胰酪大豆胨瓊脂培養基比對研究

梁 謀 龐逸輝 劉 歡 王 霞 宣 澤 江志杰

北京市藥品檢驗研究院 國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室中藥成分分析與生物評價北京市重點實驗室,北京 102206

培養基是微生物試驗的基礎，其質量優劣直接影響微生物試驗結果的準確性和可靠性[1]?！吨腥A人民共和國藥典》2020 版四部中，《藥品微生物實驗室質量管理指導原則》明確要求對商品化培養基建立接收標準并進行符合性驗收，驗收內容包括產品名稱、批號、數量、生產單位、外觀性狀等[2]?！端幤飞a質量管理規范（2010 年修訂）》第二百二十六條，要求對培養基進行質量控制與保證[3]?！妒称钒踩珖覙藴适称肺⑸飳W檢驗培養基和試劑的質量要求》（GB 4789.28-2013）[4]明確了培養基性能測試的方法和判定標準。培養基的質量管理和控制是相關行業和法規重點關注的內容。

1 材料與方法

1.1 儀器和耗材

LRH-250 生化培養箱（上海一恒科學儀器有限公司）；Ⅱ級A2 型生物安全柜（賽默飛世爾蘇州儀器有限公司）；一次性接種環1 μl（JET，批號：20190905）；一次性L 型涂布棒（Fisher brand，批號：180301230）。

1.2 培養基

培養基比對研究使用的胰酪大豆胨瓊脂培養基（以下簡稱培養基）分別為5 家國內培養基生產商，分別用A（批號Ⅰ：20 201105；批號Ⅱ：20 210111；批號Ⅲ：20210215），B（批號Ⅰ：20 201130；批號Ⅱ：20 210106；批號Ⅲ：20210107），C（批號Ⅰ：20 201109；批號Ⅱ：20 201202；批號Ⅲ：20201107），D（批號Ⅰ：K2173Y；批號Ⅱ：L0072Y；批號Ⅲ：L0118Y），E（批號Ⅰ：210110-4；批號Ⅱ：201216-5；批號Ⅲ：201118-1）代表。

1.3 試驗菌株

金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003、銅綠假單胞菌CMCC（B）10104、枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501、黑曲霉CMCC（F）98003、白色念珠菌CMCC（F）98001、大腸埃希氏菌ATCC29212 和糞腸球菌ATCC25922。

1.4 試驗方法

對5 個品牌培養基的內外包裝和產品標識信息進行比對分析，并根據《中華人民共和國藥典》2020版四部通則1105 培養基適用性檢查方法[2]和《食品安全國家標準食品微生物學檢驗培養基和試劑的質量要求》（GB 4789.28-2013）[4]商品化培養基質量控制測試方法對每個品牌各3 個批號的培養基進行分析。

2 結果

2.1 培養基包裝標識差異

5 個品牌培養基內外包裝標識信息存在以下差異：培養基產品規格標示的單位不同；5 個品牌標示的警示信息和備注信息的內容側重點不同；3 個品牌有效期對應生產日期縮減1 d，2 個品牌有效期對應生產日期沒有縮減天數。見表1。

表1 培養基產品包裝標識比對結果

2.2 培養基廠檢報告差異

5 個品牌培養基自檢報告使用的檢驗依據和具體檢測項目以及適用性判定標準都不相同。見表2。

表2 培養基產品自檢項目比對結果

2.3 培養基適用性檢查

根據《中華人民共和國藥典》2020 版四部通則1105，對5 個品牌培養基進行比對測試，培養基適用性檢查結果，均符合要求，菌落平均數的比值在0.6 ～1.4。見表3。

表3 培養基適用性檢查結果

根據《食品安全國家標準食品微生物學檢驗培養基和試劑的質量要求》（GB 4789.28-2013）對5 個品牌培養基性能進行比對測試。5 個品牌培養基均符合標準要求，G 值結果在7.1 ～14.5。見表4。

表4 培養基適用性檢查結果

3 討論

3.1 培養基質量管理規范化的必要性

目前，我國培養基質量控制標準多為行業標準，缺乏系統全面的國家標準。藥品檢驗和食品生產檢測培養基使用驗收有相應標準。此外，還有衛生行業標準和進出口行業標準等[5-7]?，F行培養基質量控制標準存在培養基應用領域不明確，適用性待提高，質量控制依據不完備等問題。

3.2 培養基比對研究發現的主要差異

首先，培養基包裝及其信息標識存在差異。關于有效期標識，有效期對應生產日期應該縮減天數。包裝警示信息方面，除了標示一般警示信息外，不同用途培養基應當有針對性的警示內容。再次質量控制標準差異較大。有1 個品牌沒有注明出廠檢驗依據，給培養基的使用帶來一定困惑。pH 值是微生物生長繁殖重要的環境指標之一，一般來說，細菌適合pH 值在7.0 ～7.5[8]，在比對中發現，有2 個品牌沒有進行pH 值檢測。適用性測試方面，品牌B 的出廠檢驗報告，沒有寫明菌落回收率的具體測試數值，只寫明結果范圍，其余4 個品牌菌落回收率都有明確數值。通過研究發現，5個品牌培養基適用性測試，都符合相關標準要求，但相同品牌不同批號之間均一性存在差異。

3.3 培養基質量管理的意見和建議

培養基使用前的驗收很有必要，使用者應該認真執行培養基驗收制度，建立適合自身應用領域培養基驗收工作文件[9-12]，特別是在更換培養基供應商時，應最大限度保證培養基質量的一致性[13]。應當建立培養基通用質量標準，適用于不同微生物檢測領域的培養基質量基本要求[14-16]，培養基生產商應該加強培養基質量管理和控制，對質量控制標準予以明確和完善，從而更加符合現行行業標準。

綜上所述，目前市場上使用的培養基的包裝標識和質控標準存在較大差異，不利于培養基后期的管理和使用，應當進行改進和完善。因條件限制只對市場上5 家培養基廠商進行比較，此外，因實際檢驗能力的原因未對5 種品牌培養基的pH 值、硬度、水分流失、厚度等參數做定量分析，因此研究結果存在一定局限性，有待后續研究進行深入分析與研討。