液相色譜-質譜法測定茶葉中氧樂果農藥殘留量的不確定度評定

吳 坤，劉李婷，魏寧果，陳姍姍，劉雪峰

（陜西省產品質量監督檢驗研究院，陜西 西安 710054）

氧樂果是一種廣譜內吸性有機磷農藥，有良好的觸殺和胃毒作用，隨著農藥的廣泛使用，其殘留問題日益嚴重[1]，長期食用氧樂果超標的食品，對人體健康可能有一定危害。一直以來，食品安全受到高度重視，對檢測結果的精確度要求越來越高[2]?！妒称钒踩珖覙藴?食品中農藥最大殘留限量》[3]（GB 2763—2021） 中規定，氧樂果在茶葉中的最大殘留量為0.05 mg/kg。提高氧樂果殘留量的檢測技術和檢測過程風險評定具有研究價值。測量不確定度是衡量數據結果準確性和可靠性的重要特征指標，不確定度的數值可直接體現檢測質量的高低，影響檢測結果的可靠性[4]。尤其是在實際工作中，當測量值出現在限定值附近時，為確保數據的可信度，對檢測結果進行不確定度評價是不可或缺的[5]。完整的定量分析結果應該由被測量值和被測量值分散性的值（即不確定度） 組成[6]，這既可增加檢測方法和結果的可信度，又便于不同實驗室分析結果進行對比，因此合理地評定不確定度，確保檢測結果的權威與公正，能夠更好地保障食品安全與質量。 郭軍霞、李貴軍等人[7-8]對茶葉中氧樂果的氣相色譜法，氣相色譜質譜法的不確定度進行了廣泛的研究與討論，而液相色譜法中氧樂果殘留檢測的不確定度評定文獻中鮮有報道。

試驗基于國家食品安全標準《GB 23200.121—2021 植物源食品中331 種農藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質譜聯用法》[9]的檢測方法，依據《測量不確定度評定與表示》[10]和《化學分析測量不確定度評定》[11]，分析評定檢測過程中各不確定度分量的來源，給出擴展不確定度，對提高試驗操作規范性及檢測結果的準確性和可靠性提供了數據支撐，為實驗室質量控制提供了一定依據，為食品安全日常檢測結果提供了重要技術保障。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

WATERS XEVO TQ-S Cronos 型超高效液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀，美國WATERS 公司產品；漩渦混勻器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司產品；H1850 型高速離心機，湖南湘儀實驗儀器開發有限公司產品；電子天平（分度值為0.1 mg），賽多利斯科學儀器有限公司產品。

氧樂果標準溶液（100 μg/mL），天津阿爾塔科技有限公司提供；甲酸（色譜純），天津市科密歐化學試劑有限公司提供；乙腈（色譜純），美國Fisher公司提供； QuEChERS 萃取鹽包（貨號S7400055），上海安譜實驗科技股份有限公司提供；QuEChERS凈化管（貨號MO042881），深圳逗點生物技術有限公司提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液配制

使用移液器量取1 mL 氧樂果標準溶液（100 μg/mL）于10 mL 容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成10 mg/L氧樂果儲備液。精確量取1 mL 氧樂果儲備液于10 mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成1 mg/L 氧樂果中間液。

1.2.2 樣品溶液制備

稱取2 g 試樣（精確至0.01 g） 于50 mL 塑料離心管中，加10 mL 水渦旋混勻，靜置30 min。加入15 mL 乙腈-乙酸溶液及1 顆陶瓷均質子，劇烈振蕩1 min，加入6 g 無水硫酸鎂、1.5 g 乙酸鈉，劇烈振蕩1 min 后以轉速4 200 r/min 離心5 min。吸取2 mL上清液至QuEChERS 凈化管中，渦旋混勻1 min，以轉速4 200 r/min 離心5 min，吸取上清液過0.22 μm微孔濾膜，待測定。

1.2.3 基質標準工作曲線

將空白試樣按1.2.2 制備成基質溶液，精確量取一定量的氧樂果中間液（1 mg/L），使用量程為100～1 000 mL 移液槍和10 mL 容量瓶，逐級用空白基質溶液稀釋成質量濃度為0.100，0.050，0.020，0.010，0.005 mg/L 的基質標準工作溶液。以定量離子的質量色譜圖峰面積為縱坐標，基質標準工作溶液的質量濃度為橫坐標，繪制基質標準工作曲線。

1.2.4 液相色譜條件

色譜柱：WATERS ACQUITY UPLC BEH C18型（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）；柱溫40 ℃；樣品室溫度20 ℃；進樣量2 μL。流速0.3 mL/min，流動相：A 相為0.1%甲酸水溶液，B 相為0.1%甲酸乙腈溶液；線性梯度洗脫。

1.2.5 質譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI+）；離子化電壓3 500 V；離子源溫度150 ℃；去溶劑氣溫度350 ℃；去溶劑氣流量600 L/Hr，碰撞氣流量30 L/Hr。

氧樂果的質譜參數見表1。

表1 氧樂果的質譜參數

1.2.6 數學模型建立

試樣中氧樂果殘留量以質量分數X 計，按以下公式計算：

式中：X——試樣中氧樂果殘留量，mg/kg；

C——樣品溶液中氧樂果質量濃度，mg/L；

V——提取液體積，mL；

m——試樣質量，g。

2 結果與分析

2.1 不確定度來源分析

根據上述試驗方法和數學模型，該方法的測量不確定度來源主要有樣品稱量引入的不確定度，由天平的線性不確定度構成；樣品前處理溶液體積變化引入的不確定度，由試液定容、溫度變化等引入的不確定度組成；校準過程引入的不確定度，由標準品原液稀釋成標準工作溶液時引入；標準工作曲線擬合引入的不確定度，樣品重復測量及回收率引入的不確定度。

2.2 不確定度分量評定

2.2.1 稱樣引入的相對標準不確定度urel（m）

稱量樣品使用天平的最大允差為0.000 5g，按均勻分布估算，。實際稱量樣品質量的平均值為2.062 1g，則

2.2.2 待測樣品溶液定容引入的不確定度urel（V）

樣品定容用的是5 mL 移液器，移液器引入的不確定度主要由容量允差、溫度波動和測量重復性引入。根據JJG 646—2006《移液器檢定規程》[12]，移取5 000 μL 溶液時，移液器容量允差為±0.6%，測量重復性為0.2%，按均勻分布估算，則

試樣加入1%乙酸乙腈15 mL，使用5 000 μL 移液器3 次；故樣品提取過程中由移液器量取引入的不確定度為：

移取樣品溶液時實驗室溫度為24 ℃，移液器校準時溫度為20 ℃，乙腈的體積膨脹系數為1.37×10-3℃，假設體積變化為均勻分布，則

2.2.3 標準物質的不確定度urel（Sb）

由標準溶液廠家提供的證書中得到的氧樂果標準溶液純度為99%，擴展不確定度U 為5%，拓展因子k=2，所以氧樂果標準溶液的不確定度為：

2.2.4 標準溶液配制引入的相對標準不確定度urel（SP）

標準使用溶液配制過程引入的不確定度主要包括定容的容量瓶、移液槍和溫度引入的不確定度，配制溶液過程中用到的容量瓶（10 mL），移液槍（1 000 μL）。 具體計算如下：容量瓶的允許誤差為±0.02 mL，按矩形分布計，則容量瓶引入的校準不確定度為：

配制標準使用溶液過程中環境溫度變化按±4 ℃計，視為矩形分布，則容量瓶由溫度變化所帶來的不確定度為

按照檢定規程，使用1 000 μL 移液器時，移取1 000 μL 溶液時，移液器容量允差為±1.0%，測量重復性為0.5%，按均勻分布估算，則不確定度為：

氧樂果標準溶液配制過程中使用了容量瓶和移液槍各7 次。因此，總不確定度為：

2.2.5 標準工作曲線擬合引入的相對標準不確定度urel（C）

氧樂果標準系列各質量濃度點及對應的峰面積（0.005，862；0.01，1 568；0.02，3 100；0.05，7 452；0.10，14 560），利用最小二乘法擬合標準曲線線性回歸方程Y=144 417X+158.98，其中斜率a=144 417，截距b=158.98，相關系數R2=0.999 9。

按1.2.2 方法平行處理試樣7 份，上機測試，由上述線性方程得試樣中氧樂果含量平均值C=0.006 29 mg/mL，由標準曲線擬合引入的標準不確定度為式：

式中：SR——標準殘差；

p——樣品測量次數，7 次；

n——標準曲線中所有濃度點的測量次數5 次；，

Ci——標準工作液質量濃度；

yi——與ci對應的峰面積。

因此，標準工作曲線擬合引入的相對標準不確定度為：

2.2.6 測量重復性引入的不確定度urel（X）

重復性和回收率測定見表2。

表2 重復性和回收率測定（n=7)

平行制備7 份樣品溶液進行測定，則樣品重復測量引入的不確定度為：

2.2.7 回收率引入的相對標準不確定度urel（R）

回收率結果見表2，采用A 類不確定度評定，由貝塞爾公式計算回收率R 的標準偏差S（R），則由回收率引入的相對標準不確定度為：

2.3 不確定度結果計算

2.3.1 合成相對標準不確定度

按如下公式合成各分量，即得液相色譜法質譜法測定茶葉中氧樂果殘留量過程的相對合成標準不確定度：

2.3.2 合成標準不確定度

茶葉樣品重復測定的氧樂果平均值為0.046 mg/kg，其合成標準不確定度uc（W）為：

uc（W）=W×urel（W）=0.046 mg/kg×0.066 8=0.003 07 mg/kg.

2.3.3 擴展不確定度的計算

根據測量不確定度評定指南對普通實驗室的要求，在95%置信水平下取包含因子k=2，即得液相色譜質譜法測定茶葉中氧樂果殘留量過程的擴展不確定度U 為：

U=k×uc（W）=2×0.003 07 mg/kg=0.006 mg/kg.

2.4 測定結果

通過液相色譜質譜法測定，該茶葉樣品中氧樂果殘留量結果為：

3 結論

采用GB 23200.121—2021《植物源食品中331 種農藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質譜聯用法》對茶葉中氧樂果農藥殘留量進行檢測，并依據JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》 規范， 評定了測量過程中的不確定度。結果表明，影響茶葉中氧樂果農藥殘留測量結果的主要不確定度分量為標準工作曲線擬合、標準溶液配制、待測樣品溶液定容引入的相對標準不確定度。因此，在采用GB 23200.121—2021 測定茶葉中的農藥殘留量時， 對于標準工作曲線，應根據實際情況選擇適合的濃度點，適當縮小濃度范圍，或者在定量軟件中調整標準曲線的權重，獲得更好的擬合結果；保證標準溶液配制時環境溫度的穩定，并規范使用移液管和容量瓶；嚴格控制樣品前處理的各個步驟，盡可能操作精確， 減少因定容溶液等引入的不確定度。