血清生物學標志物聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能

黃楠 黃穎 王欽君

作者單位：226200 江蘇南通，啟東市人民醫院，啟東肝癌防治研究所，南通大學附屬啟東醫院檢驗科

原發性肝癌在惡性腫瘤患者中較多發，發病率和病死率居高不下，病因尚未明確，受病毒性肝炎、不良飲食習慣和酒精攝入影響較大。調查研究表明，絕大部分患者存在不同程度肝硬化，可刺激肝細胞增生，引發其他疾?。?］。也有患者乙型肝炎（乙肝）表面抗原檢測結果為陽性，提示既往有乙肝病史或合并乙肝者更易發病。原發性肝癌早期缺乏典型癥狀，多表現為右上腹隱痛、食欲不振和腹水等，中晚期患者可有發熱等全身癥狀，也可使其他組織器官受累，引發相應癥狀，甚至導致死亡。為此，臨床應對乙肝盡早確診，為患者爭取最佳治療時機，以改善預后。病理學檢查為疾病診斷的“金標準”，但具有創傷性，且無法重復進行；影像學診斷較為常用，但易為儀器設備和操作者工作水平所影響。

甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）由胎兒肝細胞及卵黃囊合成，其水平上升多出現在肝臟疾病患者中，惡性腫瘤也可導致其水平上升，可用于原發性肝癌診斷，但敏感度不高，可產生假陽性結果［2-3］。異常凝血酶原（Des-γ-carboxyl prothrombin，DCP）為蛋白質，由維生素K 缺乏或拮抗劑-Ⅱ誘導所得，存在于維生素K 缺乏或肝細胞肝癌患者的血清中，其他類型肝病也可導致其水平輕度上升［4］。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican 3，GPC3）存在于細胞膜表面，為硫酸乙酰糖蛋白，可在肝癌患者血清中表達，在良性肝病組織和正常肝組織中微量表達或不表達，可作為肝臟腫瘤診斷的新型血清標志物［5］。為此，本研究分析血清AFP、DCP 和GPC3 聯合檢測在原發性肝癌診斷中的作用，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1研究對象及分組 選擇60 例原發性肝癌患者作為研究對象，納入肝癌組，時間為2020 年6 月—2022 年6 月，其中Ⅰ～Ⅱ期患者38 例，Ⅲ～Ⅳ期患者22 例；另外選擇同期60 例普通肝病患者作為研究對象，納入肝病組。

1.1.1納入標準 ① 肝癌組和肝病組患者符合疾病的診斷標準［6］；② 年齡＜80 歲；③ 血清標本質量符合檢測標準；④ 資料完整性好，數據真實。

1.1.2排除標準 ① 心臟、腦、脾臟、肺等組織器官病變嚴重者；② 其他類型惡性腫瘤患者；③ 嚴重感染者；④ 血液系統疾病患者。

1.1.3倫理學 本研究符合醫學倫理學標準，并經啟東市人民醫院醫學倫理委員會倫理審查（審批號：ER-XXM-LWTG-2020-001），所有檢測均獲得過患者或家屬的知情同意。

1.2儀器與試劑 Sorvall ST8 醫用離心機購自賽默飛世爾（蘇州）儀器有限公司〔注冊證編號：蘇蘇食藥監械（準）字2013 第1410726 號〕；CL-2200 全自動化學發光免疫分析儀購自深圳天辰醫療科技有限公司（注冊證編號：粵械注準20192220656）；URIT-8036 全自動生化分析儀購自桂林優利特醫療電子有限公司（注冊證編號：桂械注準20172220142）。

1.3研究方法 于患者入院24 h 內采集5 mL 空腹靜脈血，置于醫用離心機進行離心處理，參數設置為離心速度3 000 r/min，離心時間10 min，以分離所得血清作為待測標本。采用化學發光法，使用全自動化學發光免疫分析儀檢測AFP；使用全自動生化分析儀測定DCP 和GPC3，方法為酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。

1.4觀察指標

1.4.1肝癌組和肝病組的血清生物學標志物水平比較 比較普通肝臟疾病和原發性肝癌患者的血清AFP、DCP 和GPC3 水平。

1.4.2不同病情嚴重程度肝癌患者的血清生物學標志物水平比較 比較Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期肝癌患者的血清AFP、DCP 和GPC3 水平。

1.4.3不同指標單獨與聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能比較 繪制受試者工作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC 曲線）并計算ROC曲線下面積（area under ROC curve，AUC），考察各指標單獨與聯合應用對原發性肝癌的診斷效能。

1.5統計學處理 使用SPSS 25.0 統計學軟件處理數據。計量資料符合正態分布，以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗；計數資料以百分比（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1一般資料 肝癌組和肝病組患者的性別、年齡、病程等一般資料比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），資料有可比性，見表1。普通肝病組患者的疾病類型包括肝炎27 例，肝纖維化20 例，肝硬化13 例。

表1 肝癌組和肝病組患者的一般資料比較

2.2兩組血清生物學標志物水平比較 肝癌組患者的血清AFP、DCP 和GPC3 水平均明顯高于肝病組患者，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 肝癌組和肝病組患者的血清生物學標志物水平比較（x±s）

2.3不同分期肝癌患者的血清生物學標志物水平比較 Ⅲ～Ⅳ期肝癌患者的血清AFP、DCP 和GPC3水平均明顯高于Ⅰ～Ⅱ期肝癌患者，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 不同分期肝癌患者的血清生物學標志物水平比較（x±s）

2.4不同指標單獨與聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能比較 ROC 曲線分析顯示，血清AFP、DCP與GPC3 聯合檢測診斷原發性肝癌的AUC 為0.992〔95%可信區間（95%CI）為0.954～1.000〕，敏感度和特異度分別為91.67%和100.00%，均高于各指標單獨檢測。見表4，圖1。

圖1 血清AFP、DCP、GPC3 單獨與聯合檢測診斷原發性肝癌的ROC 曲線

表4 不同血清生物學標志物單獨與聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能

3 討論

原發性肝癌的發病率和病死率均處于較高水平，多數患者早期癥狀不明顯，典型性不足，確診時已發展至中晚期，無法耐受手術治療，僅可通過放化療延長生存期，預后不良。因此，應重視疾病的早期診斷，以盡早治療，改善預后。

血清腫瘤標志物既可產自腫瘤細胞本身，也可能是機體在腫瘤發生后產生或升高的某種物質，在血液、體液和細胞組織中均有分布，可反映腫瘤狀態和生長情況。臨床多采用化學、免疫學或基因組學等方法進行檢測，以準確診斷腫瘤病變，判定其嚴重程度，并預測疾病預后。

AFP 屬于糖蛋白，由胎兒肝細胞和卵黃囊分泌，其水平受多種惡性腫瘤發生發展影響，惡性腫瘤發生后，可導致其水平明顯上升，因此可作為陽性檢測指標。AFP 是原發性肝癌的血清標志物之一，在小細胞肝癌（直徑＜3 cm）中不表達或低水平表達，肝硬化、肝炎等普通肝病或其他惡性腫瘤也可導致其水平上升［7］。有研究表明，單獨使用AFP 對原發性肝癌患者進行診斷時價值不高，因此需積極尋找敏感度和特異度更高的血清腫瘤標志物，以實現對疾病的準確診斷［8-9］；理想的血清腫瘤標志物應具有較高的診斷敏感度和特異度，既要在疾病早期被檢測到，也能夠用于肝癌與普通肝臟疾病的鑒別，以準確診斷疾病，減少誤診和漏診風險。

DCP 又名脫-γ-羧基凝血酶原，于1984 年首次被用作腫瘤標志物，其水平在肝細胞癌患者體內迅速上升，在慢性活動性肝炎與轉移性肝癌患者體內上升不明顯?，F階段臨床把DCP 作為肝癌檢測的重要指標，《原發性肝癌診療規范（2017 年版）》［10］提出，將DCP 作為原發性肝癌診斷中的血清標志物，其半衰期為40～72 h，可在疾病診斷、療效評估和預后判斷中發揮作用。與AFP 相比，DCP 診斷原發性肝癌的敏感度和特異度都較高，特別是對早期AFP 陰性早期肝癌患者的診斷價值更高。朱嫦琳等［11］的研究結果顯示，以非肝癌患者作為對照組時，DCP 診斷原發性肝癌的敏感度和特異度分別為77.89%和88.81%，明顯高于AFP 的60.35%和79.77%。此外，DCP 與AFP 水平并無相關性，聯合應用時，可互相補充，發揮各自優勢，對疾病予以準確診斷。

GPC3 是硫酸類肝素糖蛋白聚糖家族成員之一，屬于膜性間質蛋白，其表達方式與成纖維細胞生長因子等一致，可在細胞表面受體傳導信號的作用下調節細胞形態和活動狀態。GPC3 既在細胞增殖分化中發揮作用，也可促進腫瘤增殖和轉移。超過80%的肝癌患者血清內有GPC3 表達，不受腫瘤大小和分化程度的影響。王美英等［12］探討該指標對原發性肝癌的診斷價值，敏感度為58.2%，特異度為83.9%，準確度為71.8%。

本研究結果顯示，血清AFP、DCP 聯合GPC3 診斷原發性肝癌的敏感度和特異度均更高，可見聯合檢測更能準確診斷疾病。分析原因主要是由于各項血清指標無相關性，聯合應用時可克服單一檢測指標的不足，發揮各項指標的優勢，避免出現假陽性結果，實現疾病的準確診斷。

本研究比較不同肝病患者的血清指標水平，結果顯示原發性肝癌患者血清AFP、DCP 和GPC3 水平更高，患者病情越嚴重，血清標志物水平越高，表明血清腫瘤標志物可用于原發性肝癌和普通肝臟疾病的鑒別診斷，為疾病準確診斷提供依據，其水平隨著疾病嚴重程度的增加而上升，在疾病嚴重程度的評估中發揮作用。

本研究對血清AFP、DCP 聯合GPC3 在原發性肝癌中的診斷價值進行探討，成效明顯，但存在幾點不足：① 樣本數量較少，未能納入更多類型肝臟疾病患者；② 未分析患者腫瘤數量、轉移情況等對血清標志物的影響，診斷價值尚未明確。在下一步研究中，應納入其他類型肝臟疾病患者，分析病灶數量等因素對腫瘤標志物水平的影響，以獲得更具推廣價值的結論。

綜上所述，血清AFP、DCP 聯合GPC3 可準確診斷原發性肝癌，也在疾病嚴重程度判定中發揮作用，具有較高的應用價值。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突