基于膠原異三聚體的成骨不全癥機理研究

強書敏,呂 成,許 菲

（江南大學 生物工程學院,江蘇 無錫 214122）

0 引 言

膠原蛋白是動物體內含量最豐富的蛋白質,可以作為結構蛋白為皮膚、骨骼、血管等提供支撐與張力.同時,膠原蛋白具有生物活性,可以與許多細胞外基質相互作用[1-3],人體內的膠原蛋白占總蛋白的三分之一[4].膠原蛋白的序列包含大量重復的(Gly-X-Y)n單元,其中X 位通常是脯氨酸(Pro),而Y 位通常為(2S,4R)-4-羥脯氨酸(Hyp)[5-6].3 條膠原蛋白鏈相互纏繞,折疊形成特有的三螺旋二級結構.當3 條鏈序列相同時,稱為同三聚體,反之則稱為異三聚體.三聚體螺旋結構中的兩條肽鏈之間通過一個殘基的錯位排列,促使甘氨酸(Gly)亞氨基的氮(N-H)與相鄰肽鏈X 位殘基的羰基氧(C=O)形成氫鍵,按照順序將3 條鏈命名為前鏈、中鏈、尾鏈.從膠原蛋白N 端到C 端形成一系列梯狀排列的氫鍵,這是穩定三螺旋結構的主要驅動力來源.

人體中包含28 種類型的天然膠原蛋白,其中占比最大的是Ⅰ型膠原蛋白,是由兩條α1 鏈與一條α2 鏈構成的異三聚體.醫學研究發現,當Ⅰ型膠原蛋白中發生單點突變,往往是Gly 被其他殘基替代,會引起包括成骨不全癥(osteogenesis imperfecta,OI)在內的多種結締組織疾病[1,7-9].OI 患者的癥狀差別很大,有輕度的多發性骨折,也有重度的圍產期致死[7-10],但突變類型與疾病癥狀之間的聯系尚不清楚.

天然膠原具有尺寸大、溶解度差和序列重復等特點,因此,很難利用全膠原序列在原子水平上進行分析,在生物物理方面主要通過主客體模型對OI 致病機理進行研究[11].將OI 突變插入具有高穩定性的主體序列中構建突變體,利用X 射線衍射,核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)光譜和圓二色譜(circular dichroism,CD)實驗表征突變對膠原三螺旋結構造成的影響[10-21].這些主體序列稱為類膠原多肽(collagen model peptides,CMP),多包含Gly-Pro-Hyp 重復序列,在溶液中形成穩定的同三聚體螺旋結構.研究者在同三聚體序列中引入包含不同類型的OI 突變模體序列,破壞了三螺旋的分子結構,導致熱穩定性顯著降低,并且發現位于不同鏈的突變可引發不同的破壞效果[10,22-24].最經典的研究是在同三聚體(POG)103 條鏈中引入Gly→Ala 突變,結晶得到突變模型(PDB ID 1CAG),突變后的熔融溫度(Tm)值由初始的60℃降至29℃[25].NMR 的研究集中于Ala 突變對局部三螺旋結構的影響.比如,尾鏈Ala 突變的氨酰質子升溫速率高于未突變的Gly,表明突變破壞了尾鏈上的氫鍵,但是其他兩個突變位點氨酰質子升溫速率保持不變.耦合值(J)可以與氨基酸二面角φ 角對應,在正常Gly-X-Y 中Gly 的耦合值為(4.7±0.3)Hz,突變后只有中鏈Ala 的耦合值增大,其他鏈保持不變,表明雖然3 條鏈均引入Ala 突變,但只有一條鏈偏離三螺旋主鏈構象[26].由于Ⅰ型膠原是由兩條α1(Ⅰ)鏈和一條α2(Ⅰ)鏈組成的異三聚體,為了更貼近Ⅰ型膠原的成分,近些年隨著異三聚體理性合成技術的發展,也開始以異三聚體為主體肽來研究OI 突變[27-30].例如,將Gly→Ala 分別引入AAB 模型A、B 鏈時,A 鏈的突變同時發生在前鏈與中鏈,Tm值降低32.0℃,破壞1 個氫鍵[31],B 鏈突變在尾鏈中引入一個突變,其熱穩定性降低20.5℃,破壞5 個氫鍵[32].盡管可以從NMR 中獲取大量的定量動力學數據,但是這些研究集中在突變位點,缺乏突變對整體結構影響的描述.

除了生物物理實驗之外,研究者們還利用了分子動力學(molecular dynamics,MD)模擬表征了主客體模型中OI 突變對膠原三螺旋結構的影響.從含有突變的CMP 模擬軌跡中提取主鏈氫鍵的構象變化,發現突變位點附近的氫鍵一部分遭到破壞,另一部分重構為水介導的氫鍵.同時,與晶體中棒狀的三螺旋分子不同的是,突變后的CMP 模擬軌跡中,分子彎曲度明顯增加[23,33-34].在一個包含數個OI 突變且長度為1 014 個殘基的Ⅰ型膠原蛋白模型中進行MD 模擬,結果顯示,突變位點附近結構有些呈現完整的三螺旋結構,有些部分解折疊并出現分子彎曲,這表明突變在不同的區域對結構的破壞也存在差異[35].盡管這些研究表明膠原序列中的Gly 突變會影響三螺旋結構,但是如何精確地描述突變對三螺旋分子整體運動模式的影響仍有待進一步研究.

利用三螺旋階梯中相鄰三角形的歐拉旋轉參數和平移參數對膠原進行建模,并通過從PDB 數據庫中提取參數的離散度來構建統計勢能,得到了一種可以定量描述膠原形變的彈性函數[36].該模型將CMP 螺旋結構轉化為Cα 三角形之間的移動.取Gly 與相鄰氨基酸的Cα,構建三角形平面并建立坐標軸,量化平面之間的移動,利用該模型可以定量描述膠原自身結構的彎曲與拉伸.

本文利用abc(PDB ID: 5YAN)異三聚體,引入OI 突變位點,將第17 位Gly 突變為Ala,構建了7 種突變體.結合差示掃描量熱(differential scanning calorimetry,DSC)、MD 模擬、梯階模型分析等方法,定量描述了突變對膠原蛋白三螺旋熱穩定性、分子結構與運動模式的影響,發現氫鍵的形成與分子形變具有高相關性,為進一步揭示OI 的致病機理奠定了理論基礎.

1 材料與方法

1.1 差示掃描量熱

在Nano DSC(TA Instruments)中對組裝后的三螺旋進行DSC,并結合Nano Analyze 軟件分析數據.本文所用的類膠原多肽序列購于上海吉爾生化有限公司,膠原自組裝方法參照文獻[37].自組裝后的三螺旋濃度為1 mg·mL—1.水與PB 緩沖混合溶液至少掃描3 次作為基線,在 20℃下將樣品溶液裝入池中,并以 1℃·min—1的速率加熱.從相應緩沖液的吸熱曲線中減去樣品的吸熱曲線并歸一化濃度.使用數據分析軟件Nano Analyze 計算ΔH和Tm的值.

1.2 分子動力學模擬

在GROMACS 中的Amber99sb*-ILDN 力場下進行模擬[38-39].將不同膠原模型結構分別置于十二面體周期盒中,其中TIP3P[40]模型水分子約39 291 個.從盒子表面到最近的溶質原子的距離設定為10 ?(1 ?=10—10m).模擬的時間步長為2 fs.長程靜電相互作用使用粒子-網格Ewald 方法[41]進行評估,其中,FFT 網格的最大間距為12 ?,并且通過六階多項式進行插值.靜電和范德華相互作用的最小截止距離設定為12 ?.使用最速下降法將系統降至局部能量最小值.隨后,通過速度重新縮放算法(0.1 ps 弛豫時間)保持297 K 的溫度,并且使用Berendsen 的弱耦合方法[42]控制壓力P=1 × 105Pa,進行10 ns NPT 和100 ns NVT 模擬.

1.3 Cα 三角形

將膠原蛋白的運動看作一系列三角形的相互位移,三角形的頂點為Gly 與相鄰非Gly(A1,A2)的Cα[43].按照右手原則建立坐標系,A2指向A1的方向為y軸.A1與A2之間的中點定義為坐標軸原點.x軸垂直于y軸,并且與原點到Gly 的向量呈銳角.z軸是在三股螺旋的N 端到C 端的軸方向上具有正值的x軸和y軸的叉積.通過最小二乘擬合將標準坐標系疊加到給定的Cα 構成三角形上,從而得到Cα 三角形的參照系.

1.4 梯階參數與形變分數

兩個成功構建的三角形之間按照運動模式可分為6 種不同的相對關系,分別為在x-,y-,z-軸的3 個位移: Rise,Shift,Slide;3 個旋轉: Roll,Tilt,Twist[36].利用已知彈性函數[44]來估算膠原在形變時的程度,形變分數(deformation score E,記為EDS)取自6 個梯階參數中兩兩成對的彈性貢獻之和:

式(1)中:E0為基準線,本文中取E0=0. Δθiθi-是第i步梯階參數與平衡態之間的差值.平衡態和力場參數fij取自40 個結晶良好的膠原蛋白的梯階參數數據庫.i,j分別代表梯階的6 個參數.具體參數計算方法詳見文獻[26].

1.5 氫鍵參數

膠原三螺旋結構中甘氨酸亞氨基(N-H)與相鄰肽鏈X 位置的氨基酸的羰基氧(C=O)能夠形成氫鍵,模擬中氫鍵的定義為氫供體和受體重原子之間的原子間距離R小于3.5 ?,同時氫-供體-受體構成的α 角小于30°[45].氫鍵能量(EHB)的計算采取以下公式:

式(2)中:R0為穩定時氫鍵的平均距離,本文取2.95 ?,R為某時刻的氫鍵距離,D0為對應原子在該力場下的井深.F(θ)cos2(θ)cos2(φ),氫鍵中N-O 原子成鍵按照sp3-sp2 軌道雜化[46],θ角是NGly-HGly-OXaa,φ角為CXaa-OXaa-HGly,N 和H 原子來自Gly,而C 和O 原子來自X 位置的氨基酸.

2 結果

2.1 DSC 表征

為了描述OI 突變對膠原結構的影響,使用先前設計的異三聚體膠原abc作為宿主模型并引入Gly→Ala 突變,其中a為前鏈,b為中鏈,c為尾鏈,突變后的鏈分別為a′、b′、c′.本文所用abc序列如圖1(a)所示,避免首尾端擺動影響,選取中間區域Gly,將每條鏈第17 位突變為Ala.分別將突變模型命名為單點突變a′bc、ab′c、abc′,雙點突變a′b′c、ab′c′、a′bc′,三點突變a′b′c′.

圖1 abc (PDB ID 5YAN)的序列和整體結構Fig.1 Sequence and overall structure of abc(PDB ID 5YAN)

為了檢測Gly 突變對膠原熱穩定性的影響,使用DSC 表征abc與突變體的焓變(ΔH)及焓變發生溫度(Tm).DSC 結果顯示,與abc相比,突變導致Tm值降低約15℃,ΔH減少10～ 20 kcal·mol—1(表1).相對于單點突變體,雙點突變未測量到明顯的放熱峰,即ΔH,這表明雙點突變導致了大部分三螺旋結構解折疊.結果表明,在引入Gly→Ala 突變后,膠原模型熱穩定性降低,突變點越多,下降越明顯.

表1 膠原參數平均值的變化Tab.1 Average of parameters changes in collagen

2.2 結構變化

為了分析突變對于膠原分子全局的結構變化,提取系統平衡后模擬軌跡,將N 端第1—10 位氨基酸進行重疊,定義側視圖中軌跡邊緣構成的角度為三螺旋擺動角度,仰視圖中軌跡構成的形狀為三螺旋擺動方向.結果顯示,所有模型在溶液中均存在一定的擺動角度,abc中擺動角度約為 30°,而擺動方向的集合近似圓形(圖2(a)).與abc相比,Ala 突變后擺動更加明顯.a′bc擺動方向的集合呈橢圓形,擺動角度增加至40°(圖2(b)).與a′bc相似,ab′c和abc′的擺動角度約為40°(圖2(c—d)),但擺動方向也近似圓形.在多點突變體中發現了更大的擺動,與單點突變相比,擺動的角度增加了10°,約為50°(表1).同時,擺動的形狀仍然大致呈圓形.結果表明,突變后主鏈整體結構受到破壞,擺動角度均有增加;突變引入的越多,擺動角度增加越多.而擺動方向的集合則出現不規則變化,有時與abc一致保持圓形,有時則變為橢圓形.雖然晶體中三螺旋往往呈棒狀結構,但是在水溶液中會產生動態的結構形變,導致分子在各個方向上的擺動[47].引入突變后,發生較大的擺動角度與方向的變化,可能與突變引發的局部結構形變有關.

圖2 從abc 和突變體的MD 軌跡中提取主鏈結構Fig.2 Main chain movement extract from MD trajectory of abc and single chain mutants

2.3 Cα 三角形

在膠原蛋白中,由于G-X-Y 序列的重復,可以將其運動軌跡視為一系列三角形的位移[36],而每一個三角形的面積可以表示為該區域的解旋程度.為了描述Gly-Ala 突變后局部區域結構的變化,排除N-與C-端的擺動影響,提取軌跡5 000 幀軌跡,計算第13—18 個三角形的平均邊長與面積(圖3(a)).以Cα 為頂點,三角形在膠原中的結構如圖3(a)所示,Gly 以紫色表示,按照右手螺旋選取A1、A2,表示的氨基酸在圖中標出.

圖3 Cα 構成的三角形以及突變后邊長與面積變化Fig.3 The change of side length and area after mutation in Cα triangle

abc中三角形的邊長為(4.81±0.09)?,同時三角形的平均面積為(10.28±0.10)?2,每個區域表現為一個邊長為4.8 ? 的等邊三角形,表明在未突變時3 條鏈的距離相近且變化較小,結構非常穩定(圖3(b—d)).在突變體中,Gly-A1邊長增加(a′bc的第15 個、ab′c的第16 個、abc′的第17 個三角形),增量為1.03～ 1.33 ?.同時A1-A2邊長也出現增加(a′bc的第16 個、ab′c的第17 個、abc′的第18 個三角形),最大增量為1.58 ?.由于邊長增加,相對應的三角形面積也出現增加,這些三角形分別為a′bc的第14—16 個、ab′c的第15—16 個、abc′的第16—17 個三角形(圖3(e)),增量最大依次為(1.52 ±0.97)?2、(1.79±1.28)?2、(1.40±0.95)?2.結果表明,由于Gly 變為側鏈更大的Ala,雖然在整體上依舊保持三螺旋的膠原結構,但是突變所在三角形的Gly-A1邊長,以及相鄰且位于C 端的三角形的A1-A2邊長增加,同時伴隨對應面積的增大.為了觀察多點突變對局部結構的影響,在雙鏈突變中計算三角形的邊長與面積.在a′b′c突變體中,突變的引入會增加第15—16 個三角形的Gly-A1邊長,以及第16—17 個三角形的A1-A2邊長.面積的增加出現在第14—17 個三角形,而突變區域第14—18 個三角形的平均面積為(11.57±0.75)?2.與單鏈相比,影響的區域具有一定的疊加性,包含a,b鏈單點突變時的區域(第14—17 個三角形).其中b鏈突變所在的三角形面積變化最大,增大(2.60±1.18)?2.在ab′c′突變體中,與a、b鏈組合突變類似,當組合b、c鏈突變后,邊長與面積的增加區域為單鏈突變的疊加: 第16—17 個三角形的Gly-A1邊長,以及第17—18 個三角形的A1-A2邊長增加;第16—18 個三角形的面積增大,最大的一個增加了(3.34±1.53)?2.與其他兩個雙點突變體不同,a′bc′突變體雖然導致了整體面積的增大((10.69±0.73)?2),但影響的區域(第15—18 個三角形)小于兩個單鏈突變區域(第14—18 個三角形)的疊加,三角形面積增大(1.77±0.15)?2.同時引入3 個點的突變,a′b′c′突變體,也僅僅是影響到了4 個三角形的面積.結果顯示,當突變發生在相鄰兩個三角形區域時,變化的區域包含單點突變所在的區域,而當突變出現在相隔三角形時(a′bc′),變化的區域大于單點突變,小于兩個單點突變的和.三點突變則表現為大于單點突變、小于3 個突變的數值之和.

2.4 梯階參數

為了解析膠原蛋白突變前后運動模式的變化,利用6 種梯階參數,將膠原的結構形變分解為一系列Cα 三角形的旋轉與位移,計算突變前后參數的變化,第14—18 個梯階參數變化平均值如表1 所示.在3 個單點突變體中,突變所在的及相鄰N 端梯階Tilt 值增加(a′bc的第14—15 個梯階,ab′c的第15—16 個梯階,abc′的第16—17 個梯階),增加分別為6.67°(a′bc)、5.77°(ab′c)、7.82°(abc′)(圖4(a)).在相同區域中Twist 的絕對值變大(圖4(b)),最大變化量分別為 —8.34°(a′bc)、—12.96°(ab′c)、—14.28°(abc′).雙點突變體中,a′b′c中Tilt 值在第15—16 步變大(8.32°、6.21°),而Twist 值在第14—17 步均有增大,最大增量—13.77°,包括了兩個單鏈突變位點.與之類似地,ab′c′、a′bc′中Tilt 與Twist 變化區域包含組合的兩個突變.三點突變體a′b′c′雖然在最大變化量上大于雙點突變,但是在變化的區域上沒有影響更多的梯階.這一結果與面積參數變化相似,在相鄰與相隔三角形發生的突變會影響其變化區域的疊加程度.

圖4 類膠原多肽結構參數的變化Fig.4 Changes of structural parameters of CMP

膠原構象與參數之間的耦合程度可以通過梯階參數兩兩關聯得到的散點圖展現,擬合橢圓區域進行可視化.采用2D 置信區間擬合,取值95%擬合變化程度最大的Tilt 與Twist 參數,如果構成的橢圓與x軸形成的角度在(45±25)°,同時長短軸之比大于1.2 則認為這兩個參數具有強關聯性.abc及單點突變所在三角形的Twist-Tilt 的橢圓值如表1 所示.結果顯示,在abc中Twist-Tilt 參數之間顯示了良好的相關性(表1),表現為狹長的橢圓,長軸與x軸的夾角為38°,長短軸之比為3.06,這表明Tilt 與Twist 之間有較高的耦合度.引入突變后,Twist-Tilt 的分布更廣泛(圖5(a—c)),橢圓區域面積變大,并且往圖形右下角偏移,即Tilt 由負變正,Twist 絕對值增大.同時皮爾森相關系數分別為—0.80(abc)、—0.67(a′bc)、—0.45(ab′c)、—0.31(abc′),在大于100 個數據點時,相關系數絕對值大于0.3就表現為良好的相關性.Ala 突變側鏈增加一個 -CH3,膠原內部空間位阻增加(圖5(d—f)),Tilt 值由負轉正,耦合Twist 絕對值增大,導致三螺旋局部結構彎曲,與前文中發現的擺動幅度增大相一致.

圖5 單點突變體與abc 相應步驟Twist-Tilt 的散點圖Fig.5 Scatter plot of abc and corresponding Twist-Tilt step in single mutants

2.5 氫鍵與形變分數相關

為了描述膠原結構的整體變化,在第7—22 個梯階中利用公式(1),結合6 個梯階參數,計算不同突變體的形變分數(deformation score).結果顯示,與abc相比,突變會增大附近區域中各梯階的形變分數(圖4(c)).在單點突變中c鏈影響4 個梯階,其余兩個均只影響3 步梯階,形變分數平均值排序為abc′(69.88)＞ab′c(59.44)＞a′bc(47.24),表明在不同的鏈中引入的突變導致不同程度的結構形變.

Gly 作為膠原蛋白主鏈氫鍵氫供體,同時作為梯階參數三角形的頂點,氫鍵變化可能與梯階參數的變化有關.為了探索氫鍵能量變化(ΔEHB)和形變分數變化(ΔEDS)之間的相關性,選取第7—22個三角形內包含的氫鍵,計算膠原在模擬時間內的氫鍵平均能量與結構的平均形變分數,去除包含鹽橋變化的結構區間與相關氫鍵,整合7 種突變體的數據,擬合了每一個氫鍵ΔEHB和與之對應梯階ΔEDS之間的相關性(圖6).當ΔEHB為0 時,ΔEDS的數值也在0 附近,表現出結構的穩定.隨著突變位點的引入,氫鍵被破壞,ΔEHB的值增加.同時,膠原蛋白的整體結構被破壞,ΔEDS的值增加.在0.01 顯著性水平上,在數據點大于80 時當相關系數大于0.5 就表現為較好的相關性[48],擬合得到R2為0.76.結果表明,突變不僅破壞了局部的氫鍵,而且導致了膠原三螺旋的形變.

圖6 突變體氫鍵能量變化與對應區域形變分數的相關性Fig.6 The correlation between the hydrogen bond energy change of the mutant and the deformation score of the corresponding region

3 討 論

本文通過在abc異三聚體3 條鏈中引入Gly-Ala 突變,利用DSC 實驗測定了突變體熱穩定性,采集了分子動力學模擬軌跡中的結構信息,表征突變前后的變化.結果顯示,突變引入后熱穩定性降低,單點突變降低15℃,雙點及三點突變體無明顯焓變.分子動力學模擬的結果表明,Gly-Ala 突變的鄰近區域發生了結構的變化,包括突變所在Cα 三角形的Gly-A1邊長與相鄰C 端Cα 三角形的A1-A2邊長顯著增加;隨著突變個數的增加,Cα 三角形的最大面積增量呈上升趨勢,增量排序為三點突變(4.82 ?2)＞雙點突變(3.67 ?2)＞單點突變(1.99 ?2),這表明面積的變化具有一定的疊加性;同時在梯階參數中,突變所在區域彎曲度增加,Twist-Tilt 分布范圍變大,Tilt 值增量范圍為2.01°～9.11°,Twist 值減量范圍為8.33°～15.61°;突變位點附近1—3 個氫鍵受到破壞.Ala 突變不僅破壞了膠原的局部結構,而且影響了膠原分子的整體運動模式,擺動角度隨著突變的引入增加10°以上.擺動方向在不同的突變中呈現不同的趨勢,例如:ab′c突變體擺動方向呈現出與原序列類似的隨機分布,而a′bc突變體則出現了特定方向的傾向性;突變體形變分數和氫鍵能量與原序列相比有著顯著增加,兩者的變化具有高相關性.表明突變導致三螺旋局部解折疊,熱穩定性下降及焓變降低,同時局部結構的破壞會導致膠原分子整體形狀與運動狀態的改變.

膠原蛋白G-X-Y 重復序列中的Gly 被更大的氨基酸替代會導致各種表型的成骨不全癥,大多數Gly→Ala 的突變是溫和且不致命的[7,9].天然膠原中OI 突變的不穩定性在短肽模型中會被放大,這可能是由于類膠原短肽中更短的序列和更高的亞氨基含量.在之前的研究中,將Gly-Ala 突變引入(GPO)10同源三聚體后進行分子動力學模擬,結果顯示,突變后整體結構擺動幅度增加,平均增量為2°[47].盡管該模型可以模擬膠原蛋白中Gly 突變,但它們不能準確地解釋在天然異源三聚體突變中發現的結構破壞.本研究中使用的abc異三聚體模型相較于傳統的高脯氨酸含量膠原序列柔性更高,模擬中原序列的擺動角度為30°,突變體的擺動角度的增量均在10°以上.原纖維中的研究發現,Gly 位置的突變會使分子彎曲,突變分子與正常分子共聚時可能會導致原纖維的形成延遲,影響纖維形貌[49-50],成骨不全動物模型中常出現形貌異常的原纖維[51-52].由此推測,點突變導致的三螺旋曲度變化,除了可以降低膠原蛋白的熱穩定性,還可能影響膠原纖維的形成,從而影響其力學性質、纖維礦化、骨骼形成等與成骨不全癥相關的生理病理過程.

本文將突變引入不同的3 條鏈,結果表明不同鏈上Ala 突變對結構破壞存在如下差異: 在b鏈與c鏈中出現更嚴重的氫鍵破壞,最大ΔEHB為1.15 kcal·mol—1;3 種單點突變體呈現不同的擺動方向,a′bc突變體擺動方向相較于ab′c、abc′傾向性更為明顯;Cα 三角形面積變化中,a′bc突變體只有1 個三角形的增量超過1 ?2,而ab′c與abc′突變體中均有2 個.在不同的膠原主體序列中也發現了類似的趨勢,肖建喜等[53-54]在包含天然膠原序列的同源三聚體中引入Ala 突變,NMR 結果顯示在不同鏈上的Ala 對鏈間氫鍵的破壞出現區別,Hartgerink 等利用異三聚體模型AAB 也觀察到了相似的現象[31-32].這可能是因為膠原3 條鏈中突變位點所處化學環境存在差異,相同突變會有著不同的影響效果.本文結合實驗與計算方法,解析了Gly→Ala 突變對臨近區域和整體運動模式的影響,研究了OI 對膠原結構在生物物理方面的作用,為進一步揭示成骨不全癥等相關膠原疾病的致病機理打下了理論基礎.