江西地方雞禽白血病流行與凈化現狀

李海琴，張帆帆，林 翠，王思怡,，譚美芳，吳誠誠，唐維國，熊立根，段凱文，康昭風*

（1.江西省農業科學院畜牧獸醫研究所/畜禽綠色健康養殖江西省重點實驗室，江西南昌 330200；2.江西生物科學技術學院，江西南昌 330200）

禽白血?。ˋvian leukosis，AL) 是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV) 引起的以造血細胞惡性增生為主的多種腫瘤性傳染病的總稱，以在成年雞中產生淋巴樣腫瘤和產蛋量下降為主要特征，在全球各地均有發生[1]。禽白血病不僅可以通過水平傳播，而且可以通過垂直傳播，感染雞群長期處于帶毒狀態。種雞群一旦感染禽白血病，不僅危害同群種雞，還可以通過種蛋垂直傳播給下一代雞，從而造成疾病的跨世代傳播。到目前為止，還沒有有效藥物和疫苗用于禽白血病的防治，控制禽白血病主要采用檢測加淘汰的凈化方法。國內外已報道的禽白血病病毒檢測方法主要有：病毒的分離鑒定、酶聯免疫吸附試驗（ELISA) 和聚合酶鏈式反應（PCR)、熒光HRM-PCR 等。

江西省是我國地方雞品種最豐富的省份之一，利用江西地方雞品種資源，許多優良的配套系品種已經培育成功，創造了較大的經濟效益。種源安全至關重要，做好種雞場疫病凈化對地方品種雞資源保護意義重大。江西省農業科學院畜牧獸醫研究所高度重視禽白血病對江西地方雞的危害，率先對8 個不同地方品種雞進行了ALV分子流行病學調查，流行病學調查顯示江西地方品種雞群普遍感染過外源性ALV[2-4]，不同亞群的ALV 存在混合感染現象，ALV 混合感染將對禽白血病凈化帶來挑戰，開展江西地方雞禽白血病凈化勢在必行。本研究對3 個地方雞保種核心群開展3～5 個世代的ALV 凈化，以期為該病的綜合防控以及其他疫病凈化提供參考依據。

1 禽白血病病毒流行現狀

根據病毒與宿主細胞特異性相關的囊膜蛋白的抗原性，ALV 可分為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K 等11 個亞群，但自然感染雞群的只有A、B、C、D、E、J、K 等7 個亞群。其中E 亞群屬于內源性ALV、非致病性亞群，A、B、J、K 亞群屬于外源性ALV，在我國流行范圍最廣。K 亞群ALV（ALV-K) 是一個新的亞群，相較于其他亞群，其復制能力和致病力較弱，2012 年ALV-K 從我國地方雞分離出來，在隨后至今的多年間，在我國地方品種雞群中不斷被報道。J 亞群ALV（ALV-J) 于1999 年在我國首次被發現，隨后迅速蔓延至全國各地。與其他亞群相比，ALV-J 致病性和傳染性最強，可引起骨髓細胞瘤、血管瘤和其他多種惡性腫瘤，是危害我國家禽業的主要疫病，并在很長一段時間內對雞蛋和雞肉產品的供應構成巨大威脅[5]。為了扭轉這一局面，自2008 年起我國在全國范圍內啟動了控制ALV 感染的凈化計劃，凈化效果明顯，尤其是商品肉雞和蛋雞中ALV 的發病率明顯降低，其中ALV-J 尤為明顯。自2013 年后，我國較少出現髓細胞組織增生癥或ALV-J 的報道。2018 年以來，我國多個省份的白羽肉雞中出現了基因組變異、致病性增強的ALV-J 毒株。更為嚴重的是ALV-J 又進一步傳入我國固有的一些純地方品種雞群中，且存在不同亞群共感染現象[6-8]。感染不僅能造成病毒之間的重組，還可能會導致新型ALV 變異株的出現，ALV 病毒的重組可能會顯著增強病毒的致病性，嚴重威脅養禽業雞群健康發展。因此，密切監測雞群ALV 感染與流行情況，對ALV 凈化防控有重要意義。

2 江西地方雞禽白血病流行現狀

2.1 2016—2018 年江西地方雞禽白血病流行情況

為了解江西地方雞禽白血病流行情況，2016—2018 年對江西省8 個地方雞群（A-H) 等進行了系統的分子流行病學調查，樣品來源信息如表1 所示，調查的8 個品種雞的養殖規模從5000 到10000 只不等，疑似AL 的平均發病日齡約為135 日齡，癥狀持續30 至37 周，高峰期約為32 周齡。這些雞場的日死亡率為0.07%～0.44%，累計死亡率為7.90%～13.10%。值得注意的是，產蛋率明顯下降，比正常水平低20%以上。此外，種蛋孵化率受影響較小，仍在80%左右。從560 份樣品中分離出71 株病毒，并成功對其env 序列進行了測序，結果顯示這些分離株全部屬于J 亞群，但其分子特征完全不同，與在白羽肉雞中出現的毒株有很大差異，部分毒株與之前從商品肉雞、蛋雞和其他雞群中分離的毒株高度一致，甚至與從美國和俄羅斯分離的毒株高度一致[3]。更嚴重的是，系統進化分析表明，還出現了許多新的毒株，并處于一個獨立的進化分支中（圖1)。分離到的ALV-J 株系可進一步分為10 個群組，而不同雞群中都有不同的群組，揭示了ALV 可能在這些雞群中發生準種演變。以上分析說明了ALV-J 在江西地方雞的復雜背景和未來演變趨勢。

圖1 71 株ALV 遺傳進化樹 [3]

表1 江西地方雞養殖場的ALV 陽性率

2.2 2021—2023 年江西地方雞禽白血病流行情況

2021—2023 年對江西4 個地方雞（E-H) 的73664 份抗凝血樣本進行檢測。結果顯示，ALV-J 仍是感染雞中最主要的ALV 亞群，ALV-J陽性率為1.47%～8.49%（表2)。ALV-A 和ALV-B 的檢出率較低（<0.06%)。從各亞群在ALV 陽性樣本中所占百分比的統計來看，ALV-J亞群的陽性率逐年下降，而值得注意的是，ALV-K 亞群在分離株中的占比逐年上升。F 雞種的ALV 檢出率最高，ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K 陽性率分別為0.07%、0.3%、6.71%和4.86%；H 雞種的ALV 檢出率最低，ALV-J 和ALV-K 陽性率分別為0.35%和0.51%，無ALV-A和ALV-B 感染。從樣本的性別來看，母雞群（8.32%) 的ALV 陽性率明顯高于公雞群（3.16%)。這些數據表明，ALV-J 和ALV-K 仍是雞群中最主要的ALV 亞群，但在進行ALV 凈化的雞場中，致病性強的ALV-J 陽性率及其在分離株中占比明顯下降，禽白血病凈化對控制ALV的流行有重要意義。

表2 2021—2023 年禽白血病病毒檢測結果

對江西地方雞ALV 混合感染情況分析，結果顯示，在73664 份抗凝血樣本中，ALV-A、ALV-B、ALV-J 和ALV-K 的單感染率分別為0.01%（9/73664)、0.01%（9/73664)、3.75%（2762/73664) 和2.68%（1977/73664)（表3)。由1 種以上ALV 亞群引起的合并感染率在0.00%～0.59%，其中ALV-J 和ALV-K 合并感染率最高，為0.59%。此外，還發現了6 例三重感染病例，其中3 例同時感染ALV-A、ALV-J 和ALV-K，3 例同時感染 ALV-B、ALV-J 和ALV-K。ALV 重組將對禽白血病凈化帶來挑戰，開展江西地方雞禽白血病凈化勢在必行。

表3 2021—2023 年不同禽白血病病毒株單獨感染和混合感染情況

3 江西地方雞禽白血病凈化

3.1 凈化方案

在江西地方雞ALV P27 抗原的排毒規律的基礎上，實施過程中不斷對凈化程序進行優化調整，最終確定如下凈化方案：

①出殼雛雞胎糞檢測（1 日齡)：孵化時需獨立的孵化車間，便于消毒，種雞帶上翅號單籠飼養，并編籠號，種蛋記錄編號，出雛時，全群母雞的種蛋配備獨立的出雛盒，出殼后立即采集胎糞，加入專用稀釋液，用液氮凍融后，利用ALV P27 抗原檢測試劑盒進行檢測，陽性者連同母雞及該母雞所有雛雞全部淘汰；陰性者小區間隔離飼養。

②育成期（8～10 周齡)：全群雞單獨采集血漿，用細胞培養的方法（血漿分別接種DF1 細胞，5%CO237℃培養7d 后，培養液反復凍融3次，取上清液進行ALV P27 抗原檢測)，根據檢測結果，淘汰陽性雞。

③開產初期（18～20 周齡)：開產前，上單籠飼養，待開產時，全群母雞開產后的前3 枚蛋編上號，分別取稀蛋清，反復凍融3 次后，用ALV P27 抗原試劑盒檢測，淘汰陽性雞群。

④繼代前（40～50 周齡)：采集全群母雞血漿，細胞培養病毒7d 后進行ELISA 檢測ALV P27 抗原，淘汰陽性雞群；采集公雞血漿，病毒分離后檢測ALV P27 抗原，淘汰陽性雞。每個世代重復上述步驟，直至達到凈化標準。

3.2 A 雞種禽白血病凈化

A 雞種保種群凈化方案按照3.1 進行，其禽白血病凈化檢測結果見表4，共檢測樣品數37949 份。其中零世代共檢測6344 份樣品，陽性雞樣品數為941 份，平均陽性率為14.83%；第一世代共檢測樣品6763 份，平均陽性率為8.19%；第二世代共檢測樣品7754 份，陽性率為3.89%，第三世代檢測樣品數量為8258 份，平均陽性率為1.38%；第四世代檢測陽性樣品數8830 份，平均陽性率為0.48%。經過5 個世代的凈化，各日齡ALV 陽性率呈逐級遞減的趨勢，凈化效果顯著。該種雞場于2022 年7 月被評為“省級禽白血病凈化場”。

表4 A 雞種禽白血病凈化結果

3.3 B 雞種禽白血病凈化

B 雞種禽白血病凈化程序參照3.1 方案進行實施，其禽白血病凈化檢測結果見表5，共進行了五個代次的禽白血病凈化，檢測樣品52679份，淘汰陽性雞1963 只。其中零世代共檢測樣品2788 份，淘汰陽性雞580 只；第一世代檢測樣品9303 份，淘汰ALV 陽性雞553 只；第二世代檢測樣品11771 份，淘汰陽性雞354 只；第三世代檢測樣品數為14782 份，淘汰陽性雞321只；第四世代檢測樣品數14035 份，淘汰陽性雞155 只。凈化結果顯示B 雞種從零世代至第四世代各日齡陽性率亦是逐級遞減的趨勢，凈化效果顯著。

表5 B 雞種禽白血病凈化結果

3.4 C 雞種禽白血病凈化

C 雞種禽白血病凈化程序參照3.1 凈化方案進行實施，其禽白血病凈化檢測結果見表6，共進行了四個代次的禽白血病凈化，檢測樣品41999 份，淘汰陽性雞1678 只。從零世代至第三世代，各日齡ALV 陽性率亦是逐級遞減的趨勢，第三世代1 日齡胎糞P27 抗原陽性率與45 周齡病毒分離P27 抗原陽性率分別為0.92%、0.96%，凈化效果明顯。將繼續按3.1 凈化方案開展第四世代的ALV 凈化。

表6 C 雞種禽白血病凈化結果

3.5 禽白血病凈化對雞群生產性能的影響

B 雞種禽白血病凈化組與非凈化組種雞群產蛋性能及孵化性能比較結果顯示[9]，凈化組母雞50 周齡末存活率高5.43%，產蛋總數高17285個；平均入舍母雞產蛋數高9.74（個/只)，種蛋受精率高0.7%。禽白血病凈化組與非凈化組后代商品雞群成活率結果顯示，與非凈化組相比，凈化組100 日齡商品雞成活率高2.06%，后代母雞平均體重高4.33%，后代公雞平均體重高1.95%。

4 制定標準規范與主推技術

2021 年由江西省農業科學院畜牧獸醫研究所起草制定，并由江西省市場監督管理局發布了《種雞禽白血病凈化技術規范》（DB36/T1453—2021)；江西省農業科學院畜牧獸醫研究所主持的《禽白血病凈化技術》 作為2023 年江西省農業主推技術，并由江西省農業農村廳頒布實施（贛農廳辦函〔2023〕 3 號)。

5 小結

近年來，國家越來越重視禽白血病的防控工作，相繼出臺了“國家中長期動物疫病防治規范（2012—2020 年)”“全國肉雞遺傳改良計劃（2021—2035)”以及 “全國蛋雞遺傳改良計劃（2021—2035)”等計劃，均對禽白血病提出了凈化要求。我國地方固有品種雞群的禽白血病凈化工作已呈分化趨勢，江西省農業科學院畜牧獸醫研究所高度重視禽白血病的流行，率先對江西地方雞進行禽白血病分子流行病學調查及凈化技術研究。2016—2023 年共采集臨床樣本74224 份，其中2016—2018 年江西地方雞禽白血病分子流行病學調查發現，江西省的8 個地方雞群中出現了復雜的ALV-J 感染現象，導致了嚴重的禽白血病癥狀和死亡率的增加，不同分離株的來源處于ALV 不同進化分支；2021—2023 年江西地方雞ALV 分子流行病學結果顯示，ALV-J 陽性率及其在分離株的占比逐年下降，致病性較弱的K 亞群毒株在分離株中占比逐年遞增，尤其是在進行ALV 凈化的雞場中，ALV-J 陽性率明顯下降，表明禽白血病凈化對控制ALV 的流行有重要意義。ALV 不同亞群混合感染現象普遍，不同亞群ALV 產生的重組病毒等問題將阻礙著ALV 凈化的進程，迫切需要對江西地方雞禽白血病凈化。江西3 個地方品種雞凈化結果表明，禽白血病凈化效果顯著，無論是胎糞、蛋清還是血漿蛋白分離，ALV 陽性率均出現不同程度的下降。凈化效果分析顯示禽白血病凈化組種雞群產蛋性能、孵化性能及商品雞群成活率均高于非凈化組，禽白血病凈化對雞場經濟效益提升有重要作用。

6 對策與建議

禽白血病凈化工作是一項復雜而漫長的過程，國家提出剔除計劃后，自2013 年后，我國較少出現髓細胞組織增生癥或ALV-J 的報道。但在2018 年2 月，我國的六個省幾乎同時暴發了該病[10]。禽白血病存在間歇排毒現象，一般需經過3～5 個世代才能達到凈化標準，說明ALV的凈化不易。

為有效防控禽白血病，應根據ALV 流行特點進行科學防控。ALV 的傳播方式以垂直傳播為主，垂直傳播性疾病在不同代次間有連鎖放大的效應，切斷ALV 的垂直傳播是迅速控制該病傳播的主要措施。商品蛋雞場應從ALV 陰性種雞場購買雞苗，對祖代和父母代雞群實施嚴格的ALV 凈化措施。

種雞群的凈化過程中首先應掌握實施凈化雞群的ALV 感染狀態和排毒規律，根據ALV 排毒規律制定科學可行的凈化淘汰程序。對于已經實現核心群凈化的禽白血病凈化示范場，除了對若干個關鍵節點進行適當比抽檢外，還要做好疫苗外源病毒檢測、種源引進、以及父母代、商品代雞苗跟蹤監測等，以確保核心雞群ALV 陰性狀態。

外源性ALV 還經多種途徑發生水平傳播，生物安全防控至關重要，強化生物安全屏障，抓好日常消毒管理，內部建立生物安全體系，嚴格流程，防止病毒水平傳播。另外，禽白血病的定期監測和流行病學調查工作對ALV 凈化亦至關重要，掌握禽白血病在群間、空間和時間上的分布狀況，研究禽白血病的發展趨勢，分析禽白血病傳播的風險因素，為種雞場開展ALV 的防控和凈化提供科學的數據支持。