一株具有緩解酒精性肝損傷的發酵粘液乳桿菌及其功效評價研究

陳作國,鄭志瑤,陳彩玲,朱珺,孫盛,李理,陳蘇

(杭州娃哈哈集團有限公司,杭州娃哈哈科技有限公司,浙江省食品生物工程重點實驗室,浙江 杭州,310018)

酒精被公認為大多數工業化國家慢性肝病的常見致病因素。肝臟是酒精代謝的重要器官,也是酒精損害的主要靶器官[1]。酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)已經逐漸成為全球廣泛流行的慢性肝病,主要特征是肝細胞代謝受損、氧化應激和肝損傷[2]。在ALD疾病進程初期,脂質會在乙醇的誘導下進入肝細胞中并逐漸積累,形成脂肪肝,此時若仍持續攝入酒精,則可能進一步發展為肝纖維化甚至肝硬化。目前,我國酒精性肝病已經上升成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝臟疾病,然而迄今為止尚無安全有效治療ALD的臨床用藥[3]。如何有效防治ALD是臨床醫學迫切需要解決的問題。因此,尋找酒精性肝病防治措施具有十分重要的意義。

近幾年,一些研究揭示了腸道微生物群失調與ALD發病機制之間的重要關系[4]。酒精攝入不僅導致腸道微生物群失調,還會破壞腸道屏障功能,使腸道通透性升高,進而增加脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)向門靜脈循環的泄漏,引起炎癥反應和肝損傷[5]。此外,氧化應激是酒精性肝細胞損傷和肝臟脂肪堆積的主要因素之一。酒精代謝中產生大量活性氧(reactive oxygen species,ROS),其會直接損傷肝細胞,還能氧化脂質、蛋白質和核酸等多種生物分子,并干擾抗氧化酶活性和細胞乙醇氧化系統[6-7]。

乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)廣泛存在于自然界中,是發酵工業中不可缺少的微生物,在腸道內發揮著至關重要的作用。1994年,NANJI等[8]最早發現乳酸菌具有緩解酒精性肝損傷的潛力,這引起了國內外研究者廣泛的關注。多項研究表明鼠李糖乳桿菌GG(LactobacillusrhamnosusGG,LGG)可以通過恢復腸道屏障功能和黏膜免疫系統[9],緩解氧化應激及降低炎癥反應[10],維持腸道菌群平衡和提高腸道短鏈脂肪酸[11],從而改善酒精引起的肝臟脂肪變性和損傷。此外,短雙歧桿菌ATCC15700[12]在慢性酒精肝損傷小鼠體內能恢復腸道微生物群和腸道通透性,降低內毒素血癥,進而抑制酒精性肝臟病的發展。植物乳桿菌[13]可以通過增加機體抗氧化特性,減少酒精性肝損傷。

本研究從傳統發酵食品中分離得到的乳酸菌,從抗氧化特性、改善腸道屏障功能方面,進行改善酒精性肝病乳酸菌體外評價。并建立慢性酒精性肝損傷模型,進一步驗證菌株體內緩解酒精性肝損傷功效,為酒精性肝損傷的防治提供了潛在的干預措施。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

發酵黏液乳桿菌WHH2438:分離自新疆奶疙瘩樣品,經鑒定其屬于發酵粘液乳桿菌(Limosilactobacillusfermentum)。C57BL/6 J雄性無特定病原體動物(specific pathogen free,SPF)級小黑鼠(體質量18～22 g,6～8周齡),浙江省中醫藥大學動物實驗中心;人結直腸腺癌細胞HT-29,中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心;豬小腸上皮細胞IPEC,中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心;鼠李糖乳酪桿菌(Lacticaseibacillusrhamnosus)GG,杭州娃哈哈集團有限公司菌種資源庫。

DPPH、胰酶、牛膽鹽(生化試劑),Sigma-Aldrich(中國)有限公司;無水乙醇、水楊酸、H2O2,中國醫藥集團有限公司;細菌/細胞總脫氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid,DNA)提取試劑盒,北京天根生化科技有限公司;DMEM培養基、胎牛血清,賽默飛世爾科技(中國)有限公司;MRS培養基,英國Oxoid生物試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

Baker Type B2 SterilGARD Ⅲ生物安全柜、DU800紫外分光光度計,美國貝克曼公司;Mastercycler?nexus GX2 PCR擴增儀、5810 R離心機,德國Eppendorf公司;Delta 320 pH計、JA2003 N電子天平,瑞士梅特勒-托利多公司;DNP-111電熱恒溫培養箱,上海海向儀器設備廠;DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器,鞏水市英谷硲予華儀器廠;MX-S漩渦振蕩器,大龍興創實驗儀器(北京)有限公司;MLS-3780高壓蒸汽滅菌鍋,日本三洋株式會社;OLYMPUS BX61光學顯微鏡,日本奧林巴斯株式會社。

1.3 實驗方法

1.3.1 菌株分離純化與鑒定

取新疆奶疙瘩樣品,篩網過濾后,取1 mL加入9 mL無菌生理鹽水中,然后10倍梯度稀釋,各取10-1、10-3、10-5稀釋度100 μL分別涂布于固體MRS培養基平板上,于37 ℃厭氧培養48 h。根據形態特征挑選典型菌落,挑取單個菌落劃線分離2～3次,反復劃線獲得純菌株,編號,進行革蘭氏染色,鏡檢。

取適量對數生長期的菌株純培養物,利用細菌基因組DNA快速抽提試劑盒提取菌體DNA,采用細菌16S片段通用引物27F(5′-AGTCTCTGATCATGC-3′)和1492R(5′-AAGGAGGTGCTCCAGCC-3′)進行16S rDNA片段的擴增。

聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)擴增反應體系:模板DNA 1 μL,引物(10 mmol/L)各1 μL,2×TaqPCR Master Mix 25 μL,用ddH2O補到50 μL。擴增程序:94 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,30個循環;72 ℃ 10 min。

PCR產物送至上海生工生物工程有限公司進行測序,將測序結果采用DNAMAN軟件雙向拼接后,通過NCBI中的BLAST功能進行序列相似性比對分析[14]。

1.3.2 清除DPPH自由基的能力

本發明菌株發酵粘液乳桿菌WHH2438和對照商業菌株鼠李糖乳桿菌GG(LGG)經二代活化后,取對數生長末期菌液,4 000 r/min離心10 min,棄上清液,獲得菌泥,PBS(pH=7.4)洗滌2次后重懸,用分光光度計將菌懸液OD600值調至0.5±0.1。在反應體系中加入待測益生菌的菌懸液1 mL,再加入1 mL 0.1 mmol/L DPPH的無水乙醇溶液,充分混勻后,室溫下避光振蕩反應30 min,然后經過6 000 r/min離心10 min,取上清液,測定517 nm處的吸光度。以等體積的生理鹽水代替樣品溶液作為對照組,并用等體積的生理鹽水和無水乙醇的混合液作為空白調零。DPPH自由基清除率的計算如公式(1)所示:

(1)

1.3.3 清除羥自由基的能力

菌株經二代活化后,取對數生長末期菌液,4 000 r/min離心10 min,棄上清液,獲得菌泥,PBS(pH=7.4)洗滌2次后重懸,用分光光度計將菌懸液OD600調至0.5±0.1。在反應體系中加入待測益生菌的菌懸液1 mL,再加入1 mL生理鹽水和1 mL FeSO4(3 mmol/L)?；靹蚝蠹尤? mL H2O2(3 mmol/L),室溫靜置10 min后加入1 mL水楊酸(3 mmol/L,無水乙醇溶解),混勻,37 ℃水浴20 min,離心取上清液測定510 nm處的吸光值。以等體積的生理鹽水代替樣品溶液作為對照組,并用等體積的生理鹽水和無水乙醇的混合液作為空白調零。

羥自由基清除率的計算如公式(2)所示:

(2)

式中:Ap為菌液的OD510值,As為菌懸液換成0.9%的生理鹽水的OD510值。

1.3.4 抑制酒精損傷腸細胞能力

HT29細胞的培養:從-80 ℃低溫冰箱中取出HT-29細胞進行復蘇,復蘇后的HT-29細胞傳至第3代,采用0.25%(質量分數)的胰酶(含0.02%EDTA,2500 BAEE units/mL)消化后1 000 r/min離心5 min,加入5 mL含10%(體積分數)胎牛血清的DMEM培養基(含青霉素100 U/mL,鏈霉素100 μg/mL)進行重懸(直至細胞呈單細胞懸液),取適量細胞用血球細胞計數板計數,根據計數結果,用含10%胎牛血清的DMEM培養基(含青霉素100 U/mL,鏈霉素100 μg/mL)將細胞懸液濃度稀釋到1×105cells/mL,取200 μL接種于96孔細胞培養板中,于37 ℃,5%(體積分數)CO2培養1 d。

益生菌對抑制乙醇損傷腸細胞能力方法:取對數生長末期菌液,4 000 r/min離心10 min,棄上清液,獲得菌泥,PBS(pH=7.4)洗滌2次后用DMEM培養基重懸,用分光光度計將菌懸液OD600值調至1,以DMEM培養基為對照,以含10%(體積分數)酒精DMEM培養基為處理組,于37 ℃、含5% CO2的培養箱中孵育30 min后清洗1次,之后用MTT法測定活性。

1.3.5 腸屏障保護能力

IPEC單層細胞的培養:從-80 ℃低溫冰箱中取出IPEC細胞進行復蘇,復蘇后的IPEC細胞傳至第三代,采用0.25%(質量分數)的胰酶(含0.02%EDTA,2 500 BAEE units/mL)消化后1 000 r/min離心5 min,加入5 mL含10%(體積分數)胎牛血清的DMEM培養基(含青霉素100 U/mL,鏈霉素100 μg/mL)進行重懸(直至細胞呈單細胞懸液),取適量細胞用血球細胞計數板計數,根據計數結果,用含10%胎牛血清的DMEM培養基(含青霉素100 U/mL,鏈霉素100 μg/mL)將細胞懸浮,取200 μL接種于Transwell小室中,于37 ℃,5% CO2培養7 d以上。

益生菌菌株的活化:分別將200 μL的甘油種子液接種于10 mL液體MRS培養基中,在37 ℃恒溫培養箱中,經活化培養后,收集菌液。每株菌取出3 mL菌液,測定菌液OD600,用空白培養基進行適當稀釋,調整至OD600值為0.90±0.10。剩余菌液取5 mL在室溫下4 000 r/min離心10 min收集菌體,用5 mL含10%胎牛血清的DMEM完全培養基中培養(不加雙抗)重懸,并根據之前的稀釋倍數,將菌液OD統一稀釋至0.900。

益生菌保護腸屏障實驗:以DMEM培養基為空白,以含2.5%(體積分數)酒精和益生菌的DMEM培養基為處理組,僅含2.5%酒精DMEM培養基為對照組于37 ℃,含5% CO2的培養箱中孵育30 min、1 h、2 h、3 h,用電阻儀測定細胞屏障通透性。

1.3.6 緩解酒精性肝損傷功能動物劑量效價實驗

本動物實驗所有程序均按照中國浙江省《浙江省實驗動物管理辦法》的要求進行。該研究方案由杭州娃哈哈集團有限公司動物管理和倫理委員會討論通過并批準(批準文號WHH2021101401)。

本實驗采取隨機分組設計,將健康的雄性C57BL/6 J小鼠(8周齡,23～24 g),72只,食用普通飼料適應7 d后,隨機分為6組,對照組12只,模型組12只,各益生菌處理組12只。動物飼養保持環境溫度為(21±2) ℃,濕度為30%～70%,12 h光照交替,自由飲水,攝入飼料需人為控制。每3 d換1次墊料。液體飼料購自江蘇南通特洛菲飼料科技有限公司,酒精液體飼料的酒精含量為4%(質量分數)。

分組及處理方式如表1所示。

表1 菌株緩解酒精性肝損傷功能實驗的分組及處理方式Table 1 Group and treatment of experiment

整個實驗周期為7周,第1周為適應期,酒精含量(質量分數)從0、1.6%、2.4%、3.2%上升到4%,之后持續6周后,過夜禁食后進行眼眶取血獲取血液樣本,取肝臟并稱重,血液樣本取出后,靜置30 min,4 ℃,4 000 r/min離心15 min,取血清。小鼠血清谷草轉氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,GOT)、谷丙轉氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、肝臟甘油三酯(triglycerides,TG)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量的測定,嚴格按照相應試劑盒(北京普利萊基因技術有限公司)說明書的具體操作步驟進行。

1.3.7 菌株生物學特性研究

1.3.7.1 耐酸性實驗:

取一定量菌液,4 000 r/min離心10 min后棄上清液。加入相同體積pH=2.5的MRS溶液,吹打混勻后,在37 ℃環境下孵育,用稀釋涂布計數法測定0 h及孵育2、4 h后菌數的變化。

1.3.7.2 耐膽鹽性實驗

取一定量菌液,4 000 r/min離心10 min后棄上清液。加入相同體積的含0.3%(質量分數)膽鹽的MRS溶液,吹打混勻后,在37 ℃環境下孵育,用稀釋涂布計數法測定0 h及孵育4、8 h后菌數的變化。

1.3.7.3 黏附性實驗

菌株培養至對數末期后收集菌液。4 000 r/min離心10 min后,用含10%胎牛血清的DMEM完全培養基重懸,并調整菌液菌數為2×108CFU/mL。HT29細胞培養后,采用胰酶(含0.02% EDTA,2 500 BAEE units/mL)進行消化,用含10%胎牛血清的DMEM培養基(含青霉素100 U/mL,鏈霉素100 μg/mL)進行重懸。經細胞計數后,將細胞懸液濃度調整至1×106cells/mL,接種于已放置細胞爬片的12孔細胞培養板中,37 ℃,5% CO2培養24 h。加入受試菌菌懸液1 mL,37 ℃條件下于CO2培養箱中孵育2 h。孵育結束后,經PBS洗滌3次、甲醇固定后,取出細胞爬片。經革蘭氏染色后,用中性樹脂封片,光學顯微鏡下進行觀察,每個片子隨機選取10個視野計數,每株菌3個重復。

1.3.8 菌株生長曲線

將200 μL的甘油種子液接種于10 mL液體MRS培養基中,37 ℃培養24 h后再將活化的種子液以100 μL接種到10 mL MRS培養基中,分別在0、2、4、6、8、12、14、16、18、20、22、24 h檢測菌懸液的OD600值。

1.4 統計分析

測定指標均表示至少為3次平行實驗的平均值±標準偏差。顯著性分析采用SPSS 17.0(IBM公司,美國)軟件中的Duncan′s多重比較檢驗法進行分析,顯著水平設置為0.05。

2 結果與分析

2.1 菌株分離純化與鑒定

采用稀釋涂布平板法從新疆奶疙瘩樣品中分離得到白色圓形菌落的乳酸菌疑似菌株(圖1),經革蘭氏染色后,為革蘭氏陽性菌。經16S DNA鑒定,為發酵粘液乳桿菌,在衛生部2010年頒布的《可用于食品的菌種名單》中。

圖1 發酵粘液乳桿菌的菌株外觀特性

2.2 清除DPPH自由基的能力

DPPH自由基是一種很穩定的人工合成的以氮為中心的自由基,DPPH法是一種極為常見的用于篩選和評價抗氧化效果的有效方法[15]。結果如表2所示,菌株發酵粘液乳桿菌WHH2438菌體相比鼠李糖乳桿菌GG對DPPH自由基有更高的清除效果。

表2 不同菌株對DPPH自由基清除的效果Table 2 Effects of different bacterial strains on DPPH radical scavenging

2.3 清除羥自由基的能力

羥自由基是活潑性最強、氧化性最大的自由基,對DNA、蛋白質和脂類有較強的結合能力,是引起體內氧化損傷的主要因素[16],所得結果如表3所示,菌株WHH2438的羥自由基清除率為55%,顯著優于商業菌株LGG,說明WHH2438在抗氧化能力方面有更優秀的性能。

表3 不同菌株對羥自由基的清除效果Table 3 Effects of different bacterial strains on hydroxyl radical scavenging

2.4 抑制酒精損傷腸細胞能力

酒精主要由人的胃腸道吸收進入肝臟循環,其中75%～80%由小腸吸收,因此長期飲酒對腸道負擔極大,易產生不良影響,損傷腸道黏膜,增加腸穿孔和腸道慢性炎的風險。由表4可知,在發酵粘液乳桿菌WHH2438的存在下,酒精對人結直腸腺癌細胞HT-29的損失明顯減弱,細胞存活率上升至(52.50±3.65)%,遠高于無益生菌保護的模型組(18±0.61)%,也優于對照商業菌LGG處理的細胞存活率(31.53±4.15)%。

表4 不同菌株抑制酒精損傷腸細胞的能力Table 4 Ability of different bacterial strains to inhibit alcohol-induced intestinal cell damage

2.5 腸屏障保護功能的能力

腸道中存在陰性革蘭氏菌比如大腸桿菌等,能產生對人體產生炎癥的脂多糖LPS,通過腸道屏障進入血液抵達肝臟,對肝臟造成炎癥損傷。而長期的飲酒會導致腸屏障受到破壞,進一步使肝臟承受更大的炎癥損傷。由表5可知,3 h后,發酵粘液乳桿菌2438處理的豬小腸上皮細胞IPEC腸屏障損失率(16.62±2.61)%,遠低于無益生菌保護的模型組損失率(44.05±3.25)%,也低于對照商業菌LGG處理的屏障損失率(24.44±3.17)%。

表5 不同菌株的腸屏障保護功能能力Table 5 Intestinal barrier protective capacity of different bacterial strains

2.6 緩解酒精性肝損傷功能動物劑量效價實驗

本實驗的慢性酒精性肝損傷造模方式為目前較為流行的液體酒精飼料喂養法。由表6可知,模型小鼠在肝體比、血清指標、肝臟指標均與對照組有顯著的差異(P<0.01),說明模型小鼠的慢性酒精性肝損傷癥狀明顯,模型成立。在益生菌處理組方面,高劑量組和滅活菌組小鼠的肝體比與模型組有顯著性差異(P<0.05)。血液指標方面,高劑量組和滅活菌組的谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶有明顯的下降,接近對照組水平,相比模型組均有顯著性的差異(P<0.05)。肝臟指標方面,高劑量組和死菌組的肝臟指標甘油三脂和還原型谷胱甘肽有顯著性下降(P<0.05),說明高劑量組和死菌組有較好的緩解酒精性肝損傷功能。圖2的肝臟HE染色切片中也可觀察到高劑量組和死菌組的小鼠肝臟中的脂肪顆粒明顯比模型小鼠的少很多。

a-對照組;b-模型組;c-H2438;d-D2438

表6 動物實驗結果Table 6 Result of animal experiment

2.7 菌株生物學特性研究

2.7.1 菌株酸和膽鹽耐受性

胃液pH的大小根據飲食結構不同而波動很大,通常pH為3左右,空腹食用酸性食品可達1.5,食用堿性食品可達4～5,且食物尤其是流食通過胃的時間 相對較短,一般是0～4 h[17]。益生菌被食入后菌體必須通過惡劣的胃液,同時要抵抗來自胰腺的膽汁鹽,因此能夠抵抗較強的酸性環境是益生菌能在腸道中存活和發揮作用的先決條件。由表7可知,在pH 2.5的酸性環境下孵育4 h后,WHH2438菌數降低0.27數量級,與對照菌LGG相當,其菌數降低了0.3數量級。在0.3%膽鹽環境下孵育8 h后,WHH2438菌數降低2.27數量級,優于對照菌LGG,表現出較好的膽鹽耐受性。說明菌株WHH2438具有較好的酸和膽鹽耐受性,能夠在胃腸道嚴苛的環境下長時間保持較高活性。

表7 WHH2438菌株的酸及膽鹽耐受性Table 7 The acid and salt bile tolerant of the strain WHH2438

2.7.2 菌株黏附性

優秀黏附性的乳酸菌能夠黏附腸黏液上層及腸上皮細胞,不易隨著腸道蠕動和腸內容物的沖擊而消除,有助于其在腸道的長期定植[18]。此外,乳酸菌定植腸道后還能抑制病原菌定植,維持腸道菌群平衡,增強與腸道細胞之間的信號轉導和提高機體的免疫力[19]。因而乳酸菌黏附性是評價其作為益生菌的重要標準,菌株WHH2438對人結直腸腺癌細胞HT-29表面的黏附性,結果見表8和圖3。由表8可知,菌株WHH2438表現出高黏附能力,每個細胞表面可黏附(7.01±0.65)個菌,顯著高于LGG菌株(3.75±0.30,P<0.001),是LGG的1.87倍,說明WHH2438菌株能夠黏附于腸道黏膜上皮細胞表面,顯示出較高的腸道定植活性。

a-發酵粘液乳桿菌2438;b-商業菌LGG

表8 不同菌株的黏附性Table 8 Adhesion ability of different bacterial strains

2.7.3 菌株生長曲線

細菌生長曲線反映了單細胞微生物在一定環境條件下于液體培養時所表現出的群體生長規律。由圖4可知,菌株WHH2438在經歷前2～3 h的遲緩期后,菌懸液OD600快速增長,大概在8～10 h間達到峰值進入穩定期。

圖4 菌株生長曲線

3 討論

酒精性肝損傷是由于長期大量飲酒所致的肝臟疾病,乙醇代謝過程中產生的乙醛和自由基對肝臟造成嚴重的氧化損傷和后續的炎癥反應,過多的酒精攝入會導致脂肪肝,積年累月之下,會誘發肝纖維化、肝硬化,甚至最后演化成肝癌。已有研究[20]表明在大鼠酒精性肝損傷模型中,乳酸菌能夠降低自由基對肝臟的氧化損傷作用,降低炎癥因子的產生,改善腸道菌群平衡,降低腸道黏膜的損傷,最終起到保護肝臟的作用,而乳酸菌正是健康個體腸道菌群的重要組成部分,其在護肝功能方面存在一定的潛力。有文獻報道[21],LGG通過減弱肝臟氧化應激、調節肝臟炎癥水平、調節腸道屏障等途徑,減緩小鼠慢性酒精性肝損傷。本研究以LGG作為陽性菌株對照,對WHH2438進行了抗氧化能力、抑制酒精損傷腸道的能力、腸屏障保護能力以及菌株耐酸、耐膽鹽、黏附性等基礎特性的相關體外研究。在抗氧化方面,WHH2438的清除DPPH自由基和羥自由基的能力均顯著強于LGG。在保護腸道方面,通過進行酒精濃度的調試,建立了相關酒精損傷腸細胞模型和酒精損傷腸屏障模型。從這2個細胞實驗結果發現,WHH2438在抑制酒精損傷腸細胞和保護腸屏障方面均有優秀的能力。

本次體內動物功效評價是以C57BL/6 J小黑鼠為實驗對象,以食用含酒精液體飼料為造模方法,為期6周的動物實驗。該造模優點在于酒精攝取更接近真實,導致小鼠形成慢性酒精性肝損傷。與對照小鼠相比,模型小鼠的肝體比有了明顯的上升,說明肝臟有肥大現象,從解剖觀察來看,模型小鼠肝臟肥大且有偏白的顆粒,說明有脂肪顆粒堆積現象。從血液指標來看,模型小鼠的谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶有明顯上升現象,由于這2種酶主要存在于肝臟細胞中,當血清中這2種酶上升,說明肝臟有了明顯的損傷現象。模型小鼠的肝臟指標還原型谷胱氨肽升高,說明機體為了抑制乙醇代謝產生的氧化損傷,應激性地提高了還原型谷胱氨肽水平。因此,模型小鼠的慢性酒精性肝損傷的癥狀明顯,模型較為成功。菌處理組方面,高劑量處理組和菌滅活組均有比較好的緩解酒精性肝損傷功能。高劑量組和滅活菌組的肝體比相比模型組有顯著性的下降,血清指標也接近對照組水平。且高劑量組和滅活菌組的肝臟指標中的還原型谷胱氨肽和甘油三酯水平也趨于正常。

乳酸菌在腸道健康中扮演著重要角色,它對胃腸道的耐受性是其發揮生理功能的基本前提。發酵粘液乳桿菌WHH2438不僅具有良好的緩解慢性酒精性肝損傷的功效,并且具有良好的耐酸耐膽鹽特性,更有效地進入腸道發揮其益生功效。同時其菌體滅活后依舊有相應功能,有更豐富的產品形式和應用范圍。

4 結論

該研究從新疆奶疙瘩樣品中分離、篩選、鑒定乳酸菌,并以商業菌株LGG為對照菌株,進行一系列體外功效評價,之后建立慢性酒精性肝損傷小鼠模型,通過血液、肝臟、肝體比等指標的檢測,驗證菌株緩解酒精性肝損傷的功效,并對優選菌株的耐受性和黏附性、生長曲線進行研究。研究發現,從新疆奶疙瘩樣品中分離鑒定出的發酵粘液乳桿菌WHH2438具有優良的抗氧化能力,在酒精破壞腸屏障方面,也有很好的緩解效果。通過進行體內動物劑量效價實驗,發現WHH2438高劑量組和滅活組能降低小鼠血清中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶酶活,降低酒精對肝臟的氧化損傷,具有良好的緩解慢性酒精性肝損傷的功效。對WHH2438進一步研究發現,其具有優良的耐酸、耐膽鹽、高黏附性等特性,可順利進入和定植于腸道,發揮其益生功能。