艾滋病初篩實驗室中酶聯免疫吸附試驗檢測HIV抗體影響因素研究

林婉珍

（連江縣疾病預防控制中心檢驗科，福建 福州 350500）

艾滋病是HIV病毒感染引起的人體免疫功能缺陷疾病，HIV病毒會攻擊人體CD4T淋巴細胞，導致患者的機體免疫力下降。由于存在嚴重的免疫功能缺陷，艾滋病患者機體容易受到各種病原微生物的侵襲，引發嚴重感染，并會增加惡性腫瘤疾病的發生風險，危及生命安全[1]。目前艾滋病無法根治，難以通過有效的治療方法，將患者體內的HIV病毒完全清除，主要采取抗逆轉錄病毒療法，通過控制病毒復制的方式，延緩病情的進展，降低疾病的危害性[2]。艾滋病的防治，需要根據HIV病毒的主要傳播途徑，采取針對性的阻斷措施，防止HIV病毒的傳播，保護自身及他人的健康[3]。人體在感染HIV病毒后，由無癥狀病毒攜帶者發展為艾滋病患者，往往會經歷較為漫長的時間，難以根據患者的癥狀表現做出判斷。為了提高艾滋病的防治效果，降低疾病的傳播風險，尤其是存在高危性行為、同性戀人群、藥品依賴人群等這些特殊群體，應該盡早進行艾滋病篩查[4]。在艾滋病的篩查過程中，主要通過HIV抗體的檢測來判斷患者是否感染HIV病毒，將HIV抗體陽性檢出結果作為艾滋病初步診斷的重要依據[5]。在艾滋病初篩的實驗室檢查中，應用酶聯免疫吸附試驗方法，進行HIV抗體的檢測，能夠高效的完成檢測過程，快速篩出疑似結果，為進一步地確診做準備，便于及時、有效的展開治療。但是在HIV抗體檢測期間，酶聯免疫吸附試驗受到多方面因素的干擾和影響，出現誤差的情況[6]。為了保障艾滋病篩查結果的準確性，需要密切關注酶聯免疫吸附試驗的每個步驟、環節，嚴格進行管理，規避任何細微的疏漏、差錯，降低HIV抗體檢測結果的誤差?？紤]到影響檢測結果準確性的相關因素，有針對性的加以防控，獲得更為精準的艾滋病初篩結果。本研究選取2010年8月至2019年12月期間，在我單位參加自愿咨詢檢測（VCT）人群，娛樂場所人群及其他羈押人員共8 385例接受HIV抗體檢測作為研究對象。探討艾滋病初篩的檢測結果的影響因素，報道如下。

1 資料與方法

1.1 N一般資料 研究對象選取2010年8月至2019年12月在我單位參加自愿咨詢檢測（VCT）人群，娛樂場所人群及其他羈押人員共接受HIV抗體檢測的 8 385例作為研究對象。男性4 226例，女性4 159例，年齡23～65歲，平均年齡（45.07±6.81）歲。納入標準：①資料完整。②自愿參與本研究，簽署知情同意書。排除標準：①合并免疫系統疾病。②認知障礙或精神疾病。③合并惡性腫瘤疾病。見表1。

表1 一般資料表

1.2 方法 在這10年期間，采集上述人群8 385例靜脈血，進行酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。期間用過廈門新創，珠海麗珠和北京萬泰生物藥業股份有限公司的ELISA試劑盒；酶標儀和洗板機由帝肯生產，型號分別為sunrise，ydroflex.。試驗嚴格按試劑說明書上操作，將96孔微孔板放置于酶標儀板支架上，經過加樣、孵育、洗板、加入底物溶液（A、B）等流程，加入終止液后，測量吸光度（OD）值，分析檢測結果。

結合HIV抗體確證檢測結果，認真分析檢測操作、試劑選取、標本質量等方面的情況，從中找尋問題，得出相關的結論。

2 結果

2.1 艾滋病初篩陽性結果與確證結果 分析艾滋病初篩陽性結果與確證結果，在8 385例體檢者中篩查，艾滋病初篩結果為陽性47例，確證陽性32例，15例為陰性，準確率為68.09%。

2.2 艾滋病初篩結果準確性分析 在艾滋病初篩陽性的47例標本中，確證陽性32例，分析艾滋病初篩結果準確性的影響因素。檢測結果易受多種因素影響：①試劑：HIV試劑盒由上級單位（福州市疾控中心）中領取，均是經過招標的優質試劑盒。②標準化儀器：由上級單位使用艾滋病專項經費采購的酶標儀、洗板機、溫控水浴箱、生物安全柜等標準配置。移液器準確性每年由第三方檢測單位檢定。③規范操作方法，所有操作流程均按儀器，試劑說明書操作。④標本質量：溶血標本的初篩假陽性率會增高。通常認為，酶聯免疫法檢測陽性的準確率在90%以上，但從這10年8 385例的HIV抗體抗體篩查檢測中回顧性分析發現，實際操作中準確率約68.09%。

3 討論

3.1 艾滋病的發病機制及危害性 艾滋病是一種危害性極高的傳染性疾病，目前尚無有效的根治方法。不健康的性行為、不規范的輸血，均會增加艾滋病的發生風險。艾滋病的發生與進展過程中，HIV病毒侵襲人體，嚴重損害患者的免疫系統，會破壞T淋巴細胞，形成細胞免疫缺陷[7]。在機體免疫功能顯著下降的情況下，患者發生機會性感染、罹患惡性腫瘤疾病的風險顯著增加，對于全身多個系統的器官組織形成損害，進而加重疾病的危害性。病情發展至晚期階段，患者的死亡風險較高。艾滋病的發生，極大的威脅著患者的生存質量。

HIV攜帶者以及艾滋病患者屬于傳染源，與他人存在性行為、血液接觸的情況下，傳播HIV病毒的風險較高[8]。艾滋病的潛伏期較長，患者在感染HIV病毒后，早期無顯著癥狀表現，病情的持續進展，患者的機體免疫功能持續下降，引發多系統癥狀，疾病的危險程度顯著增加。

3.2 艾滋病初篩對于疾病防治的重要性 艾滋病患者的治療中，主要采取抗病毒治療方法，核苷類逆轉錄酶抑制劑、非核苷類逆轉錄酶抑制劑、蛋白質抑制劑均是常用的治療藥物，能夠產生抑制HIV病毒復制的作用，進而延緩病情進展。但由于無法徹底清除病毒，疾病仍存在持續傳播的風險，患者需要終身接受治療[9]。

艾滋病的早期治療，可以有效提高病情的控制效果，降低機會性感染、惡性腫瘤疾病的發生風險，進而減輕疾病的危害性，延長患者的生存時間。艾滋病的初篩為艾滋病的確診提供了非常好的前提條件。在HIV抗體檢測中，采集受檢者的靜脈血，通過酶聯免疫吸附試驗，可以高效、迅速的完成對血液樣本的HIV抗體初篩檢測。再經確證實驗室確認HIV抗體陽性時，說明患者感染HIV病毒，隨著病程的進展而成為艾滋病患者[10]。

3.3 影響酶聯免疫吸附試驗檢測結果的相關因素 酶聯免疫吸附試驗檢測HIV抗體為艾滋病的篩查提供可靠的參考依據，在臨床上足以體現它的應用價值。酶聯免疫吸附試驗的過程較為復雜，任何步驟、環節出現差錯，均會影響最終的檢測結果，導致假陽性結果或假陰性結果的產生，從而影響艾滋病的篩查。

3.3.1 血液樣本的質量 血液樣本的質量直接影響酶聯免疫吸附試驗檢測結果的準確性。在采血不當或血樣未及時進行分離，或在運輸過程當中發生了劇烈的振蕩等都會增加溶血的風險，就會影響血液樣本質量。發生溶血后，實施酶聯免疫吸附試驗進行檢測，難以獲得準確的HIV抗體檢測結果。溶血標本初篩的結果與再次正常血樣送檢的確證結果相比，陽性率明顯增高，體現在“其他羈押人群”這模塊中，由于對此群體人員的采血，需外出至看守所，可能由于采血后運輸不當或是抽藥品依賴人員的血不順利而溶血所導致的檢測結果假陽性偏高。所以在送檢前，嚴格檢查血液質量，存在溶血、污染的血液樣本，無法及時送檢，需要重新進行采血。

3.3.2 不規范操作 相關工作人員未能嚴格執行無菌操作，或加樣時使用帶有滑石粉手套等導致樣本受到污染，HIV抗體檢測結果會產生假陽性，就無法反應樣本的真實與準確性，在這一點上，我們曾用重復試驗進行排除得以證實使用帶有滑石粉的手套對試驗的干擾造成假陽性率增高。在儲存血液樣本時，溫度的控制十分關鍵，對于HIV抗體檢測結果產生著重要的影響[11]。

3.3.3 試劑的選擇與儲存 在酶聯免疫吸附試驗檢測HIV抗體的過程中，試劑的選擇也是影響檢測結果的重要因素。選購靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便省時的優良檢測試劑至關重要。如使用過期的試劑，試劑的運輸、儲存未滿足2～8 ℃恒定條件的情況下，均會導致HIV抗體檢測結果出現誤差。在使用移液器時，未按照要求加入標本和試劑，導致產生氣泡等、試驗中溫度控制不佳，未能恒定保持37 ℃、在配制洗液、洗板等操作中，未嚴格遵循試劑說明書，出現錯誤的操作、若纖維吸附現象的產生，導致洗板不干凈、HIV抗體檢測結果就會表現為假陽性，進而影響準確性。在加入顯色液時，避光措施不到位，出現陽光直射的情況，容易導致假陽性結果的產生[12]。

3.4 風險防控 艾滋病初篩的過程中，需要考慮到血液樣本質量、試劑選擇以及試驗操作等多方面因素對于HIV抗體檢測結果的影響，為了獲得準確的檢測結果，需要盡量避免酶聯免疫吸附試驗中的疏漏和差錯。加強對風險因素的防控：首先，應該充分保障血液樣本的質量。采集血液樣本時，按照規范進行采血操作，避免血液樣本受到污染。完成采血后，盡量立即送檢。無法立即送檢的情況下，需要在4 ℃的條件下保存。在運輸血液樣本時，應保持平穩，避免出現強烈的振蕩而出現溶血。

進行酶聯免疫吸附試驗，在保障血液樣本質量的基礎上，還需要加強對試劑應用的管理。根據試驗的實際需要，選用相關試劑，并需要對試劑的保質期進行檢查。按照規定要求，對試劑進行儲存、運輸[13]。使用試劑時，在室溫條件下靜置，恢復至室溫后，再進行檢測。針對酶聯免疫吸附試驗的每一個步驟、環節，需要嚴格進行監管。相關工作人員需要嫻熟規范的操作各種儀器和設備，嚴格遵循各項操作規程，按照規定的溫度條件進行試驗[14]。加強對試驗儀器、設備的日常維護，使用前檢查其運行狀態，保障其安全、穩定運行，避免故障問題的發生。在溫育操作中，密切進行溫度監測，保持恒溫37 ℃。在避光條件下，加入顯色液。減少酶聯免疫吸附試驗中的操作失誤，保障試驗過程安全、順利的完成，避免各種因素的干擾和影響，可以進一步提高HIV抗體監測結果的準確性，進而為艾滋病確診提供有價值的參考依據，便于及早進行治療，有助于控制病情的穩定，對于提高患者的生存質量有著積極的影響。

綜上所述，應用酶聯免疫吸附試驗方法進行HIV抗體的檢測，為艾滋病的初篩提供可行性方法。我們需要考慮會影響酶聯免疫吸附試驗檢測結果的相關因素，工作中，要求嫻熟地采集、運輸、離心、保存血樣以避免溶血，保證血液樣本質量、杜絕污染血樣對于檢測結果的影響。合理選用試劑，進行規范化操作，正確地使用儀器，避免其中的疏漏和差錯，進而獲得精準的檢測結果，為艾滋病的早期治療提供有價值的參考依據。當然，根據國家檢測HIV策略，為了不漏檢HIV抗體陽性者，酶聯免疫試劑必須有較高的敏感性，使試劑檢測限度有一定的寬幅，這樣HIV抗體初篩就會存在一定假陽性。所以，初篩陽性結果與確證陽性結果不相符并不存在矛盾性。