機化性肺炎患者T 淋巴細胞亞群分析的臨床意義

薛占成 韓海燕 劉冀琴 周秀

作者單位：300162 天津，武警特色醫學中心檢驗科

機化性肺炎是一種因肺損傷導致的以遠端氣道炎癥細胞浸潤和肉芽組織增生為特征的非特異性炎癥反應，可由感染、藥物等因素引起［1-3］。作為間質性肺炎的一種亞型，機化性肺炎占間質性肺炎的4%～12%［4］。機化性肺炎的發病機制涉及多種炎性細胞及炎癥因子，是一個復雜的多因素參與的炎性機化過程，患者臨床上主要表現為持續性的咳嗽、咳痰、胸悶、氣短［5］。

機化性肺炎的發生發展與機體免疫反應密切相關［6］。T 淋巴細胞是機體執行細胞免疫的主要效應細胞之一，T 淋巴細胞亞群的改變會影響肺部疾病的發生發展。在T 淋巴細胞亞群的臨床研究中，目前大多選擇患者外周血和支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）作為樣本，但針對二者結果的比較研究較少。本研究使用流式細胞儀檢測45 例機化性肺炎患者及30 名健康體檢者BALF 和外周血中的T 細胞亞群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+），探討其在機化性肺炎診斷中的臨床價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1研究對象與分組 選擇本中心2013—2019 年收治的45 例機化性肺炎患者作為研究對象，納入觀察組；另外選擇30 名本中心同期體檢人員納入對照組，回顧并分析兩組的臨床資料。所有受檢者均對本研究知情同意。

1.1.1納入標準 所有患者均符合美國胸科學會和歐洲呼吸學會（American Thoracic Society/European Respirator Sociey，ATS/ERS）頒布的機化性肺炎診斷標準［7］，臨床診斷為機化性肺炎，如感染、藥物、放射、過敏、風濕免疫性肺損傷等［8-9］。

1.1.2排除標準 ① 臨床資料不完整或在治療隨訪中失訪、退出的患者；② 肺癌患者。

1.2研究方法

1.2.1儀器與試劑 FC500 流式細胞儀和CD45/CD4/CD8/CD3 檢測試劑盒（流式細胞術）均購自美國貝克曼庫爾特有限公司。

1.2.2檢測指標 采集受檢對象靜脈血2 mL 置于乙二胺四乙酸二鉀（dipotassium ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA-K2）抗凝管；BALF 經雙層無菌紗布過濾后，以1 500 r/min（離心半徑為10 cm）離心10 min，沉淀的細胞成分用鞘液制成細胞懸液。取CD3、CD4、CD8 熒光標記的單克隆抗體各20 μL，分別加入100 μL 抗凝外周血和BALF 細胞懸液中，于室溫在暗處反應20 min，用細胞裂解液溶解紅細胞，鞘液洗滌細胞1 次，采用流式細胞儀測定T 淋巴細胞亞群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+），在直方圖中標記出淋巴細胞群，再分別計數6 000 個T 淋巴細胞中各標記細胞的百分比。

1.3統計學方法 采用GraphPad Prism 5 統計軟件對實驗數據進行統計分析。對計量資料行t檢驗及方差分析；繪制受試者工作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC 曲線）并計算ROC曲線下面積（area under ROC curve，AUC）。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1一般資料 觀察組和對照組的性別、年齡等一般資料比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），有可比性。見表1。

表1 觀察組和對照組的一般資料比較

2.2外周血T 淋巴細胞亞群 兩組CD3+比較差異無統計學意義（P＞0.05）；觀察組的CD3+CD4+以及CD4+/CD8+比值均明顯低于對照組，CD3+CD8+明顯高于對照組（均P＜0.05）。見表2，圖1。

圖1 觀察組與對照組患者外周血中T 淋巴細胞亞群分析

表2 觀察組與對照組患者BALF 和外周血中T 淋巴細胞亞群比較（x±s）

2.3BALF T淋巴細胞亞群 觀察組CD3+、CD3+CD8+均明顯高于對照組，CD3+CD4+以及CD4+/CD8+比值均明顯低于對照組（均P＜0.05）。見表2，圖2。

圖2 觀察組和對照組患者BALF 中T 淋巴細胞亞群分析

2.4BALF 與外周血T 淋巴細胞亞群比較 觀察組BALF 中CD3+、CD3+CD8+均明顯高于PB 中（均P＜0.05）；觀察組BALF 中CD3+CD4+、CD4+/CD8+比值與外周血比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。見表2，圖3。

圖3 觀察組患者BALF 與外周血T 淋巴細胞亞群比較

2.5BALF 及外周血中CD4+/CD8+比值檢測對機化性肺炎診斷的敏感度和特異度比較 ROC 曲線分析結果顯示，以BALF 中CD4+/CD8+比值等于0.960作為最佳截斷值，該指標診斷機化性肺炎的敏感度為86.67%，特異度為80.00%；以外周血中CD4+/CD8+比值等于0.890作為最佳截斷值，該指標診斷機化性肺炎的敏感度為80.00%，特異度為76.09%。BALF檢測診斷機化性肺炎的AUC 為0.892〔95%可信區間（95%CI）為0.808～0.963〕，外周血檢測診斷機化性肺炎的AUC 為0.747（95%CI為0.628～0.866），差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖4。3 討論

圖4 BALF 及外周血中CD4+/CD8+比值檢測診斷機化性肺炎的ROC 曲線

機化性肺炎是由于肺組織受損造成非特異性反應所致，表現為纖維母細胞異常增殖、炎癥細胞浸潤及間質纖維增生等，致肉芽組織遍布肺泡腔［10］。國內外有研究結果表明，不同類型間質性肺炎患者的BALF 中T 淋巴細胞亞群水平均不同［6，11-13］。

BALF 由支氣管以下肺部病變段灌洗回收而得，是獲取遠端肺實質炎癥細胞簡單而安全的途徑，通過對BALF 的檢測和分析，可在患者發病早期了解肺部疾病的特點，有助于對間質性肺炎的診斷［14-18］。且BALF 中的T 淋巴細胞亞群在不同類型間質性肺炎患者中表達水平不同［19］。T 淋巴細胞介導機體細胞免疫，是細胞免疫的主要效應因子，其發揮的調節作用主要是通過T 淋巴細胞亞群相互作用來維持［20-21］。CD3+CD4+細胞為機化性肺炎的保護因素，其表達量降低是機化性肺炎惡化的原因之一。CD3+CD8+為病情加重的危險因素，可通過釋放抑制性細胞因子，負調節機體免疫功能［22-23］。CD3+CD4+與CD3+CD8+在體內維持一定程度的動態平衡，CD4+/CD8+決定了機體免疫狀態和免疫反應水平［24-25］。本研究結果顯示，在機化性肺炎患者的BALF 和外周血中，CD4+/CD8+比值明顯降低，與田輝等［6］、王小燕［17］、林芳等［18］研究結果一致，其中BALF 和外周血中CD4+/CD8+比值降低是CD3+CD4+降低和CD3+CD8+升高共同作用的結果，提示CD4+/CD8+比值與機化性肺炎的發生發展有一定關系。

進一步繪制ROC 曲線結果顯示，BALF 和外周血中CD4+/CD8+比值診斷機化性肺炎的最佳陽性閾值分別為0.960 和0.890；BALF 和外周血檢測的AUC 分別為0.892 和0.747，兩者差異具有統計學意義，提示BALF 中CD4+/CD8+比值檢測對機化性肺炎的診斷效能高于外周血檢測。

綜上所述，BALF 和外周血中T 淋巴細胞亞群檢測對機化性肺炎患者的診斷具有一定臨床價值，對患者BALF和外周血的T淋巴細胞亞群進行分析，可作為機化性肺炎患者免疫狀態評估的輔助手段。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突