止汗貼質量標準的建立

程 峰，何春慧

（海安市中醫院，南京中醫藥大學翰林學院附屬海安醫院，江蘇 海安 226600）

止汗貼是本院研制的純中藥制劑( 蘇藥制字Z04000137)。該方由廣郁金、麻黃根、五倍子組成，具有固濕止汗的作用，可用于兒童及成人植物神經功能紊亂及甲亢、內濕熱、敗血癥、結核病、產后等所致的自汗、盜汗的治療[1]。該貼劑在本院內科的應用已有十多年，療效顯著，受到本地區患者的一致好評，甚至有慕名前來購買使用的外地患者。目前止汗貼的現行質量標準（中國藥典2005 年版一部附錄Ⅱ）要求應符合貼劑項下的有關各項規定。為了保證止汗貼的質量和療效，本文采用TLC 法對止汗貼中的郁金進行定性鑒定。查閱相關文獻發現，針對姜黃素含量的測定方法多為HPLC 法[2-9]。故采用HPLC 法測定止汗貼中姜黃素的含量，制訂了切實可行的質量控制標準[10]，現報道如下。

1 主要儀器與試藥

GF254薄層板；止汗貼（海安市中醫院制劑中心自制，批號200311、200514、200616）。

2 薄層鑒別

2.1 郁金的薄層鑒別

取本品10 g，加無水乙醇20 mL，超聲處理60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取郁金對照藥材1 g，加無水乙醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。取不含所試藥材的陰性對照樣品，制備陰性對照溶液（方法同供試品溶液）。行照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各4 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以正己烷：乙酸乙酯：無水乙醇（16：3：1）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外線燈（365 nm）下檢視發現，供試品色譜中與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照品不顯斑點。見圖1。

圖1 郁金TLC 色譜圖

2.2 五倍子的薄層鑒別

取沒食子酸對照品2 mg，加甲醇2 mL 使之溶解即得對照品溶液。取供試品10 g、五倍子藥粉1 g 及不含五倍子的處方藥粉1 g，分別加甲醇15 mL，超聲處理15 分鐘，濾過藥液，即得供試品溶液、陽性對照品溶液及陰性對照品溶液。行照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿- 甲酸乙酯- 甲醇（5 ：5 ：1）為展開劑，展開，取出，晾干。置254 nm 紫外燈下檢視發現，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的灰黑色斑點；陰性對照品不顯斑點。見圖2。

圖2 五倍子TLC 色譜圖

3 姜黃素含量測定

3.1 色譜條件

大 連ODS-C18（4.6 nm×25 cm×15 μm）；檢測波長254 nm；靈敏度：0.1 AUFS ；流動相：乙腈-水-冰醋酸（45 ：55 ：6）；流速1.0 mL/min。理論板數按姜黃素峰計算應不低于1500。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對照品溶液制備 姜黃素在甲醇中的提取效果最好[11]，故精密稱取姜黃素對照品適量，甲醇溶解配成約0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL、0.8 mg/mL，即得姜黃素對照品溶液。

3.2.2 供試品溶液制備 取本品適量，用10 倍量甲醇浸泡2 小時后，超聲提取30 分鐘，離心，取出上清液，藥渣同前處理2 次，合并三次提取液，適當濃縮，用甲醇定容至10 mL, 即得供試液。

3.2.3 陰性對照溶液的制備 按制劑處方比例稱取除郁金外的其他中藥材，按照該制劑制備工藝相同的方法制得陰性樣品。按照3.2.2 的制備方法制備陰性樣品溶液。

3.3 測定

3.3.1 線性范圍的考察 精密吸取對照品溶液各20 μL進樣，按以上色譜條件測定，記錄色譜圖，測定其峰面積，見表1。以對照溶液濃度為橫坐標（X），姜黃素峰面積分別為縱坐標，進行線性回歸分析，繪制標準曲線，得回歸方程為y=2 274 643.1x-3076.5，r=0.9997。結果表明，姜黃素在進樣量0.10 ～0.80 mg/mL 范圍內的線性關系良好。

表1 姜黃素工作曲線測定結果

3.3.2 精密度試驗 從止汗貼（批號：200311）樣品中取5 份，按含量測定方法測定姜黃素的含量，姜黃素含量測定的RSD 為0.90%，實驗結果見表2。

表2 姜黃素的含量精密度試驗結果

3.3.3 加樣回收實驗 精密稱取已知含量的止汗貼（批號：200311）6 份，然后精密加入一定量姜黃素對照品，按含量測定方法測定，姜黃素的平均回收率為100.28%，RSD 為0.91%，結果見表3。

表3 加樣回收試驗結果

3.3.4 重復性與穩定性試驗 重復性：取“3.2.1 止汗貼對照品溶液制備”項下對照品，按照“3.1 色譜條件”連續進樣5 次，測定，計算，結果見表4。

表4 止汗貼重復性試驗結果

穩定性：取“3.2.2 止汗貼供試品溶液的制備”項下供試品，按照“3.1 色譜條件”分別于1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 進樣測定，計算，結果見表5。

表5 止汗貼穩定性試驗結果

3.3.5 樣品含量測定 按對照品的方法，對止汗貼批號：200311、200514、200616 進行姜黃素含量測定，并計算結果，數據見表6。

表6 供試品中姜黃素的含量測定結果

根據止汗貼的三個批次姜黃素的平均含量為0.2029%，將其含量下調10% 作為檢測標準，故初定止汗貼中的姜黃素含量不低于0.18%，三個批次止汗貼中姜黃素含量均高于此數值。

4 討論

止汗貼方由廣郁金、麻黃根、五倍子組成。郁金辛、苦寒，《本草綱目拾遺》有“郁金，自汗不止，郁金末臥時涂乳上”之述[12]。通過本院研究，廣郁金中的姜黃素，是止汗的主要成分。麻黃根微苦、微澀，有固表斂汗之功，用于陽虛自汗、陰虛盜汗之癥。止汗貼生產過程中，先將中藥飲片碎成細粉；然后以聚乙烯醇樹脂制成15%的黏稠液體；藥材細粉放入乳缽內，慢慢加入基質和氮酮，調制成適宜黏性的軟材；制作時，將軟材分成3.5 g 每份，加工成圓形貼膏。這樣更有利于藥物有效成分的透皮吸收，使用方便，便于患者攜帶。

近年來，我國大力推廣中醫中藥，中醫藥療法因確切的療效也深入人心。我院的止汗貼深受廣大患者喜愛，得到周邊患者的良好口碑，甚至有外省的患者前來購買。我院作為三級中醫院，有著一大批技術精湛、臨床經驗豐富的名老中醫和名校技術骨干，很多患者得益于他們的幫助，自汗、盜汗問題得到了緩解和治愈。這為我院贏得了一大批忠實的粉絲，使得我市的群眾對中醫療法的熱愛和信任達到了前所未有的高度。我們也要對得起這份熱愛和信任，將中醫藥事業發揚光大。

本次研究中，采用TLC 法對止汗貼中郁金進行定性鑒別，郁金TLC 應用硅膠G 板展開，未見姜黃素斑點。換成聚酰胺薄膜進行展開，斑點清晰。展開劑經多次實驗調整為正己烷：乙酸乙酯：無水乙醇（16：3 ：1），Rf值為0.3，展開斑點清晰、穩定。

流動項的選擇：分別考察了乙腈- 水- 冰醋酸（45：55：6）、乙腈-水-冰醋酸（50：50：6）和乙腈-水-冰醋酸（55：45：6）三個流動相，其中乙腈-水-冰醋酸（45 ：55 ：6）對姜黃素的分離效果明顯。

經多批次試驗，止汗貼在現行的質量標準的基礎上增加郁金、五倍子的薄層鑒別法及姜黃素為有效成分的含量測定，方法簡便快速，為止汗貼的臨床效果提供了技術保障。我院制劑室將一如既往地為患者提供療效穩定的制劑，為其健康保駕護航。