DHA單?；视王バ驮逵蛯π∈蠹毙跃凭愿螕p傷的保護作用

溫揚敏, 田 力, 王小斐, 魏登梟, 何勇錦,4

(泉州醫學高等?？茖W?；A醫學部1,泉州 362000) (中國農業大學食品科學與營養工程學院2,北京 100083) (福建師范大學生命科學學院3,福州 350117) (福建師范大學工業微生物教育部工程研究中心4,福州 350117)

乙醇在肝細胞中經乙醇脫氫酶代謝產生的乙醛不僅直接影響蛋白質的功能和 DNA損傷修復,還能誘導氧化應激、脂質蓄積和炎癥反應而引起不同程度的肝損傷[1]。此外,長期或一次性大量飲酒誘發的腸道菌群變化,與酒精性肝病的發展以及肝硬化密切相關[2]。一方面,酒精使腸道黏膜通透性增強,失去屏障功能;另一方面,酒精導致腸道內微生物菌群失調,使條件致病菌過度增殖,其產生的腸源性內毒素脂多糖(LPS)通過門靜脈向肝轉移,介導炎癥反應,從而導致肝損傷[3]。酒精性肝病(ALD)是慢性肝病死亡最主要的原因之一,近年,飲酒人群比例增多,酒精性肝病發病人數增加,每年超過20萬人死于酒精誘導的肝癌[4]。

二十二碳六烯酸(DHA)具有免疫調節和抗炎的特性,在非酒精性脂肪肝和肝癌等多種肝臟疾病模型中發揮保護作用[5,6],是一種有益人體健康的重要ω3 多不飽和脂肪酸(PUFA),但由于人體必需脂肪酸α-亞麻酸內源性轉化為DHA的效率很低,通常需要食用富含DHA的食品如魚油、藻油進行補充[7]。當前,市場所銷售的藻油DHA產品主要以DHA三?；视王バ?TAG)和DHA乙酯型(EE)為主[8]。值得注意的是,最近研究發現,與DHA三?；视王バ秃虳HA乙酯型相比,DHA單?；视王バ?MAG)更有利于機體對DHA消化吸收和生物利用率[9]。但關于DHA單?；视王バ驮逵蛯LD的保護作用鮮有報道。

因此,本研究制備富含DHA單?；视王?DHA-MAG)型藻油,并以市場銷售的DHA三?；视王?DHA-TAG)型藻油和DHA乙酯(DHA-EE)型藻油為陽性對照,研究DHA-MAG對小鼠急性酒精肝損傷的肝功能指標、脂類代謝、TLR4/NF-κB通路關鍵基因表達和腸道細菌的影響,以期為防治急性酒精性肝損傷開發更適合的DHA營養補充劑提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

昆明種雄性小鼠:5周齡,體質量(22±2)g,SPF級,許可證號SCXK(浙)2020-002。DHA三?；视王?DHA、DPA、棕櫚酸質量分數分別為50%、15.5%、25%)、DHA乙酯(DHA、DPA、油酸質量分數分別為64%、16%、15%);小鼠糞便DNA提取試劑盒、反轉錄試劑盒、RNA提取試劑盒;HRP標記羊抗兔IgG、Toll樣受體 4(TLR4)抗體、核轉錄因子κB (NF-κB)抗體、髓樣分化因子(MyD88)抗體、β肌動蛋白(β-actin)抗體。

1.2 儀器與設備

KD-2258病理切片機,1645050電泳儀,BX53顯微鏡,6100 Chemi Scope Touch熒光發光成像儀,NanoDrop One微量紫外-可見光分光光度計,ABI QuantStudio 3熒光定量PCR儀,GenoSens 2100凝膠成像儀,SPECTRO Star全波長酶標儀,TEK5000P全自動血液分析儀,SCION 436-GC氣相色譜儀。

1.3 方法

1.3.1 DHA-MAG的制備

稱取1 kg裂殖壺藻藻油、3 kg無水乙醇、100 mL脂肪酶(CAL-A)和200 mL蒸餾水,置于15 L酶攪拌式反應器中,在35 ℃條件下反應72 h,用體積比為1∶9的無水乙醇-正己烷萃取3次,取乙醇相樣品,旋蒸蒸發去除有機溶劑,獲得富含DHA單?；视王バ驮逵蜆悠?DHA、DPA棕櫚酸質量分數分別為78%、16%、5%)[10]。

1.3.2 動物實驗

研究發現,以甘油三酯型、甘油酯型(單酰甘油酯和二酯酰甘油酯)、乙酯型等不同形態存在的多不飽和脂肪酸生物利用率存在差異,其中單酰甘油酯型多不飽和脂肪酸的生物利用率最高[8,9]。目前市場所銷售的藻油DHA產品主要以DHA-TAG型和DHA-EE型為主。因此,本研究選擇DHA-TAG型和DHA-EE型藻油為陽性對照,研究DHA-MAG型藻油對小鼠急性酒精肝損傷的影響。將50只小鼠于溫度(25±2)℃,濕度40% ～ 60%,12 h晝夜交替,自由飲水適應性飼養1周后,隨機分成5組(每組10只):正常組、模型組、實驗組(DHA-MAG)、陽性對照組(DHA-TAG和DHA-EE)。DHA-MAG、DHA-TAG和DHA-EE組小鼠按照DHA濃度為200 mg/kg的劑量每天分別灌胃DHA-MAG型藻油、DHA-TAG型藻油和DHA-EE型藻油,而正常組和模型組小鼠每天灌胃等體積生理鹽水。連續灌胃15 d,末次給藥后小鼠禁食4 h,除正常組小鼠灌胃等體積生理鹽水外,其他實驗組小鼠灌胃15 mg/kg的體積分數為50%乙醇溶液。經18 h處理后,先稱體重,取小鼠糞便,然后乙醚麻醉小鼠,摘眼球取血,最后脫臼處死小鼠,剪取肝臟左上葉用10%甲醛固定,其余肝臟組織-80 ℃冰箱保存備用。動物實驗獲泉州醫學高等?？茖W校動物倫理委員會批準(審批號:2020014)。

1.3.3 血液指標檢測

丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)采用全自動血液分析儀進行測定。

1.3.4 肝臟脂肪酸組成測定

取肝臟組織(約50 mg),加入液氮,充分研磨;隨后,加10 mL溶液(V氯仿∶V甲醇∶V生理鹽水=2∶1∶1)萃取3次,離心收集氯仿層樣品,經分子蒸餾去除有機溶劑,稱重獲得粗油脂。將肝臟粗油脂甲酯化后,利用氣相色譜儀分析脂肪酸組成。

1.3.5 肝臟組織形態學分析

取甲醛固定的肝臟組織,經石蠟切片和HE 染色,顯微鏡下觀察肝組織形態。

1.3.6 肝臟組織基因mRNA表達檢測

提取肝組織總RNA,經逆轉錄成cDNA。以β-actin為內參基因,采用RT-qPCR測定TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA相對表達量。PCR反應條件:95 ℃ 5 min,95 ℃ 30 s、65 ℃ 30 s、72 ℃ 45 s,共40個循環,采用2-ΔΔCt法對基因的表達進行數據分析。實驗設置3個重復,基因引物序列見表1。

表1 基因引物序列

1.3.7 肝臟組織基因蛋白表達檢測

采用RIPA裂解法提取肝組織總蛋白,用BCA蛋白濃度試劑盒測定蛋白濃度,經10%的SDS-PAGE電泳分離后,電轉至0.45 μm的 PVDF膜,經質量分數為5%脫脂奶粉封閉2 h 后,分別加入一抗MyD88(1∶1 000)、NF-κB p65(1∶1 000)、TLR4(1∶1 000)和β-actin(1∶2 500),4 ℃過夜孵育,經洗膜緩沖液(TBST)洗膜15 min后,加入二抗(1∶2 000),于37 ℃孵育2 h,加入化學發光檢測試劑。上機顯色,以β-actin為內參計算相對表達量。

1.3.8 糞便腸道菌分析

各實驗組隨機取6個小鼠的糞便樣品,根據試劑盒說明書提取DNA,將濃度及純度檢測合格的 DNA 樣品送杭州聯川生物公司,對 16S rDNA V3～V4 區域進行高通量測序。使用擴增序列變體(ASVs)的概念構建操作分類單位(OUTs)?；贠UTs結果使用 SILVA(Release 132)以及 NT-16S 數據庫做物種分類及后續分析。

1.3.9 數據處理與統計分析

2 結果與分析

2.1 DHA-MAG對ALD小鼠體重及肝功能酶活性的影響

小鼠血清ALT、AST 和ALP活性如表2所示,各實驗組小鼠體重無顯著差異。但是,模型組小鼠血清肝功能酶活性與正常組小鼠之間均存在顯著差異(P<0.05),與正常組比較, 模型組小鼠的ALT、AST和ALP活性分別增加了112.70%、98.50%、51.21%,表明急性酒精性肝損傷小鼠建模成功。實驗組和陽性對照組小鼠ALT、AST和ALP活性與模型組相比均有不同程度下降,實驗組小鼠ALT、AST和ALP活性與模型組之間均存在顯著差異(P<0.05),陽性對照組小鼠AST與模型組之間存在顯著差異(P<0.05),而ALT和ALP與模型組之間不存在顯著差異(P>0.05)。與陽性對組比較,實驗組小鼠ALT、AST和ALP活性均有所下降,其中ALT活性差異顯著(P<0.05)。表明DHA-MAG能改善小鼠酒精性肝損傷的肝功能。

表2 小鼠體重及血清ALT、AST 和ALP活性(n=10,ˉx±SD)

2.2 DHA-MAG對ALD小鼠血清脂質水平的影響

脂質代謝異常是酒精性肝損傷發生的重要因素之一,酒精引起脂質代謝紊亂表現為血清脂質含量的變化[11]。小鼠血清TG、TC、HDL和LDL濃度如圖1所示,從圖1可以看出,模型組小鼠血清TG、TC、HDL和LDL等脂類代謝指數與正常組之間存在顯著差異(P<0.05),其中TG、TC和LDL水平顯著增加,而HDL水平顯著降低。實驗組小鼠TG、TC、HDL和LDL水平均與模型組差異顯著(P<0.05),其中TG、TC、和LDL水平比模型組分別降低了13.99%、18.45%、19.44%,而HDL水平比模型組增加了14.57%。與模型組比較,陽性對照組小鼠TG、TC和LDL水平均有所降低,其中TG和TC水平差異顯著(P<0. 05),而HDL水平顯著增加(P<0.05)。與陽性對照組比較,模型組小鼠血清TG、TC、HDL和LDL水平均更接近正常組,其中實驗組TG水平與DHA-TAG組差異顯著(P<0.05),實驗組HDL水平與DHA-EE組差異顯著(P<0.05)。表明DHA-MAG對酒精性肝損傷小鼠具有降脂保肝作用。

圖1 小鼠血清TG、TC、HDL和LDL濃度(n=10,ˉx±SD)

2.3 DHA-MAG對ALD小鼠肝臟脂肪酸組成的影響

DHA-MAG對ALD小鼠肝臟脂肪酸組成的影響見表3,各實驗組小鼠肝臟脂肪酸組成無顯著差異。模型組小鼠肝臟DHA含量比正常組減少。實驗組和陽性對照組小鼠DHA含量比模型組高,其中DHA-MAG處理組的小鼠肝臟DHA質量分數最高(11.58%)。

表3 小鼠肝臟脂肪酸質量分數(n=10,ˉx±SD)/%

2.4 DHA-MAG對ALD小鼠肝臟形態學影響

小鼠肝臟形態學如圖2所示,正常組小鼠肝小葉結構清晰完整,肝細胞索排列整齊,未發生明顯病理學改變。模型組小鼠肝細胞損傷嚴重,核固縮,細胞間界限不清楚,出現炎性細胞浸潤。與模型組比較,實驗組和陽性對照組小鼠肝組織病變均有所改善,局部病變不同程度減輕,肝組織受損程度減輕。顯示DHA-MAG改善了酒精誘導的小鼠肝組織損傷。

2.5 DHA-MAG對ALD小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因mRNA表達的影響

DHA對小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因mRNA表達的影響如圖3所示,模型組小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因mRNA相對表達量比正常組分別增加了127.42%、145.62%、114.69%,與正常組之間差異顯著(P<0. 05)。實驗組與陽性對照組小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因mRNA相對表達量與比模型比較均顯著下降(P<0.05)。與陽性對照組比較,實驗組小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因mRNA相對表達量更接近正常組。實驗組小鼠TLR4基因mRNA相對表達量與DHA-TAG組比較差異顯著(P<0.05),而實驗組小鼠MyD88和NF-κB基因mRNA相對表達量與DHA-EE組比較差異顯著(P<0.05)

圖2 小鼠肝臟形態學(HE染色,×200)

。

圖3 DHA對小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因mRNA表達的影響(n=3,ˉx±SD)

2.6 DHA-MAG對ALD小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因蛋白表達的影響

DHA對小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因蛋白表達的影響如圖4所示。模型組小鼠TLR4、MyD88和NF-κB的蛋白相對表達量均比正常組顯著增加(P<0. 05)。與模型組比較,實驗組與陽性對照組小鼠TLR4、MyD88和NF-κB的蛋白相對表達量均顯著降低(P<0. 05)。與陽性對照組比較,實驗組小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因蛋白相對表達量更接近正常組,其中TLR4和NF-κB基因蛋白相對表達量與DHA-EE組比較差異顯著(P<0. 05)。表明DHA-MAG能抑制酒精肝損傷小鼠肝組織TLR4/NF-κB信號通路相關基因的表達。

圖4 DHA對小鼠TLR4、MyD88和NF-κB基因蛋白表達的影響

2.7 DHA-MAG對ALD小鼠腸道細菌的影響

2.7.1 DHA-MAG對ALD小鼠腸道細菌多樣性的影響Beta多樣性指不同環境群落之間的物種差異性。主成分分析(PCA)能反應不同環境群落beta多樣性差異,PCA圖中的距離越接近表明物種組成越相似,群落之間的物種差異性越小。從圖5d可以看出,模型組小鼠腸道細菌beta多樣性與正常小鼠差異顯著(P=0.003,R=1.000 0),表明酒精導致小鼠腸道菌群組成結構發生顯著改變。與模型組比較,DHA-MAG、DHA-TAG和DHA-EE處理組小鼠Beta多樣性均差異顯著(R=0.916 7,P=0.002;R=0.779 6,P=0.004;R=0.529 6,P=0.003;),表明DHA-MAG能改善酒精引起的腸道菌群改變。

DHA對小鼠腸道細菌多樣性的影響如圖5所示,Alpha多樣性主要通過Shannon、Simpson、Chao等指數反映特定環境物種豐富度、均勻度和測序深度。與正常組比較,模型組小鼠Shannon指數和Chao指數顯著減小(P<0.05),而Simpson指數顯著增大(P<0.05),表明酒精引起小鼠腸道細菌alpha多樣性降低。與模型組比較,實驗組和陽性對照組小鼠Shannon指數和Chao指數均顯著增大(P<0.05),而Simpson指數顯著減小(P<0.05),表明DHA-MAG能影響酒精肝損傷小鼠腸道細菌物種豐富度和均勻度。

2.7.2 DHA-MAG對ALD小鼠腸道細菌物種相對豐度的影響

為分析DHA-MAG對ALD小鼠腸道細菌群落組成的影響,分別統計門水平和科水平腸道細菌的物種相對豐度,DHA對小鼠腸道細菌相對豐度的影響如圖6所示。圖6的結果顯示,各組小鼠在門水平的優勢菌為厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes),其相對豐度超過80%(圖6a)。與正常組比較,模型組小鼠厚壁菌門相對豐度顯著減少(P<0.05),而擬桿菌門相對豐度顯著增加(P<0.05)。與模型組比較,實驗組和陽性對照組小鼠厚壁菌門相對豐度增加,而擬桿菌門相對豐度降低。

在科水平,各組小鼠的優勢菌包括Muribaculaceae科、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、理研菌科(Rikenellaceae)、乳桿菌科(Lactobacillaceae)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae )等(圖6b)。與正常組比較,模型組小鼠腸道Muribaculaceae科、乳桿菌科、瘤胃菌科等相對豐度比模型組顯著減少(P<0.05),而螺桿菌科(Helicobacteraceae)和丹毒絲菌科(Erysipelotrichaceae)等相對豐度比模型組顯著增加(P<0.05)。與模型組比較,實驗組和陽性對照組小鼠Muribaculaceae科和乳桿菌科相對豐度顯著增加(P<0.05),而螺桿菌科相對豐度顯著減少(P<0.05)。結果還顯示,實驗組和陽性對照組小鼠腸道細菌在門水平和科水平比例和分布均趨于正常水平,其中實驗組小鼠細菌分布比陽性對照組更接近正常組。這些結果可表明,DHA-MAG能一定程度改善酒精導致的小鼠腸道菌群紊亂。

圖5 DHA對小鼠腸道細菌多樣性的影響

圖6 DHA對小鼠腸道細菌相對豐度的影響

3 討論

肝臟是酒精代謝的主要場所,過量的酒精攝入導致肝組織損傷和肝細胞膜通透性增加,釋放ALT、AST和ALP等進入血液,使血液中的ALT、AST和ALP顯著升高,其中血清ALT和AST 是肝細胞損傷時最敏感的指標[12]。董堅等[13]證實DHA能顯著降低非酒精性脂肪肝變性細胞ALT和AST含量。陶濤等[5]發現對乙酰氨基酚能誘導肝損傷小鼠血清ALT水平顯著增加,而DHA則能顯著降低小鼠血清ALT水平。本實驗結果顯示,酒精會引起小鼠血清ALT、AST和ALP顯著增加,說明小鼠肝組織受到了損傷。而不同類型藻油DHA處理的小鼠血清ALT、AST和ALP均顯著下降,且以DHA-MAG的處理組最接近正常水平。實驗結果表明DHA-MAG能改善酒精肝損傷小鼠肝功能,且效果比DHA-TAG和DHA-EE好,其原因可能與不同形態DHA的生物利用率有關。在自然界,多不飽和脂肪酸以甘油三酯型、甘油酯型(單酰甘油酯和二酯酰甘油酯)、乙酯型和卵磷脂型等形態存在,不同形態存在的多不飽和脂肪酸生物利用率存在差異,其中以單酰甘油酯型多不飽和脂肪酸的生物利用率最高[14]。本實驗結果顯示,DHA-MAG處理的小鼠肝臟DHA含量最高,而DHA-EE處理的小鼠肝臟DHA含量最低。因此,關于DHA生物利用率與保肝作用關系有待進一步研究。

肝臟是脂質代謝的重要器官,在甘油三酯、膽固醇等脂質物質的生物合成以及脂質的轉化與排泄等過程中發揮重要作用。酒精引起肝細胞功能受損,導致肝細胞線粒體脂肪酸β氧化障礙,血脂、脂蛋白及載脂蛋白的合成、轉運、代謝等過程紊亂,使脂肪在血液和肝細胞內沉積,導致血液TG、TC和LDL的明顯升高,而血液HDL顯著降低[15]。ω-3多不飽和脂肪酸既能通過調節脂肪生成相關基因的表達促進脂肪分解,抑制脂肪合成[16];還可抑制極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白的合成及受體的活性,增加高密度脂蛋白的水平及受體的活性,進而加速膽固醇排泄[17]。詹麒平等[18]研究顯示,高脂高糖飲食導致小鼠血清TC、TG和LDL水平升高而HDL水平下降,高含量DHA /EPA甘油三酯能降低高脂高糖飲食小鼠血清TC、TG和LDL水平,增加血清HDL水平,有效改善高脂血癥小鼠的血脂水平。本實驗結果顯示,DHA-MAG能顯著降低酒精肝損傷小鼠血清TC、TG和LDL含量,而顯著增加血清HDL含量,且DHA-MAG處理小鼠TG、TC、HDL和LDL等指標比DHA-TAG和DHA-EE處理的小鼠更接近正常水平。表明DHA-MAG對酒精性肝損傷小鼠有益于降脂保肝,且效果優于DHA-TAG和DHA-EE。

酒精誘導的腸道菌群失調是誘發ALD的主要機制之一。肝臟具有肝動脈和門靜脈雙重血供系統,腸道與肝臟通過門靜脈系統及腸系膜淋巴結系統形成密切關系[19]。正常情況下,腸道黏膜屏障只允許少量的細菌及產物通過門靜脈進入肝臟,并被肝臟快速清除。長期大量的酒精攝入引起腸道菌群紊亂,進而破壞腸道黏膜屏障,導致大量的細菌及其代謝產物通過門靜脈進入肝臟,介導炎癥反應從而導致肝損傷[20]。酗酒患者腸道擬桿菌門相對豐度比正常人高,酒精喂養小鼠的腸道菌群中擬桿菌門和疣微菌門數量顯著增加,而厚壁菌門相對豐度減少,導致厚壁菌門和擬桿菌門的比值降低[21]。Yi等[22]研究顯示,酒精肝損傷小鼠Muribaculaceae科和毛螺菌科的相對豐度比正常小鼠顯著減少,而螺桿菌科和丹毒絲菌科的相對豐度比正常小鼠顯著增加。Bajaj等[23]發現,酒精引起腸道丹毒絲菌科的相對豐度顯著增加,而毛螺菌科和瘤胃菌科的相對豐度顯著減少。本研究結果顯示,酒精引起小鼠腸道細菌多樣性減小,厚壁菌門的相對豐度降低而擬桿菌門相對豐度增加,Muribaculaceae科、乳桿菌科、瘤胃菌科等相對豐度減少,而螺桿菌科和丹毒絲菌科相對豐度增加,表明腸道菌群紊亂是酒精性肝病的重要特征,以腸道菌群為靶點是防治酒精性肝病的一個重要手段[24]。

Yu等[25]研究顯示,DHA能改善碳青霉烯耐藥革蘭陰性桿菌(CRO)感染引起的小鼠腸道菌群紊亂,提高短鏈脂肪酸(SCFAs)濃度,調節脂肪酸代謝,改變膽汁酸譜。Hantsoo等[26]研究表明,DHA能調節由于童年逆境經歷(ACE)導致孕期腸道菌群紊亂,使腸道菌群趨于正常狀態。其他研究發現DHA能提高糞球菌屬(Coprococcus)、羅氏菌屬(Roseburia)、瘤胃菌屬(Rminococcusu)和梭桿菌屬(Clostridium)等產短鏈脂肪酸細菌[27],以及擬桿菌屬(Bacteroides)、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)和乳酸桿菌屬(Lactobacillus)等有益菌相對豐度[28]。本研究結果顯示,DHA-MAG處理的小鼠厚壁菌門相對豐度增加,擬桿菌門相對豐度降低,Muribaculaceae科和乳桿菌科等相對豐度增加,而螺桿菌科等相對豐度減少,顯示不同藻油DHA處理的小鼠腸道細菌在門水平和科水平比例和分布均趨于正常水平,其中DHA- MAG處理的小鼠細菌最接近正常組。表明DHA- MAG能使酒精肝損傷小鼠腸道細菌的群落結構趨于正常,改善酒精引起的腸道菌群紊亂。

酒精導致腸道內條件致病菌迅速繁殖并通過門靜脈進入肝臟,產生腸源性內毒素LPS。LPS可與肝臟庫普弗細胞的TLR4結合,通過與其偶聯的MyD88蛋白啟動下游信號免疫反應,激活NF-κB,導致腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素1β(IL-1β)和白細胞介素6(IL-6)等炎癥因子,趨化因子和活性氧增加,從而導致肝損傷,TLR4/NF-κB信號通路在ALD的發生和發展過程中具有重要作用[29]。沈云海等[30]研究多不飽和脂肪酸對大鼠酒精性脂肪肝炎性反應及肝纖維化的影響,結果顯示,ω-3多不飽和脂肪酸能顯著下調酒精性脂肪肝大鼠肝組織TLR4/NF-κB信號通路中TLR4、NF-κB、TNF-α、MCP-1和IL-1基因的mRNA水平,阻斷TLR4/NF-κB信號通路,抑制大鼠酒精性脂肪肝炎性反應及肝纖維化。張賽等[31]研究表明,ω-3多不飽和脂肪酸可通過調節TLR4/NF-κB信號通路改善梗阻性黃疸大鼠炎癥狀況,從而達到調控炎癥反應、保護肝臟的效果。其他研究發現,ω-3多不飽和脂肪酸對脂多糖引起的大鼠腦損傷、肺組織損傷的保護機制與調控TLR4/NF-κB信號通路有關[32]。本研究結果顯示,酒精導致小鼠TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA和蛋白相對表達量顯著增加,而DHA-MAG處理的小鼠TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA和蛋白相對表達量顯著降低,并趨于正常水平。顯示DHA-MAG能抑制酒精肝損傷小鼠肝組織TLR4/NF-κB信號通路,表明DHA-MAG對酒精性肝損傷的保護作用與調控TLR4/NF-κB信號通路有關。

4 結論

DHA-MAG能改善酒精肝損傷小鼠肝功能異常,緩解酒精引起的肝組織病理性改變,抑制酒精肝損傷小鼠肝組織TLR4/NF-κB通路,改善酒精引起的腸道菌群紊亂。實驗結果表明DHA-MAG可通過調控TLR4/NF-κB通路和調節腸道菌群緩解小鼠酒精性肝損傷,且其對急性酒精性肝損傷的保護效果優于DHA-TAG和DHA-EE。