lncRNA GAS6-AS1在子宮內膜癌中的表達與臨床病理特征和預后因素分析

王杉杉,張圓圓

(河南大學第一附屬醫院婦科,河南開封475004)

子宮內膜癌是發生于子宮內膜上皮的婦科癌癥。近年來,隨著人們壓力和生活方式的改變,子宮內膜癌的發病率逐漸增加[1]。盡管子宮切除可治療子宮內膜癌,但子宮內膜癌術后復發和轉移仍影響患者預后[2-3]。尋找子宮內膜癌相關標志物預測疾病發展的臨床特征同時為今后治療提供可能的治療靶點值得關注。長鏈非編碼RNA生長阻滯特異性基因6反義RNA 1(long noncoding RNA growth arrest specific 6 antisense RNA 1,lncRNA GAS6-AS1)是一種長鏈非編碼RNA,在惡性腫瘤細胞侵襲、遷移中扮演關鍵作用[4-5]。ZHANG等[6]研究顯示lncRNA GAS6-AS1在胃癌組織中上調,且高表達GAS6-AS1可通過促進細胞進入S期來提升胃癌細胞增殖、遷移、侵襲能力。但目前lncRNA GAS6-AS1在子宮內膜癌的作用研究尚不知曉。本文擬探討子宮內膜癌患者癌組織中lncRNA GAS6-AS1表達變化,并分析其與子宮內膜癌臨床病理特征及患者預后的關系,期望日后可為評估子宮內膜癌預后提供有價值的參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2015年6月至2018年1月于河南大學第一附屬醫院行子宮切除的80例子宮內膜癌患者,患者年齡35～76歲,平均(54.18±11.67)歲;在子宮切除術中收集子宮內膜癌組織以及距離癌組織邊緣5 cm以上的癌旁組織,組織樣品獲取后迅速置于液氮冷凍、備用。收集的子宮內膜癌組織及癌旁組織均經病理實驗證實。納入標準:①均行手術治療,經病理檢查確診為子宮內膜癌;②術前未進行激素藥物治療、局部或全身化療、放療;③首次發病。排除標準:①患其他腫瘤、肝腎功能障礙;②合并急慢性炎癥、其他婦科疾病;③患全身感染性疾病、免疫系統疾病;④子宮、卵巢雙發癌,無法確定原發病灶。本研究通過河南大學第一附屬醫院倫理委員會批準。

1.2 檢測子宮內膜組織中lncRNA GAS6-AS1表達水平將獲得的組織放入研缽中研磨,加入TRIzol試劑(武漢科昊佳生物科技有限公司)裂解組織,倒入EP管中,加入等體積的氯仿振蕩混勻,然后離心(14 000 r/min,30 min),收集上層上清移入新的無RNA酶的EP管中,加入等體積的異丙醇然后離心(12 000 r/min,25 min),收集沉淀,加入1 mL的無水乙醇懸浮沉淀,然后離心(14 000 r/min,20 min),得到RNA,加入DEPC水在4 ℃溶解RNA。依據RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(南京賽泓瑞生物科技有限公司)說明書反轉錄得到cDNA。以cDNA為模板,采用7300型實時熒光定量PCR儀(美國ABI公司)對lncRNA GAS6-AS1及內GAPDH進行擴增反應。反應條件:95 ℃,3 min;95 ℃,30 s;59 ℃,30 s;72 ℃,30 s;40個循環。反應結束后收集數據,并對所得數據Ct值進行分析,用2-CT法計算lncRNA GAS6-AS1相對表達量。lncRNA GAS6-AS1、GAPDH引物由南京金斯瑞生物工程有限公司合成,引物設計見表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 隨訪從子宮內膜癌患者手術切除術后以電話或門診方式隨訪,隨訪內容包括婦科盆腔檢查、陰道B超、胸部X線檢查,必要時行CT或磁共振成像檢查。最長隨訪時間為5年,隨訪至2021年12月,記錄患者生存時間、總生存期(overall survival,OS),OS為開始治療到死亡或失訪的時間。預后不良包括患者死亡。80例子宮內膜癌患者,存在33例刪失數據。

1.4 治療方法Ⅱ期、Ⅲ期子宮內膜癌患者化療方案:(135～175 mg/m2)的紫杉醇(國藥準字:H20063787,悅康藥業集團股份有限公司)溶于500 mL生理鹽水中,靜脈滴入,d1;300 mg/m2的卡鉑(國藥準字:H10950273,云南植物藥業有限公司)溶于500 mL生理鹽水中,靜脈滴入,d2;21 d為一個療程,治療4個療程。

2 結 果

2.1 lncRNA GAS6-AS1在子宮內膜癌組織中的表達水平與癌旁組織相比,子宮內膜癌組織中lncRNA GAS6-AS1相對表達水平較高(P<0.001)。見表2。

表2 lncRNA GAS6-AS1在子宮內膜癌組織中的表達水平

2.2 lncRNA GAS6-AS1表達水平與患者臨床病理特征的關系手術病理分期參照2009年FIGO分期標準[7],Ⅰ期+Ⅱ期52例,Ⅲ期28例;浸潤深度≥1/2肌層33例,浸潤深度<1/2肌層47例;盆腔淋巴結轉移26例,無盆腔淋巴結轉移54例;組織學分級:G1+G2 56例,G3 24例;病理分型:激素依賴型44例,非激素依賴型36例。根據lncRNA GAS6-AS1平均值(2.76)為截斷值,將子宮內膜癌組織分為高表達組44例,低表達組36例,分析結果顯示浸潤深度≥1/2肌層、盆腔淋巴結轉移子宮內膜癌組織lncRNA GAS6-AS1表達水平高于浸潤深度<1/2肌層、無盆腔淋巴結轉移子宮內膜癌組織(P<0.05)。見表3。

表3 lncRNA GAS6-AS1表達與子宮內膜癌患者臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3 子宮內膜癌組織中lncRNA GAS6-AS1相對表達水平與預后的關系Kaplan-Meier生存曲線顯示,lncRNA GAS6-AS1低表達組5年累積總生存率為83.10%,平均生存期為(56.11±1.50)個月(95%CI:53.16～59.06),高表達組5年累積總生存率為60.00%,平均生存期為(47.44±2.58)個月(95%CI:42.38～52.50),差異有統計學意義(Log-rank=5.616,P=0.018)。見圖1。

圖1 子宮內膜癌患者5年隨訪期間Kaplan-Meier生存曲線

2.4 影響子宮內膜癌患者預后的危險因素分析以子宮內膜癌患者5年預后為因變量(預后不良=0,預后良好=1),將年齡(<60=0,≥60=1)、分化程度(高中分化=0,低分化=1)、FIGO分期(Ⅰ+Ⅱ=0,Ⅲ=1)、浸潤深度(<1/2肌層=0,≥1/2肌層=1)、盆腔淋巴結轉移(無=0,有=1)、lncRNA GAS6-AS1表達水平(低表達=0,高表達=1)作為自變量并賦值進行分析,單因素分析表明,浸潤深度、盆腔淋巴結轉移、lncRNA GAS6-AS1均是影響子宮內膜癌患者預后不良的危險因素。多因素分析表明,浸潤深度≥1/2肌層、lncRNA GAS6-AS1高表達是子宮內膜癌患者預后不良的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響子宮內膜癌患者預后的危險因素分析

3 討 論

子宮內膜癌是威脅女性生命的常見惡性腫瘤,其患者病死率僅次于卵巢癌和宮頸癌[8-9]。子宮內膜癌轉移途徑包括侵襲周圍正常組織或通過血管、神經及淋巴管侵襲遠處器官[10]。臨床上除了手術治療子宮內膜癌,還可用放療、化療等輔助治療策略,但晚期子宮內膜癌患者治療方案有限,導致預后較差。因此研究子宮內膜癌發展機制,對尋找新的治療策略、改善患者預后有重要意義。

lncRNA是一種新型非編碼RNA,在不同組織中均有表達,其在細胞周期、細胞凋亡及染色質重塑中發揮關鍵調節作用[11-12]。以往的研究顯示,lncRNA在惡性腫瘤的發生中起關鍵作用,可作為癌癥診斷、預后評估的生物標志物[13-14]。GAS6主要由腫瘤相關巨噬細胞和癌癥相關成纖維細胞產生,具有與維生素K相關的γ-羧基谷氨酸結構域,通過該結構域與包含磷脂酰絲氨酸的蛋白質相互作用。GAS6的這種功能可調節腫瘤細胞生殖過程、血管生成過程和免疫反應過程。研究顯示,在胰腺癌中GAS6表達水平降低會阻止腫瘤細胞發生上皮-間充質轉化并激活自然殺傷細胞,從而阻礙腫瘤細胞轉移[15]。GAS6-AS1是GAS6的反義方向轉錄。LAVASANI等[16]研究顯示,GAS6-AS1可通過激活GAS6而促進乳腺癌細胞的侵襲性。LEI等[17]研究顯示,GAS6-AS1在急性髓系白血病骨髓細胞中呈高表達,高表達GAS6-AS1可促進急性髓系白血病細胞遷移和侵襲,為治療急性髓系白血病提供了新的治療靶點。CHEN等[18]通過實時定量PCR檢測結直腸癌組織和細胞系中GAS6-AS1表達水平,結果顯示,GAS6-AS1在結直腸癌組織和細胞系中的表達水平均上調,并與結直腸癌患者的不良預后呈正相關,另外,GAS6-AS1可通過ceRNA網絡和FUS依賴性方式促進TRIM14介導的結直腸癌細胞增殖、遷移、侵襲和上皮間質轉化,提示GAS6-AS1可作為結直腸癌新的生物標志物和治療靶點。本研究顯示子宮內膜癌組織中lncRNA GAS6-AS1表達水平顯著高于癌旁組織,且浸潤深度≥1/2肌層、盆腔淋巴結轉移的子宮內膜癌組織lncRNA GAS6-AS1表達水平高于浸潤深度<1/2肌層、無盆腔淋巴結轉移的子宮內膜癌組織,提示lncRNA GAS6-AS1參與子宮內膜癌的發生、發展。本研究Kaplan-Meier生存曲線顯示,lncRNA GAS6-AS1低表達組子宮內膜癌患者5年累積總生存率高于lncRNA GAS6-AS1高表達組,提示lncRNA GAS6-AS1可能影響子宮內膜癌預后,本研究結果與CHEN等[18]研究報道類似,表明lncRNA GAS6-AS1高表達可能對子宮內膜癌預后不良的預測有貢獻。推測lncRNA GAS6-AS1影響子宮內膜癌患者預后的可能原因是lncRNA GAS6-AS1可調控子宮內膜癌遷移和侵襲。本研究還發現lncRNA GAS6-AS1高表達是子宮內膜癌患者預后不良的獨立危險因素,提示lncRNA GAS6-AS1可能是子宮內膜癌預后不良發生的影響因素。

綜上所述,子宮內膜癌組織中lncRNA GAS6-AS1呈高表達,與子宮內膜癌盆腔淋巴結轉移、浸潤深度密切相關,lncRNA GAS6-AS1高表達與子宮內膜癌預后不良有關,有望成為預測子宮內膜癌預后不良的生物學指標。但本研究也有不足,納入樣本量有限,研究中心單一,后續仍需增加樣本量驗證lncRNA GAS6-AS1與子宮內膜癌的關系,并深入探討lncRNA GAS6-AS1與子宮內膜癌發生機制及預后不良機制的關系。