紫外-可見分光光度法與酸堿滴定法聯合測定桂利嗪純度的效果評定

敦 康，郭永輝，付 莉，隋思強，柴倩雯，王若琳

（1.河北省藥品審評中心，河北 石家莊 050091；2.河北省藥品醫療器械檢驗研究院，河北 石家莊 050071；3.河北省藥品職業化檢查員總隊，河北 石家莊 050091；4.河北科技大學材料科學與工程學院，河北 石家莊 050018）

桂利嗪（Cinnarizine）是一種哌嗪類化合物（其分子結構如圖1 所示）。此藥屬于鈣通道阻滯劑。其作用機理為阻止血管平滑肌中的細胞膜鈣離子（Ca2+）向膜內流動，促使血管擴張，從而改善腦部供血狀況。近幾十年，此藥在臨床上多用于治療缺血性腦血管病，包括腦血栓形成、腦動脈硬化等；還可以用于預防和治療如暈車、眩暈等運動病，緩解由梅尼埃病或前庭系統疾病造成的眩暈、耳鳴等癥狀。此藥是抗眩暈治療的一線藥物[1-2]。此外，臨床上還使用桂利嗪聯合其他藥物進行皮膚瘙癢、蕁麻疹等過敏性皮膚病的治療[3-4]。最新研究表明，桂利嗪在抗曼氏血吸蟲[5]、治療COVID-19 相關凍瘡樣病變[6]等領域具有顯著的應用效果。桂利嗪原料藥為《中國藥典》2020版收載品種，藥典對其性狀、檢查、鑒別含量測定等方面均有規范說明。本文參考《中國藥典》及其他相關文獻[7-17]，采用紫外- 可見分光光度法與酸堿滴定法分別測定桂利嗪的純度，比較分析測定結果。依據標準物質技術規范及國家相關計量法規的要求，分析上述測定過程的不確定度。在本文中，筆者主要是分析紫外- 可見分光光度法與酸堿滴定法聯合測定桂利嗪純度的效果。

圖1 桂利嗪結構式

1 儀器與試藥

卡爾費休氏滴定儀V30，由瑞士Mettler Toledo公司生產；UV-2550 型紫外- 可見分光光度儀，由日本Shimadzu 儀器公司生產；箱式電阻爐SX2.5-10，由上海百典儀器設備有限公司生產；精密電子天平XPR226DR，由梅特勒托利多科技（中國）有限公司生產；Agilent 7896 氣相色譜儀，由美國安捷倫科技公司生產?？栙M休試液，由上海市國藥化學試劑有限公司生產，批號：532069 ；水為實驗室自制去離子水；分析純乙酸酐、冰乙酸、結晶紫，由天津化學試劑公司生產；桂利嗪樣品，批號：180119061。

2 方法與結果

2.1 紫外-可見分光光度法

2.1.1 供試品溶液的配置 取桂利嗪原料，精密稱取適量，用鹽酸溶液（9 →1000）配置成含桂利嗪7.5 μg?mL-1的溶液，即為供試品溶液。

2.1.2 試驗條件 選取253 nm 波長為特征吸收峰，測定該波長處的吸光度，以吸收系數（）為575來計算，測定供試品的純度。

2.1.3 方法學研究

2.1.3.1 線性關系考察 精密稱取50.00 mg 桂利嗪置于50 mL 量瓶中，用鹽酸溶液（9 →1000）溶解并定容至刻度，搖晃均勻，配置成1000 μg·mL-1濃度的溶液作為貯備液。分別精密移取0.01 mL、0.02 mL、0.04 mL、0.08 mL、0.15 mL 至10 mL 量瓶中，用上述鹽酸溶液稀釋定容至刻度，搖晃均勻。按“2.1.2”項下檢測方法進行測定，記錄吸光度值。以樣品濃度(X，μg·mL-1) 為橫坐標，以吸光度(Y) 為縱坐標，繪制標準曲線，回歸線性方程為Y=6 698.8X+1.556 2，r=0.999 9。結果表明，桂利嗪試樣溶液在1 ～100 μg·mL-1濃度范圍內，溶液吸光度與濃度具有良好的線性關系。

2.1.3.2 儀器精密度 取供試品溶液按照“2.1.2”項下試驗方法，連續重復測試6 次，記錄吸光度的相對標準偏差為0.13%(n=6)，結果表明測試儀器的精密度良好。

2.1.3.3 方法精密度 平行配制6 份桂利嗪供試品溶液，按“2.1.2”項下試驗方法，每份桂利嗪供試品溶液重復測試3 次，6 份桂利嗪供試品溶液的吸光度相對標準偏差為0.41% (n=6)，結果表明測試方法的精密度良好。

2.1.4 紫外- 可見分光光度法純度標準值 數學模型的建立。采用紫外- 可見分光光度法進行純度測定，根據計算公式，確定桂利嗪純度的計算數學模型為:W紫外-可見分光光度法=A/×（1/100）/C。式中:W紫外-可見分光光度法為相對純度，A 為桂利嗪吸光度值，C 為桂利嗪濃度。

純度的測定方法：制備10 份桂利嗪供試品溶液，按“2.1.2”項下試驗方法每份溶液重復測試3 次。桂利嗪溶液濃度（μg?mL-1）分別為0.007 495、0.007 503、0.007 473、0.007 438、0.007 470、0.007 445、0.007 513、0.007 523、0.007 478、0.007 478，桂利嗪溶液吸光度測試結果見表1。

表1 桂利嗪溶液吸光度

格拉布斯（Grubbs）檢驗：格拉布斯檢驗可以用來剔除可疑值。對10 組檢測數據進行格拉布斯檢驗，剔除測試中出現的可疑值。計算平均值x和標準偏差s。計算偏離值：平均值與最小值之差記為a1；最大值與平均值之差記為a2。a1和a2兩個值中最大者為可疑值。平均值為99.61%，s=0.079 74。經計算，G=1.785，查閱格拉布斯臨界值表可知：G0.95(10)=2.176。G ＜G0.95(10)，因此可知在兩組數據中不存在可疑值。

確定標準值：由桂利嗪的純度測量數據確定桂利嗪紫外-可見分光光度法純度值為99.61%，s=0.079 74。

2.1.5 其他雜質測定 受限于紫外-可見分光光度定量分析方法學的特點，樣品中的水分、熾灼殘渣和溶劑殘留在紫外- 可見分光光度法系統中難以檢測，因此在利用紫外- 可見分光光度法測定純度時需要去掉水分、熾灼殘渣和溶劑殘留對數值的影響。

2.1.5.1 水分 采用卡爾費休方法測定桂利嗪中的水分含量。用無水甲醇作為溶劑，溶解精密稱取的供試品，然后將溶液迅速放置于水分測定儀中進行測試，重復測試10 次后取平均數據，得到平均值為0.142%，標準偏差為0.010%(n=10)。

2.1.5.2 熾灼殘渣 桂利嗪中的熾灼殘渣按照《中國藥典》2020 版熾灼殘渣檢查項下要求測定。熾灼殘渣測定重復10 次，取平均值為0.037 9%，標準偏差為0.003 3%(n=10)。

2.1.5.3 溶劑殘留 桂利嗪中的溶劑殘留使用氣相色譜法測定。測定條件為：色譜柱C P 9 210-w ax（30 m×320 μm×1.8 μm）載氣：氮氣；流速：2 mL/min ；分流比：20:1 ；檢測器：FID 檢測器；檢測器溫度：250℃；進樣口溫度：200℃；進樣方式：頂空；頂空平衡時間：30 分鐘；頂空加熱溫度：100℃；定量環溫度：105℃；傳輸線溫度：110℃；程序升溫：起始溫度為35℃，維持5 分鐘，以每分鐘3℃的速率升溫至50℃，維持2 分鐘，再以每分鐘20℃的速率升溫至200℃，維持7 分鐘。結果桂利嗪中的溶劑殘留測定數據結果平均值為0，標準偏差為0 (n=10)。測定結果：桂利嗪中的水分為0.142%，熾灼殘渣為0.0379%，溶劑殘留為0，總計0.180%。桂利嗪標準值為99.61%×(100%-0.180%)=99.43%。

2.1.6 紫外- 可見分光光度法的不確定度評估 根據“2.1.4”項下的數學模型可知，紫外- 可見分光光度法不確定度來自吸光度，包括由容量瓶、溫度、移液管、天平以及儀器本身示值等影響因素的綜合作用，所以桂利嗪溶液吸光度的不確定度計算公式為

2.2 酸堿滴定法

2.2.1 測定方法 取桂利嗪約0.15 g，精密稱定質量，加冰乙酸20 mL 與乙酸酐4 mL 溶解后，加結晶紫指示液1 滴，用高氯酸（HClO4）滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液呈綠色，并將滴定的結果用空白試驗進行校正。每l mL 的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當于18.43 mg 的桂利嗪?？瞻滓旱闹苽洌喝”宜?0 mL，乙酸酐4 mL，加結晶紫指示液1 滴與高氯酸滴定液（0.5 mol?L-1）0.05 mL，搖勻即得。

2.2.2 計算公式 桂利嗪含量計算公式：A=C×(VV0)×18.43/0.1/m×100%。式中：A 為以無水物計算所得桂利嗪的質量分數(%) ；C 為鹽酸滴定液的濃度(mol?L-1) ；V 為供試品消耗的鹽酸滴定液體積(mL) ；V0為空白試驗消耗鹽酸滴定液的體積，即0.05 mL；m為供試品的稱樣量(g)。

2.2.3 純度測定 酸堿滴定法測定桂利嗪純度的結果見表2。

表2 桂利嗪酸堿滴定法測定結果

由表2 可知，酸堿滴定法測定的桂利嗪化學純度值為99.47%，在桂利嗪紫外- 可見分光光度法純度值不確定度范圍之內，表明上述桂利嗪的純度值及不確定度真實準確。經計算，采用紫外- 可見分光光度法與酸堿滴定法相結合的方式來測定桂利嗪純度的標準值及其不確定度為99.56%±0.08% (k=2，P=0.93)。

3 討論

本論文對桂利嗪紫外- 可見分光光度法定值方法進行了系統考察，對紫外- 可見分光光度法測試條件進行了優化。本文采用紫外- 可見分光光度法和酸堿滴定法兩種不同的分析方法綜合測定桂利嗪的純度值，其中采用紫外- 可見分光光度法定值方法分別平行測定10 次，純度標準值及不確定度為99.43%±0.08%(k=2，P=0.95) ；酸堿滴定法測定桂利嗪化學純度值為99.47%。兩種不同方法的結果相互印證，有效地避免了單一方法帶來的分析原理誤差，使純度結果更加準確可靠。

紫外- 可見分光光度法和酸堿滴定法作為測定桂利嗪純度的經典方法，具有操作簡便、可靠、快速的特點，對其進行不確定度評估十分重要。本研究為以桂利嗪作為主要成分的藥劑等提供了有效物質含量測定方法的參考，同時也為桂利嗪純度標準物質的研制和申報工作提供了科學依據。本文中建立的不確定度評估數學模型和定值方法也為其他藥物進行純度測量和不確定度評估提供了科學參考。