非小細胞肺癌組織中KISS-1 和CBX8 的表達及相關性研究

馬西淼，盧 偉，符芳永

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，肺癌的發生和基因突變具有很大的相關性，癌基因的過度表達或抑癌基因的失活， 可以作為腫瘤治療的突破口，從而實現個體化治療，延長生存期。腫瘤轉移抑制基因親吻素1（KISS-1）是一種腫瘤轉移抑制基因，有研究發現，其低表達與某些腫瘤的進展及不良預后相關［1-2］。色素框同源蛋白8（CBX8）在乳腺癌、胃癌、肝癌中高表達［3-4］?；诖?，本研究探究KISS-1、CBX8 在NSCLC 組織中的表達及二者間的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象 選取?？谑腥嗣襻t院（中南大學湘雅醫學院附屬?？卺t院） 胸部外科2018 ～2020 年間行肺部手術切除的存檔病理標本蠟塊108 例， 其中NSCLC 組織84 例，良性肺組織24 例，所有蠟塊標本均來自不同病例，經甲醛固定，常規石蠟包埋處理。NSCLC 病例中，男性58 例，女性26 例；年齡41～76 歲，平均（62.8 ± 10.6）歲；吸煙指數≥400 的36例，﹤400 的48 例；鱗癌52 例，腺癌32 例；病理分化程度高、中分化病例66 例，低分化18 例；所有病例均行淋巴結清掃術，其中有淋巴結轉移50 例，無淋巴結轉移34 例； 按照國際抗癌聯盟（UICC）2020年非小細胞肺癌TNM 分期標準，Ⅰ~ Ⅱ期病例38例，Ⅲ期病例46 例。所有病例術前均未行放療、化療、靶向、免疫治療等治療。

1.2 方法 KISS-1 抗體購自陜西愛維拉公司，CBX8 購自美國SAB 公司， 其他試劑均由?？谑腥嗣襻t院病理科提供。免疫組織化學S-P 法檢測標本中KISS-1 和CBX8 的表達情況，并通過重復試驗驗證。購買抗體公司提供的陽性片為陽性對照，PBS 代替一抗為陰性對照。

1.3 結果判定 由病理科兩名具有中級以上職稱醫師根據雙盲原則及半定量分析法判定。KISS-1 蛋白染色結果評判：在細胞質內出現棕黃色顆粒即為陽性，并根據染色強度（0 分為無染色；1 分為淡黃色；2 分為棕黃色；3 分為棕褐色） 和陽性細胞百分率 （0 分為＜5%；1 分為5% ～25%；2 分為26% ～50%；3 分為51% ～74%；4 分為≥75%） 計算分數，兩者的乘積為免疫組織化學染色的總得分， 得分0～3 分的判定為陰性，4 ～12 分判定為陽性［2］。CBX8評判標準：在細胞核內出現均勻一致的棕黃色顆粒即為陽性。鏡下隨機選取4 個×200 倍視野，每個視野計數100 個腫瘤細胞，計算400 個腫瘤細胞中的陽性細胞數。根據染色強度和陽性細胞百分率計算分數。兩者積分相乘即CBX8 的表達水平：0 ～4 為陰性（低表達），5 ～12 為陽性（高表達）［3］。

1.4 統計學處理 采用SPSS21.0 統計學軟件進行數據處理，計數資料采用（%）表示，率的比較用四格表資料的χ2檢驗； 相關性檢驗采用Spearman 等級分析，以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 KISS-1、CBX8 在NSCLC 組織及良性肺組織中的表達情況 84 例NSCLC 組織中KISS-1 的陽性表 達 率 為44.05%（37/84），24 例 良 性 肺 組 織 中KISS-1 的陽性表達率為100%（24/24），兩者差異有統計學意義（χ2=23.78，P ＜0.01）。84 例NSCLC 組織中CBX8 的陽性表達率為61.90%（52/84），24 例良性肺組織中CBX8 的陽性表達率為16.67%（4/24），兩者差異有統計學意義（χ2=7.65，P ＜0.05）。

2.2 KISS-1、CBX8 的表達與腫瘤的生物學特征之間的關系 KISS-1 的表達與患者的性別、 抽煙指數、腫瘤類型以及癌組織分化程度之間無相關性（P＞0.05），與淋巴結轉移（χ2=5.06，P ＜0.05）、腫瘤臨床分期（χ2=7.65，P ＜0.05）有明顯相關性。CBX8 的表達與患者性別、抽煙指數、腫瘤類型以及癌組織分化程度之間無相關性（P ＞0.05），與淋巴結轉移（χ2=8.58，P ＜0.05）、 腫瘤臨床分期 （χ2=5.20，P ＜0.05）有明顯相關性，見表1。

表1 KISS-1、CBX8 的表達與腫瘤生物學特征之間的關系

2.3 KISS-1 和CBX8 表達的相關性 NSCLC 中KISS-1 和CBX8 的表達均為陽性有15 例， 均為陰性有10 例。兩者的表達呈負相關性（r=-0.341，P ＜0.05，表2）。

表2 NSCLC 中C-myc 和Artemin 表達的相關性（例）

3 討論

KISS-1 是在人黑色素細胞株中發現的一種抑瘤基因，其是一種單纖絲蛋白，能抑制腫瘤細胞的趨化性及侵襲性，從而限制腫瘤細胞的遷移，腫瘤的轉移和預后與KISS-1 的表達下調密切相關［5-7］。研究發現，該基因抑制腫瘤的可能機制是：通過Gq蛋白耦聯途徑，通過MAPK 途徑抑制細胞的移形能力，下調MMP-9 活性抑制細胞的移形能力，與SH-3 介導的信號轉導有關［8］。

色素框同源蛋白8（CBX8）是PcG 蛋白家族的重要組成部分，與細胞的分化、修復繼續衰老的關系非常密切［9-10］。CBX8 是一種轉錄抑制因子，通過基因位點INK4A/ARF 途徑抑制細胞的增殖， 在許多腫瘤組織中呈高表達［11-12］。

本研究發現KISS-1 在NSCLC 組織中的表達明顯低于良性肺組織， 無淋巴結轉移、 分期早的NSCLC 組織中KISS-1 的表達明顯高于有淋巴結轉移、分期晚的NSCLC 組織。表明KISS-1 蛋白的低表達發生在癌變早期階段， 其低水平表達促進NSCLC 的發生、發展、轉移，發揮類似癌基因樣作用， 提示可將KISS-1 蛋白的表達情況作為NSCLC的臨床分期指標，并用于判斷預后。CBX8 在NSCLC組織中的表達明顯高于良性肺組織， 分化程度好、無淋巴結轉移、分期早的NSCLC 組織中CBX8 的表達明顯高于分化程度差、有淋巴結轉移、分期晚的NSCLC 組織， 提示CBX8 有應用于NSCLC 的臨床診斷、病情進展和療效監測的潛在價值。統計學表明，二者的表達呈負相關性，但二者間表達呈負相關性的機制仍不明， 國內外也缺乏相關的報道，推測可能與癌基因的通道機制有關，這可以作為下一步本實驗深入研究的方向。

許多研究發現KISS-1 和CBX8 在人類多種惡性腫瘤發生發展過程中發揮了重要作用，但其詳細的作用機制及其調控尚未完全明了。深入研究KISS-1 和CBX8 對惡性腫瘤的生物學作用，明確其在腫瘤中的作用及分子機制，可能對腫瘤的治療與預后判斷有著潛在價值。目前，KISS-1、CBX8 與腫瘤的研究仍處于初級階段，其在腫瘤中的作用及機制仍需進一步探索。