生物檢材中氯胺酮及其代謝物的分析研究進展

游雙銀，馬賽歌，王小怡，李夢陽

（河南金劍司法鑒定中心，河南洛陽 471000）

近年來，我國社會發展過程中，經常會出現氯胺酮濫用的問題，導致社會治安以及經濟建設受到了一定影響。毒品濫用的行為也越來越趨向于年輕化以及男女平均化。根據相關研究發現，毒品濫用中氯胺酮的比例高達20%，短期內使用氯胺酮會導致語言系統混亂，引發人類幻覺，長期服用會造成記憶力減退和認知能力障礙等問題產生，造成心肺功能損害?，F階段，缺乏對氯胺酮免疫測定的有效方式，因此快速準確的檢測方法，是我國發展建設之中所需要關注的重點內容。在氯胺酮及其代謝物的檢測過程中，存在著多種多樣的檢測技術，本文對氯胺酮檢測方式的優點以及弊端進行了分析，希望能夠為相關工作者提供一些建議和幫助。

1 氯胺酮

氯胺酮又被稱為消旋2環己酮，是苯環己哌啶衍生物，是一種非巴比妥類靜脈全麻藥，在醫療上主要應用于術前肌肉放松以及全身麻醉和麻醉輔助之中。在氯胺酮臨床應用過程中，患者會出現惡心，情緒焦躁以及幻覺等副作用，長期使用會導致患者出現精神依賴。鹽酸氯氨酮是白色結晶粉末，可以溶于水，在乙醇中也能夠出現微微溶解的情況。氯胺酮是N-甲基-D 天門冬氨酸受體拮抗劑，因此常用于癲癇病的治療，氯胺酮有兩種旋光異構體，商業產品是兩者的混合物。根據實驗研究顯示，右旋氯胺酮的麻醉力度是左旋利安銅的四倍，并發癥產生的幾率相較于左旋氯氨銅和消旋氯胺酮來說更低。

2 檢材的采取和預處理

2.1 檢材的采取

在氯胺酮進入人體之后，肝臟會產生代謝為去氯鉀、氯胺酮、脫氫去甲氯胺酮和其他代謝物，進一步羥基化，形成葡萄糖酸結合物，90%會從腎臟排出，5%會從糞便排出，4%會隨尿液排出?；诖?，血液以及尿液生物檢材中，檢測到去甲氯胺酮、脫氫去甲氯胺酮同樣也可以當作患者吸食氯胺酮的有效證據。在血液采集過程中，需要避免污染以及變質問題的產生，尿樣采取需要保證不會被水稀釋或者摻假。

人體的唾液、汗液、指甲、嘔吐物和其他組織器官等，都可以用于氯胺酮以及代謝物的檢測之中。根據實驗過程發現，較為常見的檢材是血液以及尿液，這兩者萃取的效果最好。這種萃取方式以及檢材方式，一般被用于近期吸毒者的檢測之中，能夠有效檢測出是否存在毒品濫用的行為，如果尿樣分析出現超時的問題，就可以利用毛發進行檢測?，F階段，國內外毒物分析工作者對于毛發分析的工作十分重視，并將其應用到法庭檢測的判斷之中。和傳統的生物檢材相比，毛發的收集較為便利，并且不會侵犯受檢人員的隱私，能夠有效避免作假、監測時間過長的問題產生，有利于檢材穩定性，保存起來也較為容易。

2.2 檢材的預處理

利用離心的方式取血樣的上清液，可以用于濫用物質的提取以及檢測之中。對于尿樣的預處理需要經過酸堿酶解，利用游離出濫用物質的原型物或者代謝物等，使用液相色譜質譜聯用技術對尿液中的氯胺酮和其代謝物進行判斷，先將樣品通過口徑0.22μm 的聚偏氟乙烯濾膜過濾，然后使用大氣壓化學電離質譜以及電噴霧質譜的方式進行評判，根據結果分析顯示，APCI 的離子化效率高于氯胺酮、去甲氯胺酮。檢測限度為0.50、0.95、0.48以及0.33ng/mL。使用高效液相色譜法對血漿中的氯胺酮和丁派卡因含量進行檢測，將0.5的血漿使用反向萃取技術進行有效提取，這種萃取方式較為簡便以及快速。使用色氣相色譜質譜聯用技術對全血中氯胺酮的含量進行檢測，限度為0.05μg/mL，在0.1～5.0μg/mL 呈現出良好的線性關系。這種方法已經被廣泛用于毒品以及臨床分析過程之中。

在對毛發、指甲以及肝臟等檢材進行收集之后，需要進行洗滌以及消化等預處理工作，進行提取，針對無法及時檢測的樣本，需要保存在溫度為-10℃以下的冰箱之中，唾液樣品需要放入低溫冰箱中過夜，讓其蛋白失去黏性，利用離心的方式求取上清液進行檢測。

在消化前，需要使用洗滌劑以及超聲波對頭發進行處理，這樣能夠有效去除頭發表面的油脂、汗液和吸附其中的濫用物質。常用的洗滌劑有0.05%二氯甲烷或者0.1%十二烷基磺酸鈉溶液、甲醇等，針對毛發洗滌、水解和提取時需進行比較，0.1%的十二烷基磺酸鈉、0.1%洗潔精、蒸餾水、丙酮洗滌能夠有效對焊液產生的污染進行去除，洗滌之后的毛發需要加入0.1mol/L 的HCI，在15度水域中過夜水解后進行提取，使用GC-MS 檢測腦中的氯胺酮含量，將用乙烷和乙醚進行萃取，能夠得到100%的回收率，檢出量為10ng。

3 樣本的提取

3.1 液-液萃?。↙LE）和液相微萃?。↙PME）

在毒品實驗室中，較為常用的提取分離方法為液-液萃取法，此種方法具有操作簡單、重復性較好的優勢，因此一般被用于毒品的提取之中，樣品中加入內標并且進行簡化，尿樣中加入少量的NACl 固體讓其進行飽和，能夠有效減少溶質在水中的溶解速度，進一步提升提取的效率。乙酸乙酯一般被用為提取劑，使用的液-液萃取方法能夠將有機層揮發制干，殘渣在鹽酸中融入用正己烷萃取，這樣能夠有效避免基質的影響，并且獲得較高的回收率，一般來說回收率能夠高達95%。但是任何事情都存在一定的兩面性，如果使用乙醚、氯仿等非極性有機溶劑萃取生物樣品，以及其他復雜樣品中微量毒品時，會導致一些內源性組分，比如蛋白質、脂肪、組胺類將共萃入有機相，對樣品中微量毒品檢驗的效果產生一定的影響。此外此種方式較為容易乳化，導致提取時間過長，影響目標提取物的提取效果。除此之外，LLE 所用有機溶性毒性較大，對檢驗人員的身體健康會造成一定的威脅，因此現階段逐步減少了對比方法的應用。

LPME 是將一定長度的中空纖維膜的一端插在微量進樣器針頭上，將膜的另一端進行封閉，在萃取前將中空纖維膜接入到作為接受項取劑的有機溶液之中，讓有機溶液能夠被固定在中空纖維膜的微孔之中。在LPME 中代取物能夠利用中空纖維微孔不溶于水的有機接受項，而進入到注射器之中。實現了液-液-液三相微萃取以及高效液相色譜聯用技術測定尿樣中的安非他明以及氯胺酮的方法，對萃取時間，料液、pH 和攪拌速度的影響進行了充分分析，并最終得到了萃取溶液是300μL 甲苯尿液，pH 是1.0μL的0.1mol/LHCl，攪拌速度在600r/min，萃取時間在10min 左右的條件。在該條件之中，氯胺酮的線性范圍在0.01～5μg/mL。對比標準差來看偏差。不高于2%監測均線是5ng/mL，實驗室使用一次液-液-液三項微萃取對尿液進行處理，能夠有效消除其中的干擾成分，對安非他明以及氯胺酮進行分析，并且有機溶液消耗較少、萃取效率較高、提升了該方式的靈敏性。

3.2 固相萃?。⊿PE）

SPE 是指利用溶劑和固定相之間對被萃取化合物的選擇性和分析系數性的差距，促進目標化合物從檢材混合中分離出來的提取技術，并且廣泛用于毒品提取以及凈化之中，與LLE 不同的是SPE 的選擇性較強，并且使用的溶劑量較少，不會出現乳化的問題，能夠進行批量化的處理，一般會用于大量樣品的分析以及測定之中。用SPE-LC-MS 結合數據分析的處理系統，對尿液大批量毒品進行半定量分析鑒定，樣品使用SPE C18自動固相萃取，然后進行測定，10min之后數據庫能夠自動儲存結果并且給出報告。該實驗對分析結果精準性提升有重要的促進意義，并且減少了數據處理需要耗費的時間和數據之間產生的錯誤問題，適合工作量較大的實驗室毒品檢測以及常規檢測，GS 法快速對尿樣中存在的氯胺酮和其代謝物進行檢測，萃取率高達95%，并且具有靈敏度、準確性較高的特征，使用SPE 柱對尿樣進行檢測，然后用陽離子化學電離氣質色譜法對尿液中的氯胺酮以及去甲氯胺酮含量進行衡量，濃度在86、430、18、16/ml時，二者的回收率在53～79以及45～14之間，檢出限在25ng/ml。一般來說，國外，監測技術大多是固相萃取以及自動固相萃取技術，具有疏水官能團和交換官能團的混合性，SPE 柱固相萃取肝中的嗎啡回收率可以高達90%，對尿液中的氯胺酮以及去甲氯胺酮進行萃取，回收率在70%左右。

3.3 固相微萃?。⊿PME）和頂空固相微萃?。℉SSPME）

在一定溫度中，將萃取纖維頭放置在密閉容器中的樣品上方，一定時間后直接進行取樣，這種方式能夠有效檢測揮發性物質，并且速度較快，雜質較少。毛發中親脂性毒品比如尼古丁、甲基苯丙胺衍生物以及氯胺酮等檢測方法，能夠對在毛發中的可卡因、氯胺酮以及毒品，能夠有效進行檢測。固相微萃取色相色譜法結合氮磷檢測器，可快速對尿樣中的氯胺酮進行檢測。使用聚二甲基硅氧烷SPME 萃取頭頂空萃取10min，尿液之中加入1.0μg 氯胺酮，平均回收率在102.6%，檢測限在1.13mg/mL，具有操作簡單并且速度較快的特征。

3.4 微波輔助萃?。∕AE）

微波輔助萃取是一種新型的高效分離技術，利用微波熱效應的原理實現對樣品的有機溶解進行加熱，能夠讓目標組分從樣品中進行分離。和傳統的提取技術相比，該項技術萃取的速度較快，并且消耗的成本較低，不會出現污染問題，樣品萃取凈化技術發展速度以及現代化技術設備不斷更新升級的過程之中，利用MAE 方式進行檢測，可對尿樣中的毒品進行有效提取。

4 檢測方法

4.1 薄層色譜分析法（TLC）

薄層色譜分析法是法庭之中檢測毒物的有效定性分析方法，能夠將可疑的毒品或者提取凈化的檢材，在TLC 板上進行點樣，并且將標準品作為對照展開顯色之后，將測定被檢物的Rf 值和標準樣品進行比對，能夠實現定性分析的需要。該技術一般應用在血清、血液、尿液、可疑藥物粉末以及藥片中未知藥物的檢測。TLC 對氯胺酮和其代謝含量進行檢測，能夠得到254ng/mL 的精準檢測結果。但是薄層色譜操作起來較為困難，需要消耗的時間也較長。因此一般被用于法庭毒物檢測之中。

4.2 氣相色譜法（GC）和氣相色譜-質譜聯用技術（GC-MS）

GC 分離效果較好，靈敏度較高，分析速度也很快，可以和電子捕獲檢測器火焰離子化驗檢測器和MS 等多種檢測器綜合運用，但是一般來說，GC 的監測方法應用于具有較強的熱穩定性能以及揮發速度較快的特征，物質監測過程中，大多數物品的監測可以使用氣相-色譜法進行監測。GC-MS 是一種較為成熟的定型技術，一般使用免疫法對陽性結果樣品進行分析。一般應用于個別急性大的毒品利用衍生化處理，也可以使用氣相色譜進行分析。氯胺酮GC 或者MS 進行檢測時，色譜行為檢測的程度較差，柱后衍生對其色氣相色譜行為提升有重要的幫助性作用。

4.3 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜一般用于熱穩定性較差，揮發能力較差并且分子量較大的毒品分離檢測過程中，但是卻由于缺乏高靈敏度的通用型檢測器，因此在實驗過程中會消耗數量較多的有機溶液，針對分子質量在2 000以上的物質之中，檢測效率降低，分離速度也較慢。

5 結束語

現階段我國法治建設在不斷完善發展的過程之中，在此背景下，想要改善現階段存在的販毒問題，提升我國環境建設以及社會建設質量，就需要加強毒品工作的重視。這一時期，我國發展的進程之中對微量毒品的監測生物檢材提取分離檢驗的要求較高，在凈化提取過程之中，液-液萃取存在一系列的弊端，因此使用效率不斷下降。在提取凈化過程之中，較為常見的應用方式是固相萃取，頂空固相微萃取的使用較為簡單并且便捷，所需樣品數量較少，不用進行衍生化，因此毒品分析過程之中也該項技術成為了應用較廣的技術。微波輔助萃取技術，是近兩年較為常見的檢測技術，具有檢測速度快、提取效率高的特征，在檢測方法上，氣相色譜以及液相色譜的檢測結果精準度最高，一般與質譜進行聯用。應加強對于靈敏度較高、特異性較好的產品的深入分析研究，并且使其進行快速檢測，并且促進其向自動化分析的方向所轉變，為我國毒品檢測發揮一定的幫助。