miR-133a、miR-182-5p與膿毒癥患者腸屏障以及預后的關系

王肖肖,王雅婧,閆文文,劉 倩

(河北省保定市第一中心醫院重癥醫學科,河北 保定 071000)

膿毒癥是因感染引起的全身炎癥綜合征,按膿毒癥嚴重程度分為膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克,嚴重膿毒癥可導致多器官功能障礙,危及患者生命安全[1-2]。準確了解膿毒癥患者疾病狀態,對臨床治療及預后評估具有重要意義。近來有研究表示,微小RNAs(microRNAs,miRNAs)參與了膿毒癥的發生、發展過程[3-4]。膿毒癥患者道屏障功能其發生、發展過程中起到重要作用,但miRNAs與膿毒癥腸屏障及預后的關系尚不確切[5-6]?；诖?研究通過檢測膿毒癥患者血清微小RNA-133a(microRNA-133a,miR-133a)、微小RNA-182-5p(microRNA-182-5p,miR-182-5p)清腸脂肪酸結合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,IFABP)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-lacticacid,D-LAC)等腸屏障功能指標水平,分析膿毒癥患者miRNAs與腸屏障的關系,旨在通過腸屏障功能情況了解患者病情程度,進而為膿毒癥患者病情及預后評估提供重要參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年3月—2022年3月我院收治的150例膿毒癥患者,入院時采用急性生理與慢性健康評分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEⅡ)及膿毒癥臨床癥狀評分指南,將患者分為輕中度膿毒癥組79例和重度膿毒癥組71例。輕中度膿毒癥組男性38例,女性41例,年齡(47.23±6.58)歲,病程(4.31±0.56)d,感染部位:肺部感染33例,腹腔感染24例,胸腔感染17例,血流感染5例。重度膿毒癥組男性37例,女性34例,年齡(45.82±5.49)歲,病程(4.27±0.51)d,感染部位:肺部感染35例,腹腔感染22例,胸腔感染13例,血流感染1例。兩組性別、年齡、病程、感染部位等資料差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。根據患者30 d預后情況,將患者分為存活組102例和死亡組48例。

本研究獲醫院倫理委員會批準。

1.2納入標準 ①符合中國膿毒癥/膿毒性休克急診治療指南(2018)中的膿毒癥診斷標準[7],年齡>18歲;②臨床資料完整;③患者知情且簽署知情同意書。

1.3排除標準 ①合并嚴重肝腎功能不全;②合并血液系統疾病或免疫系統損害者;③溝通困難或精神障礙、認知障礙無法配合研究者。

1.4方法 患者入院時取其空腹靜脈血3 mL,以3 000 r/min,離心10 min取上清液置于-70 ℃冰箱保存待測。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清腸脂肪酸結合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,IFABP)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-lacticacid,D-LAC)等腸屏障功能指標水平,試劑盒分別購自上海凱博生化試劑有限公司(IFABP、DAO)和上海繼錦化學科技有限公司(D-LAC),相關操作嚴格按照試劑盒說明書進行。使用上海經科化學科技有限公司TRIzol試劑盒提取血清總RNA,上海臻諾生物科技有限公司Taka Ra 逆轉錄試劑盒反轉錄為cDNA,采用實時熒光定量PCR檢測血清miR-133a、miR-182-5p表達水平。反應條件為:95 ℃ 10 min,95 ℃ 15 s,63 ℃ 60 s,75 ℃ 15 s,共40個循環。miR-133a上游引物5′-GCCAAGCTGGTAAAAATGGAA-3′,下游引物5′-TATGGTTTTGACGTGTGTAT-3′。miR-182-5p上游引物 5′-ACTACTTCGACTGAGACACG-3′,下游引物 5′-GTCTGCATGCTGTCCTTG-3′。以 U6 為內參,U6上游引物 5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。采用2-△△Ct計算血清miR-133a、miR-182-5p相對表達量。

1.5觀察指標 ①搜集患者性別、年齡、病程、感染部位等資料進行組間分析比較;②比較2組IFABP、DAO、D-LAC等腸屏障功能指標和血清miR-133a、miR-182-5p水平;③采用Pearson相關性分析血清miR-133a、miR-182-5p與膿毒癥腸屏障的關系;④比較存活組和死亡組血清miR-133a、miR-182-5p水平;⑤以預后為因變量,采用Logistic多因為回歸分析血清miR-133a、miR-182-5p水平是否膿毒癥患者預后的影響因素。

1.6統計學方法 應用SPSS 19.0統計軟件分析數據。計量資料組間比較采用獨立樣本t檢驗;計數資料比較采用χ2檢驗,Pearson相關性分析血清miR-133a、miR-182-5p與膿毒癥腸屏障的關系;采用Logistic多因素回歸分析膿毒癥患者預后影響因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.12組腸屏障功能指標和血清miR-133a、miR-182-5p水平比較 輕中度膿毒癥組血清IFABP、DAO、D-LAC等腸屏障功能指標和血清miR-133a水平低于重度膿毒癥組(t=39.268、11.414、13.187、3.815,P<0.05),而血清miR-182-5p水平高于重度膿毒癥組(t=130.137,P<0.05),見表1。

表1 2組腸屏障功能指標和血清miR-133a、miR-182-5p水平比較

2.2血清miR-133a、miR-182-5p水平與膿毒癥患者腸屏障的關系 Pearson相關性分析結果顯示,血清miR-133a水平與IFABP、DAO、D-LAC呈正相關關系(r=0.421、0.437、0.507,P<0.01),血清miR-182-5p水平與IFABP、DAO、D-LAC呈負相關關系(r=-0.433、-0.462、-0.497,P<0.01),見表2。

表2 血清miR-133a、miR-182-5p水平與膿毒癥患者腸屏障功能指標的相關性分析

2.3不同預后患者血清miR-133a、miR-182-5p水平比較 存活組血清miR-133a水平低于死亡組(t=10.126,P<0.05),而血清miR-182-5p水平高于死亡組(t=23.979,P<0.05),見表3。

表3 不同預后患者血清miR-133a、miR-182-5p水平比較

2.4血清miR-133a、miR-182-5p與膿毒癥腸患者預后的Logistic多因素回歸分析 以預后為因變量(存活=0,死亡=1),以血清miR-133a、miR-182-5p為自變量,進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,miR-133a升高(OR=2.303,95%CI:1.453～3.650)、miR-133a降低(OR=1.772,95%CI:1.167～2.690)是膿毒癥患者預后的重要影響因素(P<0.05),見表4。

表4 各指標與膿毒癥患者預后的Logistic多因素回歸分析

3 討 論

膿毒癥病情兇險,病死率高,其發病機制復雜,與全身炎癥、免疫失衡、組織損失、多器官病理生理改變有關[8-9]。感染所致的炎癥反應在膿毒癥發病過程發揮重要作用,可通過炎癥聯級反應影響多臟器器官功能,可導致急性腎損傷、心肌損傷等并發癥,嚴重影響患者預后[10-11]。早期發現及評估膿毒癥患者病情嚴重程度,及時予以有效治療策略對提高患者生命質量具有積極意義。本研究結果顯示,腸屏障功能指標和血清miR-133a、miR-182-5p表達水平與膿毒癥患者病情嚴重程度及預后密切相關,血清miR-133a、miR-182-5p表達水平對評估膿毒癥患者病情嚴重程度及預后具有重要參考價值。

比較不同病情嚴重程度濃度患者血清指標水平,結果顯示,輕中度膿毒癥組血清IFABP、DAO、D-LAC等腸屏障功能指標和血清miR-133a水平低于重度膿毒癥組,而血清miR-182-5p水平高于重度膿毒癥組,提示輕中度膿毒癥患者腸屏障功能優于重度膿毒癥患者,腸屏障功能與濃度患者病情程度有關。Pearson相關性結果顯示,血清miR-133a、miR-182-5p表達水平與腸屏障功能密切相關,提示血清miR-133a、miR-182-5p表達水平與膿毒癥病情程度密切相關。究其原因,腸屏障在維護腸道蠕動、消化吸收,及激素分泌和免疫調節等功能方面扮演重要角色,膿毒癥炎癥及應激反應可導致腸黏膜缺血、缺氧,通透性增加,進而導致腸屏障功能損傷[12-13]。腸屏障損傷時,腸黏膜上皮細胞壞死、凋亡,腸通透性增加,血清中IFABP、DAO、D-LAC水平升高,故腸屏障相關指標能反映腸道屏障功能的好壞。而腸屏障功能損傷可誘發全身炎性反應,加劇膿毒癥患者病情[14-15]。因此,腸屏障功能情況對于膿毒癥患者病情程度評估具有一定參考價值。miRNAs可通過影響炎癥反應和細胞缺血、缺氧、增殖、分化、代謝、凋亡等生物學過程或通路參與多種病情生理過程,在細胞凋亡以及脂肪代謝和膿毒癥全身炎癥級聯反應過程、器官功能損傷中發揮重要作用[16-17]。急性腎損傷是膿毒癥患者常見的、最嚴重的并發癥,是膿毒癥患者病死率的重要原因之一,miR-133a可通過抑制異構體肌動蛋白結合蛋白2表達,介導缺氧導致的心肌細胞凋亡,進而影響膿毒癥患者預后。膿毒癥患者因感染機體免疫功能紊亂,Toll樣受體信號通路介導多種炎癥因子作用,而miR-182-5p可通過調控Toll樣受體信號通路,影響炎癥因子表達,進而參與膿毒癥病情評估[18-19]。炎癥反應在腸屏障功能過程中起到重要作用,因此,檢測血清miR-133a、miR-182-5p表達水平可反映腸屏障功能情況,進而幫助評估膿毒癥患者腸屏障功能。

存活組血清miR-133a水平低于死亡組,而血清miR-182-5p水平高于死亡組,提示血清miR-133a、miR-182-5p表達水平與膿毒癥患者預后有關。進一步Logistic回歸分析結果顯示,血清miR-133a表達升高、miR-182-5p表達降低是影響膿毒癥患者預后的重要影響因素。究其原因,miR-133a可通過加到細胞外調節蛋白激酶磷酸化,促進嗜酸粒細胞趨化,促使平滑肌細胞增殖,調節淋巴細胞因子表達,促進炎癥細胞釋放,加劇炎癥反應,進而加劇病情,影響膿毒癥患者預后[20-21]。miR-182-5p能參與多種炎癥反應,其表達降低可促進炎性因子釋放,擴大膿毒癥患者炎癥聯級反應,進而加劇病情[22]。miR-182-5p表達上調可經脂多糖作用降低腎小管上皮細胞白介素1β、腫瘤壞死因子α、白細胞介素6等中炎性因子表達水平,增強細胞活性,減少細胞凋亡[23-24]。故miR-133a、miR-182-5p在膿毒癥患者預后評估具有重要參考價值。但由于本次研究樣本量較少,且miRNAs生物功能多樣,其在膿毒癥疾病發生、發展中的作用機制還有待進一步探究,以期為臨床應用提供可靠依據。

綜上所述,膿毒癥患者血清miR-133a表達水平升高,miR-182-5p表達水平降低,與患者腸屏障功能及預后密切相關,可作為膿毒癥患者病情嚴重程度及預后評估的重要指標,對臨床治療及改善預后具有一定指導意義。