激光散射測定甲苯磺酸拉帕替尼粒度方法的建立和驗證

劉亞方，張治云，郭新艷，王 靜，王 帆，楊 琪

（山東省藥學科學院 山東省皮膚與黏膜給藥工程技術研究中心，山東 濟南 250101）

甲苯磺酸拉帕替尼是由葛蘭素史克公司開發的一種小分子的可逆性酪氨酸激酶抑制劑（TKI），于2007年在美國率先上市，用于聯合用藥：合用卡培他濱治療過度表達2型人表皮受體（HER2）的晚期或轉移性乳腺癌，合用來曲唑治療過度表達HER2、激素受體陽性的轉移性乳腺癌絕經期患者[1-3]。藥物顆粒的大小及其粒度分布情況對藥物的安全性、有效性和穩定性具有重要影響[3]。甲苯磺酸拉帕替尼在水中幾乎不溶，其粒度直接影響到制劑的溶出速度，從而影響藥物制劑的質量和療效，因此粒度為其質量控制的重要指標之一。有效的粒度檢測方法對于粒度控制分析尤為關鍵，故對其粒度進行方法篩選及驗證。

目前，在國內尚未見有甲苯磺酸拉帕替尼原料藥粒度測定方法的文獻報道。根據中國藥典2020年版四部通則0982粒度和粒度分布測定法[4]的規定，本文采用第三法光散射法，運用激光散射原理[5-6]，采用濕法測定甲苯磺酸拉帕替尼原料藥的粒度，該方法重復性好，易于操作，數值真實性強。原料藥粒度測定方法的建立，有助于在處方篩選前篩選出合理的原料藥粒徑，可在一定程度上簡化處方篩選過程，進一步完善了原料藥粒徑的研究，為生產出批間差異小、質量穩定的產品增加了保障。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Malvern Mastersizer 2000型激光粒度分析儀，Hydro 2000MU型濕法進樣器（英國Malvern公司）。

1.2 試藥

甲苯磺酸拉帕替尼（自制，測定前過60目篩，批號：20190901，20191008，20191103；含量：99.87 %，99.83 %，99.80 %）；十二烷基硫酸鈉（SDS，分析純，天津市大茂化學試劑廠，批號：20181201）；曲拉通X-100（化學純，國藥集團，批號：20180119）；六偏磷酸鈉（化學純，國藥集團，批號：20180506）；水（純化水）。

2 方法與結果

2.1 參數的選擇及優化

甲苯磺酸拉帕替尼在水中幾乎不溶，故首選濕法測定。以水為分散介質時樣品不能很好地分散，故選擇增加合適的分散劑將供試品制成穩定的混懸液后，加入含900 ml水的測量杯中進行測定。儀器參數初步設定為：樣品折射率1.5；樣品吸收率1；分散介質折射率1.33；遮光比8 %～20 %；超聲50 s；循環速度2000 r/min；測量次數5。在此基礎上，對各參數進行優化及確定。

2.1.1 分散劑的選擇 粒徑分布測定過程中分別嘗試將六偏磷酸鈉、SDS、曲拉通配制成一定濃度的溶液作為分散劑，經試驗發現2 %六偏磷酸鈉溶液作為分散劑時，甲苯磺酸拉帕替尼漂浮在上層，無法均勻分散；采用2 %曲拉通和2 % SDS作為分散劑時，兩者均可將甲苯磺酸拉帕替尼分散，采用2 %曲拉通作為分散劑，樣品在測定過程中發生團聚現象，遮光度顯著下降，而采用2%SDS時，樣品分散均勻，體系較穩定，故最終選擇2%SDS作為分散劑。

2.1.2 分散劑的制備及用量考察 取SDS 2 g，加水100 ml，超聲溶解，搖勻， 0.45 μm濾膜過濾。稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共3份，分別加入2 % SDS 1，2，4 ml，充分攪拌后，加入含900 ml水的濕法進樣器中，按2.1項下參數分別測定，不同用量分散劑的粒度分布測定結果見表1。

表1 不同用量分散劑的考察結果（n=5）

結果表明，當分散劑用量為1 ml時仍有部分顆粒團聚，導致測定結果偏大；當分散劑用量為2 ml時，分散效果較好，5 次測試RSD值最??；當分散劑用量為4 ml時，分散效果較好，但可能由于產生的氣泡較多，遮光度不穩定，5 次測試RSD變大，導致測量誤差增大。綜合比較，選擇分散劑用量為2 ml。

2.1.3 光學參數的考察 根據激光散射粒度分析儀的測定原理，在測定方法建立時，需設置3個光學參數，分別為分散介質折射率、樣品吸收率和樣品折射率[7]。分散介質采用2 % SDS水溶液，折射率為1.33；甲苯磺酸拉帕替尼為亮黃色結晶性粉末，吸收率設定為1，折射率為1.5。稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共6份，各加入2 % SDS 2 ml，充分攪拌后作為供試品溶液，加入含900 ml水的濕法進樣器中，吸收率分別設定為0.01，0.1，1，或將折射率分別設定為1.45，1.5，1.55，其他參數不變，粒度測定結果見表2。

表2 光學參數考察結果（n=5）

結果表明，綜合d(0.1)、d(0.5)、d(0.9)值的RSD及平均殘差，當折射率為1.5，吸收率為1 時，d(0.1)、d(0.5)、d(0.9)值的RSD及平均殘差最小，故折射率選定為1.5，吸收率選定為1。

2.1.4 超聲參數的考察 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共3份，各加入2% SDS 2 ml，充分攪拌后加入含900 ml水的濕法進樣器中，以超聲頻率2000 Hz分別超聲45，50，55 s后進行測定，其他參數不變，每份樣品連續測定5次，測定數據見表3。

表3 超聲參數的考察結果（n=5）

結果顯示，超聲時間在45～55 s內樣品粒度測定的結果及RSD無明顯差異，本文選擇超聲時間50 s。

2.1.5 攪拌器循環速度的考察 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共3份，各加入2% SDS 2 ml，充分攪拌后加入含900 ml水的濕法進樣器中，分別以循環速度1800，2000，2200 r/min平衡3 min，其他參數不變，分別進行測定，每份樣品連續測定5次，測定數據見表4。

表4 不同循環速度的考察結果（n=5）

結果顯示，不同循環速度測定的結果及RSD基本一致，為保證攪拌速度以使物質不產生沉降，同時又避免攪動過大產生氣泡干擾測定結果，選擇2000 r/min的循環速度。

2.2 測定方法的確定

稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，加分散劑（2% SDS） 2 ml，充分攪拌后作為供試品溶液，加入含900 ml水的濕法進樣器中，設定樣品折射率為1.5，樣品吸收率為1，分散介質折射率為1.33，以循環速度2000 r/min平衡3 min，以超聲頻率2000 Hz超聲50 s后進行測定，要求遮光比8 %～20 %，連續測定5次。粒度分布見圖1。

圖1 甲苯磺酸拉帕替尼原料藥的粒度分布

2.3 方法學驗證

2.3.1 重復性試驗 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，加分散劑（2% SDS）2 ml，充分攪拌后作為供試品溶液，平行操作6份，每份依法連續測定5次，記錄粒度分布曲線和測定結果，計算其平均值及RSD，結果見表5。

表5 重復性試驗結果

結果表明，6份樣品粒度測定d(0.1)，d(0.5)和d(0.9)值的RSD均符合要求，說明該方法的重復性良好。

2.3.2 中間精密度試驗 不同日期，不同分析人員參考2.3.1重復性試驗項下方法對同批次樣品進行測定，記錄粒度分布曲線和測定結果，計算12份樣品平均值及RSD，結果見表6。

表6 中間精密度試驗結果

結果表明，12份樣品d(0.1)，d(0.5)和d(0.9)測定結果的RSD均符合要求，說明該方法的中間精密度良好。

2.3.3 溶液穩定性試驗 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，加分散劑（2% SDS）2 ml，充分攪拌后作為供試品溶液，將供試品溶液于室溫下放置，分別于0，15，30，45，60，120 min依法測定，記錄粒度分布曲線和測定結果，計算其平均值及RSD。d(0.1)平均值為2.287 μm，RSD為2.89 %；d(0.5)平均值為13.568 μm，RSD為1.18 %；d(0.9)平均值為50.447 μm，RSD為1.36 %。結果表明，供試品溶液配制后，在室溫下放置120 min內穩定性良好。

2.3.4 耐用性試驗 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.24，0.3，0.36 g，分別加分散劑（2% SDS）2 ml，充分攪拌后作為供試品溶液，依法測定，記錄粒度分布曲線和測定結果，計算其平均值及RSD，結果見表7。

表7 耐用性試驗的考察結果（n=5）

結果表明，當樣品稱樣量在0.24～0.36 g范圍內，改變樣品加入量，粒度分布結果基本一致，表明本方法具有良好的耐用性。

2.4 甲苯磺酸拉帕替尼粒度測定

取3批甲苯磺酸拉帕替尼原料藥，依法測定，記錄粒度分布曲線和測定結果，結果見表8。

表8 粒徑測定結果

3 討論

本研究經一系列試驗，建立了濕法激光散射測定甲苯磺酸拉帕替尼原料藥粒徑的方法。

3.1 分散劑的篩選

方法的建立過程中，分散劑的種類和用量是關鍵。研究中篩選了六偏磷酸鈉、SDS、曲拉通3種分散劑，發現SDS的分散效果最佳。用分散劑輔助樣品分散的過程中，選擇合適濃度的SDS能均勻分散樣品顆粒，但應避免測定過程中產生氣泡影響測定結果。

3.2 超聲時間確定

水中易團聚漂浮的粒子，需通過超聲輔助顆粒分散[8]。本品在粒度測定過程中發現，合適的超聲時間可使聚集狀態的粒子達到最佳分散狀態，超聲時間過長，粒子會重新發生團聚，所以最終確定超聲時間為50 s。

經過對分散劑（SDS）的濃度、攪拌器的循環速度、超聲時間、樣品折射率及吸收率等參數的研究及方法學驗證，最終建立此測定方法。該方法重復性好、精密度高、易于操作，可準確測定甲苯磺酸拉帕替尼原料藥的粒度。