瀕死動物及時尸檢；血液學檢查：紅細胞計數（RBC）、血紅蛋白（Hb）、白細胞計數（WBC）及其分類〔嗜中性粒細胞百分數（NE）、淋巴細胞百分數（LY）、單核細胞百分數（MO）〕、血小板計數（PLT），使用美國HEMAET950FS 型動物血液分析儀測定；血液生化檢查：天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、肌酸磷酸激酶（CK）、尿素氮（UREA）、肌酐（CRE）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBIL）、總膽固醇（TCHO）、甘油三酯（TG），使用日立7020全自動生化分析儀測定。

2.2.4 系統尸解和病理學檢查 1）系統尸解：全面細致，為組織學檢查提供依據；2）臟器重量：稱量腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮重量；3）臟器系數：計算腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮的臟器系數，臟器系數（g 或mg/g）=臟器重/體重×100%；4）病理組織學檢查：空白對照組、高劑量組尸檢異常時要詳細檢查，中劑量組、低劑量組只有在高劑量組有異常時才進行檢查。檢查器官包括：腦（大腦、小腦、腦干）、脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、小腸、大腸、肝臟、胰腺、腎臟、腎上腺、胸腺、脾臟、心臟、氣管、肺、主動脈、睪丸、附睪、卵巢、子宮、前列腺、膀胱、坐骨神經、淋巴結。

2.3 統計學方法

采用SPSS 11.0 軟件對各試驗組動物的體重、臟器系數（♀♂分別統計）、血液學、血液生化學指標等進行方差分析，以均數± 標準差（±s）表示，攝食量、飲水量以 g/100 g 體重表示。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 一般觀察結果

各劑量組大鼠給藥前后均被毛平順、潔白光澤、眼睛紅亮有神、反應機敏、步態正常、口周及尾部黏膜無破潰，未出現萎靡、蜷縮不動等情況，呼吸平穩、飲食正常、大便無黏液和稀溏，口周無紫紺，四肢及頭部無震顫，呈現出健康活潑的狀態?？梢?，通脈降脂合劑對♀♂大鼠的一般行為無顯著影響。

3.2 通脈降脂合劑對大鼠攝食量、飲水量、體重的影響

各組大鼠的攝食量和飲水量均隨動物生長周期的增加而呈下降的趨勢，組間未見異常。各給藥組體重與對照組體重比較，無明顯差異，這說明通脈降脂合劑不影響大鼠的生長發育。

3.3 通脈降脂合劑對大鼠系統尸解和臟器重量的影響

在給藥5 周及停藥2 周后分批活殺大鼠，觀察各臟器（腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮），顯示各臟器色澤良好，形態及位置關系正常，臟器間無粘連，臟器表面及內膜無瘀血、充血、出血點、水腫、糜爛、潰瘍等情況；胸腔、心包無積液等病理改變。臟器稱重結果表明，通脈降脂合劑各劑量對大鼠的臟器重量無明顯影響，停藥后也未見遲發性影響。說明通脈降脂合劑對大鼠的臟器重量無顯著影響。

3.4 通脈降脂合劑對大鼠臟器系數的影響

臟器系數檢查結果表明，通脈降脂合劑的高、中、低劑量組大鼠臟器系數與空白對照組大鼠均無顯著性差異，停藥2 周后檢查也無顯著性差異，說明通脈降脂合劑各劑量組給藥后對臟器系數無明顯影響，也未發現遲發性影響。結果見表1、表2。

表1 各劑量組Wistar 大鼠給藥結束期的臟器系數（± s ，n=5）

表1 各劑量組Wistar 大鼠給藥結束期的臟器系數（± s ，n=5）

臟器 性別 空白對照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組腦（g） ♀ 0.92±0.06 0.93±0.05 0.95±0.05 0.90±0.03♂0.75±0.09 0.79±0.09 0.83±0.06 0.68±0.08心臟（g） ♀ 0.43±0.09 0.37±0.03 0.41±0.02 0.37±0.01♂0.33±0.05 0.32±0.05 0.32±0.04 0.30±0.03肝臟（g） ♀ 3.70±0.41 3.65±0.25 3.92±0.26 3.58±0.22♂2.96±0.61 2.89±0.24 3.03±0.17 2.65±0.42腎臟（g） ♀ 0.92±0.05 0.90±0.07 0.97±0.03 0.91±0.03♂0.78±0.13 0.74±0.08 0.79±0.04 0.66±0.08腎上腺（mg） ♀ 31.51±2.99 30.90±3.71 34.19±2.13 32.59±1.65♂26.01±4.59 24.89±3.65 26.53±4.67 26.53±2.59胸腺（mg） ♀ 115.62±18.23 117.48±13.49 122.35±18.82 121.68±7.32♂100.36±31.34 91.88±23.36 108.88±5.32 101.19±7.04脾臟（g） ♀ 0.24±0.02 0.25±0.01 0.27±0.02 0.25±0.01♂0.21±0.04 0.20±0.04 0.21±0.01 0.20±0.01肺臟（g） ♀ 0.51±0.03 0.51±0.04 0.53±0.03 0.49±0.03♂0.49±0.04 0.49±0.02 0.50±0.05 0.46±0.05睪丸（g） ♂ 0.99±0.14 0.94±0.11 0.98±0.05 0.90±0.03附睪（g） ♂ 0.16±0.02 0.06±0.02 0.16±0.01 0.15±0.00卵巢（g） ♀ 0.04±0.00 0.04±0.00 0.04±0.00 0.04±0.00子宮（g） ♀ 0.25±0.04 0.26±0.05 0.27±0.03 0.26±0.02

表2 各劑量組Wistar 大鼠給藥恢復期的臟器系數（± s，n=5）

表2 各劑量組Wistar 大鼠給藥恢復期的臟器系數（± s，n=5）

臟器 性別 空白對照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組腦（g） ♀ 0.89±0.05 0.88±0.04 0.85±0.03 0.90±0.04♂0.63±0.06 0.64±0.02 0.56±0.03 0.60±0.09心臟（g） ♀ 0.38±0.08 0.37±0.04 0.40±0.03 0.39±0.04♂0.28±0.01 0.26±0.03 0.27±0.01 0.27±0.03肝臟（g） ♀ 3.66±0.45 3.90±0.35 3.94±0.25 3.95±0.24♂2.75±0.10 2.61±0.29 2.63±0.04 2.64±0.27腎臟（g） ♀ 0.92±0.04 0.90±0.07 0.91±0.05 0.91±0.06♂0.54±0.01 0.60±0.07 0.61±0.01 0.61±0.07腎上腺（mg） ♀ 33.05±2.98 32.56±3.75 33.38±2.23 33.90±1.75♂23.82±0.57 22.64±1.34 21.91±0.34 22.39±3.14胸腺（mg） ♀ 117.15±17.23 115.48±12.49 117.02±19.82 116.68±7.22♂82.73±1.64 82.34±0.48 78.41±2.75 79.42±7.03脾臟（g） ♀ 0.25±0.03 0.26±0.02 0.27±0.01 0.25±0.02♂0.17±0.01 0.17±0.02 0.17±0.00 0.17±0.02肺臟（g） ♀ 0.47±0.03 0.46±0.05 0.48±0.02 0.79±0.05♂0.34±0.01 0.26±0.12 0.31±0.01 0.32±0.02睪丸（g） ♂ 0.81±0.02 0.76±0.07 0.77±0.03 0.77±0.06附睪（g） ♂ 0.13±0.01 0.12±0.01 0.12±0.00 0.12±0.01卵巢（g） ♀ 0.04±0.01 0.04±0.02 0.04±0.01 0.04±0.01子宮（g） ♀ 0.28±0.03 0.24±0.04 0.27±0.02 0.27±0.02

3.5 通脈降脂合劑對大鼠血常規檢查結果的影響

血常規檢查結果表明，通脈降脂合劑長期用藥對大鼠的血常規無明顯影響，停藥后2 周檢查也未發現遲發性影響。說明通脈降脂合劑長期大量用藥對血常規無影響。

3.6 通脈降脂合劑對大鼠血清生化學檢查結果的影響

血清生化學檢查結果顯示，試驗結束期和恢復期各試驗組與空白對照組大鼠各血清生化學指標比較均無顯著性差異（P＞0.05）。

3.7 病理檢查結果

通脈降脂合劑給藥5 周及恢復2 周活殺各組大鼠，取腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮，用10% 甲醛固定，檢查各期高劑量組和空白對照組大鼠，行石蠟切片，HE 染色，光鏡觀察。觀察的結果顯示，兩組大鼠各期主要臟器組織細胞形態正常，均未見藥物引起的特異性毒性反應，組間無明顯異常?？梢詳喽?，中劑量組和低劑量組大鼠各期主要臟器亦無特異性毒性反應。

4 討論

本次實驗中，對通脈降脂合劑進行了2 個階段的毒性試驗。在第1 階段急性經口毒性試驗中，50 只小鼠安全劑量均為288 g/kg，是臨床擬用劑量的288 倍。說明該樣品屬于無毒性物質。在第2 階段試驗中，本藥長期給藥不影響大鼠活動、行為及外觀，對大鼠生長發育無明顯影響，大鼠的血常規及血清生化學指標無明顯變化，大鼠腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮等組織無明顯異常。由上述試驗結果可以初步判斷，通脈降脂合劑安全無毒，臨床應用的安全性高。