兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮含量的測定

李二冬

（1. 山西省檢驗檢測中心（山西省標準計量技術研究院），山西太原 030032；2. 食品藥品安全防控山西省重點實驗室，山西太原 030032）

0 引言

苦蕎醋利用苦蕎為原料，采用科學的方法，運用微生物學發酵的基本原理而制成的一種功能食品[1]?？嗍w醋中含有多種營養成分，如黃酮類化合物、多種微量元素、葡萄糖、氨基酸成分[2-5]等。其中，黃酮類化合物泛指2 個苯環通過中央三碳鏈連接而成的一類化合物，即有C6-C3-C6 基本構型[6]。黃酮類化合物是植物在生長過程中形成的一大類次生代謝產物[7]，主要以碳糖基類或者苷類的形式廣泛存在于植物的根、葉、果實、花和蓮中。人體內不能直接合成黃酮類化合物，而黃酮類化合物對人體有著非常重要的生化作用[8]，所以必須通過食物獲取[9]。對于研究食物中的黃酮類化合物顯得尤為重要。羅磊等人[10]通過H2O2誘導HUVEC 細胞損傷，建立細胞氧化損傷模型，并通過對照試驗得出，綠豆皮黃酮能提高機體抗氧化酶活性，清除自由基，減輕H2O2對內皮細胞的損傷。張立虎等人[11]研究表明黃酮有抗腫瘤、預防腫瘤作用，是一種很有潛力的癌癥化學預防劑，能顯著降低多種惡性腫瘤的發病率。Maras J E 等人[12]和Fu Yu 等人[13]研究發現黃酮類化合物有強心護肝，防治心血管疾病的作用。根據文獻報道，苦蕎醋中也含有黃酮類化合物。

然而，由于制作工藝和醋本身的特征，苦蕎醋容易發生沉淀，而沉淀通常不被利用，作為垃圾而丟棄。為了研究苦蕎醋沉淀中黃酮類化合物的含量，對比了兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮的含量，為苦蕎醋的改性工藝研究提供理論基礎。

1 試驗部分

1.1 試劑

兩款苦蕎醋（雁門清高苦蕎醋、寧化府黑苦蕎醋），購自當地超市；蘆丁標準品（HPLC≥98%），江西佰草源生物科技有限公司提供；無水乙醇、硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、稀鹽酸（分析純），天津市大茂化學試劑廠提供。試驗中所用的水為二次蒸餾水。

1.2 儀器設備

S224S 型電子分析天平，鶴壁市鑫泰高科儀器制造有限公司產品；U-3010 型紫外-可見（UV-Vis）分光光度計，日本日立公司產品；DZG-6050（D） 型真空干燥箱，上海森信實驗儀器有限公司產品；電熱恒溫水浴鍋，浙江臨海市東方儀器廠產品；TDL-5A型離心機，上海菲恰爾分析儀器有限公司產品。

1.3 苦蕎醋沉淀中黃酮的提取

分別將2 款市售苦蕎醋的沉淀取出，在60 ℃真空干燥箱中烘干5 h，并將烘干后的物質碾成粉末。分別稱取2 種粉末1.00 g 于具塞錐形瓶中，加70%乙醇50 mL，恒溫70 ℃水浴2.5 h，冷卻至室溫，以轉速8 000 r/min 離心10 min，取上清液用70%乙醇定容至50 mL，為提取液。

1.4 蘆丁標準曲線的繪制

用蘆丁作為標準品[14-15]，測定兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮的含量。將蘆丁標準品在真空干燥箱中干燥至恒重，并精密稱取25.0 mg，于50 mL 容量瓶中，加70%乙醇定容，即得到0.5 mg/mL 的蘆丁儲備液。分別取蘆丁儲備液0，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0，2.5 mL 于25 mL 容量瓶中，加70%乙醇6 mL，并依次加質量分數為5%的NaNO2溶液1 mL，搖勻靜置6 min；質量分數為10%的Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻靜置6 min；質量分數為40%的NaOH 溶液10 mL；繼續加水至刻度線，搖勻靜置15 min 待用。將未加入蘆丁標準液的容量瓶溶液作空白，于波長353 nm 處測定吸光度，并繪制吸光度與濃度之間的標準曲線。

1.5 兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮含量的測定

分別取兩款市售苦蕎醋沉淀提取液2.0 mL 于25 mL 容量瓶中，按照2.4 的方法配制溶液、測定吸光度，并按照蘆丁標準曲線和公式（1） 得到兩款苦蕎醋沉淀中黃酮質量濃度。

式中：C——根據蘆丁標準曲線測得的黃酮質量濃度，mg/mL；

V1——苦蕎醋沉淀提取液的總體積，50 mL；

V3——取提取液，2 mL；

V2——2 mL 提取液稀釋后的體積，25 mL；

m——苦蕎醋沉淀的質量，1 g。

2 結果與分析

2.1 最大吸收波長的確定

蘆丁標準溶液吸收光譜圖見圖1。

圖1 蘆丁標準溶液吸收光譜圖

由圖1 可知，蘆丁標準溶液為300~600 nm 時的紫外-可見吸收光譜圖，于波長為353 nm 處時吸光度最大，所以試驗過程中選擇該波長作為測定波長。

2.2 蘆丁標準曲線的繪制

蘆丁標準溶液和吸光度的線性關系見圖2。

圖2 蘆丁標準溶液和吸光度的線性關系

在0~0.05 mg/mL 范圍內蘆丁的吸光度隨著質量濃度的增加而增加，其線性回歸方程為Y=0.0391 2+29.176 9C（mg/mL），相關系數R2=0.998 6，吸光度與濃度呈良好的線性相關，可用于樣品的測定。

2.3 試驗條件的優化

從苦蕎醋沉淀中提取黃酮時，溶劑的濃度、提取溫度、提取時間對黃酮提取量（即含量） 有很大的影響，所以需要對試驗條件進行優化。

2.3.1 乙醇體積分數的考查

不同體積分數的乙醇對黃酮質量濃度的影響見圖3。

圖3 不同體積分數的乙醇對黃酮質量濃度的影響

由圖3 可知，當乙醇體積分數從50%到80%變化，70%時黃酮質量濃度達到最大值，隨著乙醇濃度的增加，黃酮質量濃度變化不大。因此，為節約成本，試驗中選擇用70%的乙醇作為溶劑。

2.3.2 提取溫度的考查

提取溫度對黃酮質量濃度的影響見圖4。

圖4 提取溫度對黃酮質量濃度的影響

由圖4 可知，隨著提取溫度的升高，黃酮質量濃度升高，當提取溫度到達70 ℃時，黃酮質量濃度達到最大。所以，選擇提取溫度為70 ℃。

2.3.3 提取時間的考查

提取時間對黃酮質量濃度的影響見圖5。

圖5 提取時間對黃酮質量濃度的影響

由圖5 可知，隨著提取時間的增加，黃酮質量濃度也在隨著增加，在150 h 之后不再增加。因此，選擇150 h 為最佳提取時間。

2.4 兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮質量濃度的測定

在優化試驗條件的基礎上，分別提取兩款市售苦蕎醋沉淀中的黃酮，平行測定吸光度各3 次，取平均值，并按照蘆丁標準曲線和公式（1） 得到黃酮質量濃度分別為0.43 mg/mL 和0.31 mg/mL。

3 結論

用醇熱法，在優化試驗條件的基礎上對兩款市售苦蕎醋沉淀中的黃酮進行了提取，并用紫外-可見分光光度法進行了定量測定。結果顯示，沉淀中均有較高水平的黃酮類物質。為苦蕎醋中活性物質黃酮的的保護及生產工藝中黃酮類化合物的改性研究提供了理論基礎。