酒泉市豬圓環病毒2型和3型的流行病學監測和分析

張 溪,南金魚,張翠花,張若玉,王新強

(酒泉市畜牧獸醫總站,甘肅 酒泉 735000)

豬圓環病毒(PCV)是以免疫抑制為主要特征的病毒性傳染病,臨床表現較為復雜,可嚴重侵害性免疫器官,導致機體免疫系統免疫的高度抑制,使疫苗免疫失效,機體免疫力減弱或消失,目前已確認PCV有4種基因型PCV1、PCV2、PCV3、PCV4。

其中PCV2和PCV3可引起斷奶仔豬的多系統衰竭綜合征、皮炎腎病綜合征、母豬的繁殖障礙、仔豬的先天性震顫以等一系列疾病給養殖戶造成巨大經濟損失。為摸清我市PCV2和PCV3流行情況,筆者采用熒光RT-PCR的方法對酒泉市2023年轄區內采集的豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結、糞便、血清等樣品進行了PCV1、PCV2核酸檢測,并對檢測結果進行流行病學分析,為疫病的預警和防控提供科學依據。

1 調查豬圓環病毒2型和3型材料與方法

1.1 調查豬圓環病毒樣品來源

在轄區內隨機抽取19個規?；B殖場、38個散養戶、4家屠宰場共采集豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結等組織樣品220份、糞便樣品250份、血清樣品230份,共650份樣品,其中肅州區、金塔縣、玉門市、瓜州縣、敦煌市各130份。

1.2 調查豬圓環病毒的主要試劑

采購青島立見生物科技有限公司豬圓環病毒2型和3型雙重熒光PCR檢測試劑盒和DNA/RNA病毒基因提取試劑盒。

1.3 調查豬圓環病毒主要儀器

德國ABI Applied Biosystems公司型號為Step One的熒光PCR檢測儀。

1.4 調查豬圓環病毒的樣品處理

1.4.1 對豬圓環病毒血清樣品的處理 用12000r/min的高速冷凍離心機,將0.5 mL血清,離心3 min,并取上清液200 μL。

1.4.2 對豬圓環病毒組織樣品的處理 將豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結等組織剪下黃豆大小的體積,并加入5倍約1～2 mL生理鹽水,用組織研磨器制成組織勻漿液,取0.5 mL以上液體,用12 000 r/min的高速冷凍離心機,離心3 min,并取上清液200μL。

1.4.3 對豬圓環病毒糞便處處理 取體積約黃豆大小的糞便。加入5倍約1～2 mL生理鹽水,充分混勻后,取0.5 mL以上液體,用12 000r/min的高速冷凍離心機,離心3 min,并取上清液200 μL。

1.5 RT-PCR檢測

1.5.1 對豬圓環病毒樣品的提取與擴增 DNA/RNA病毒基因提取試劑盒說明書依次提取出650份待檢樣品DNA,并按照PCV2和PCV3雙重熒光PCR檢測試劑盒說明書配制擴增試劑,在 Step One型熒光PCR儀上按照說明說要求設定具體的反應條件,PCV2在FAM通道下收集熒光信號,PCV3在VIC通道下收集熒光信號。

1.5.2 對豬圓環病毒檢測結果的判定 分別在FAM和VIC 信號通道下,每份樣品的擴增結果有典型的擴增曲線且Ct值≤38時可判定為PCV2或PCV3核酸陽性,Ct值>40或無Ct值時可判定為PCV2或PCV3核酸陰性;當樣品38

2 對豬圓環病毒的檢測結果

2.1 對豬圓環病毒樣品的熒光PCR檢測

對650份樣品進行PCV2和PCV3雙重熒光PCR核酸檢測,共檢測出PCV2核酸陽性樣品101份(擴增圖1～2),陽性率為15.54%, 檢測出PCV3核酸陽性樣品37份(擴增圖3～4), 陽性率為5.69%。

圖1 PCV2 RT-PCR檢測擴增圖圖2 PCV2 RT-PCR檢測擴增圖

圖3 PCV3 RT-PCR檢測擴增圖圖4 PCV3 RT-PCR檢測擴增圖

2.2 不同區域的PCV2和PCV3流行特點分析

對不同區域的650份樣品PCV2和PCV3的檢測結果進行分析,結果如表1所示,PCV2和PCV3總體陽性率感染為21.23%,其中玉門市陽性率最高為28.46%;其次是肅州區23.08%;金塔縣22.31%;瓜州縣和敦煌市均為16.15%,表明PCV2和PCV3在酒泉市的5個農業縣均有發生,但感染情況在不同區域差異較大。根據檢測結果所示,PCV2的陽性率感染為15.54%,高于PCV3的陽性感染率5.69%,表明PCV2在酒泉地區流行更為普遍,PCV2的陽性感染率玉門市最高20%;金塔縣次之,為18.46%;肅州區16.15%;敦煌市12.31%;瓜州縣10.77%。PCV3的陽性率玉門市最高8.46%;肅州區次之,為6.92%;瓜州縣5.38%;敦煌市和金塔縣都為3.85%。

表1 不同區域PCV2、PCV3的檢測結果

2.3 不同養殖規模的PCV2和PCV3流行特點分析

對不同養殖規模的650份樣品PCV2和PCV3的檢測結果進行分析,結果如表2所示,在不同養殖規模下的PCV2和PCV3總體陽性率存在較大差異,散養戶最高,達31.43%;規模場次之,為20.59%;屠宰場為2%。PCV2的陽性感染率差距也較大,散養戶為24.29%;規模場為14.12%;屠宰場2%。PCV3的陽性感染率差距較小,散養戶為7.14%;規模場為6.47%;屠宰場為0。表明不同飼養方式PCV2和PCV3陽性率的影響較大,散養戶標準化程度低,飼養管理粗放,防疫不達標,消毒不徹底,其陽性感染率較高。

表2 不同養殖規模的PCV2、PCV3的檢測結果

2.4 不同生長階段的PCV2和PCV3流行特點分析

對不同生長階段的650份樣品PCV2和PCV3的檢測結果進行分析,結果如表3所示,保育豬的陽性率最高33%;育肥豬19.23%;仔豬18.33%母豬15%;種公豬10%。PCV2和PCV3在不同生長階段的陽性分布排序與總體排序一致。表明豬群在不同生長階段對PCV2和PCV3的易感性存在差異,保育豬更容易感染PCV2和PCV3。

3 豬圓環病毒對酒泉市的危害程度

根據檢測結果表明PCV在酒泉市已成為多發性疾病,其中PCV2比PCV3的感染更常見。通過對不同區域、不同養殖規模、不同生長階段的19個規?；B殖場、38個散養戶、4家屠宰場共采集豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結等組織樣品220份、糞便樣品250份、血清樣品230份,進行PCV2和PCV3核酸檢測,共檢出陽性樣品138份,陽性率為21.23%,陽性場戶32個,PCV2的陽性率感染為15.54%,PCV3的陽性感染率為5.69%,表明PCV2的流行比PCV3更普遍、陽性感染率更高,但在不同區域、不同規模豬場的危害程度和流行情況存在一定的差異。規模養殖場的總體陽性感染率為20.59%,散養戶為31.43%,表明部分散養戶飼養管理情況水平低對豬病的預防控制能力較弱,大多數規模場制定了疫苗免疫規程序并能按程序開展免疫工作,且養殖場的建設標準化程度高,管理科學,對豬病的預防控制能力較強。流行病學調查期間,發現PCV2和PCV3的感染,以保育豬(斷乳至60～75日齡)最易感,斷奶應激可能是重要的誘導因素,可引發斷奶仔豬衰竭綜合征,具體表現為斷奶之后的小豬出現持續性、漸進式的消瘦,發育成長慢,皮毛粗亂,有時候會有咳嗽、喘氣等癥狀。體表還通常伴有淋巴結腫大,特別是腹股溝的淋巴結,少數會出現腹瀉。

該病在臨床上無特效藥物治療,發病后可使用廣譜抗菌藥物,減少并發感染,降低死亡率,及時開展臨床監測和實驗室檢測是防控該病的重要環節,通過加強飼養管理、全面均衡的營養、控制并發癥和繼發感染、及時注射疫苗等方法來降低疫病的爆發。