阿奇霉素片在ｂｅａｇｌｅ犬體內的藥代動力學研究

韓　平

【摘要】目的 研究阿奇霉素片在beagle犬體內的藥代動力學。方法 10只beagle犬單次口服500mg/kg，服藥后0～216 h間隔內定時采集血樣，應用高效液相色譜-串聯質譜儀聯用測試樣品濃度，梯形面積法計算藥代動力學參數。結果 主要的藥代動力學參數：Ke為(0.013±0.005)h^-1，t1/2為(65.6+36.57) h， tmax為(3.80±4.80) h, Cmax為(455.2±222.8) ug·L^-1，CL/F為(0.49±0.16 ) L·(h·kg)^-1，AUC0-216和AUC– 分別為(9296.9±2285.9) mg·h·L^-1和 (11242.5±3751.9) mg·h L^-1。結論 該方法靈敏度高、快速、簡便、無雜質干擾,適合于阿奇霉素濃度檢測以及生物等效性研究。

【關鍵詞】阿奇霉素片；高效液相色譜-串聯質譜；藥代動力學

Study on the Pharmacokinetics of AzithromycinTablet inBeagleDogs HAN Ping .（Department ofPharmacy ,Eerduosi Center Hospital, Eerduosi017000,China）

【Abstract】Objective To study the pharmacokinetics of azithromycin tablet in beagle dogs.Methods Ten beagle dogs were given a single oral dose of 500 mg/kg azithromycin tablet. The serum concentrations of azithromycin were determined by LC-MS/MS. The pharmacoki-netic parameters were calculated by DAS program.Results The main pharmacokinetic parameters of azithromycin for orally administered tablet were as follows: Ke is (0.013+0.005) -1 h，t1/2為is (65.6+36.57)h, tmax is (3.80+4.80) h, Cmaxis (455.2+222.8) ug·L^-1, CL/F is (0.49+0.16 ) L·(h·kg) ^-1, AUC0-216and AUC– is(9296.9+2285.9) mg·h·L^-1and (11242.5+3751.9) mg·h L^-1.Conclusion This is a senstivquick methodthat fit to determine the serum concentrations of azithromycin.

【Key words】Azithromeycin tablet; LC-MS/MS; Pharmacokinetics

【中圖分類號】R969.1

【文獻標識碼】A

【文章編號】1814-8824(2009)-03-0006-03

阿奇霉素(azithromycin )是新一代大環內酯類抗生素，特點是耐胃酸，口服吸收好，體液、組織分布廣泛，半衰期長。臨床廣泛用于呼吸道、泌尿生殖系統及皮膚軟組織感染的治療，對革蘭陰性菌、厭氧菌及細胞內病原體等抗菌活性優于紅霉素和氟羅沙星。為此，本試驗對其藥代動力學進行研究，為臨床用藥提供參考。

1 藥品、試劑與儀器

藥品及試劑：阿奇霉素片，規格：每片250 mg，批號：030901，上?，F代浦東藥廠有限公司；阿奇霉素標準品（Azithromycin，純度>99%，中國藥品生物制品檢定所提供，批號：200202-200702）；甲醇及乙腈均為色譜純；磷酸二氫鈉、氯仿和正己烷均為分析純。

儀器：API-3000型三重四極桿串聯質譜儀，配有離子噴霧離子源以及Analyst 1.4.2數據處理系統，美國Applied Biosystem公司；Agilent 1200高效液相色譜輸液泵，自動進樣器，美國Agilent公司；色譜柱為Zorbax extend C18柱（2.1×150 mm I.D.，5μm粒徑），美國Agilent公司

2 實驗動物

Beagle犬，普通級，共25只，雌雄兼有，按體重隨機分組，動物月齡：6～7個月，動物體重：8.5～10 kg，動物來源：軍事醫學科學院實驗動物中心，實驗動物合格證號：SCXK-（軍）2002-001，動物房：實驗動物使用許可證號，SYXK-（軍）2002-001。

3 給藥方法及血樣采集

禁食12 h，口服給藥，具體方法如下：給藥日早晨空腹給藥1次，用一小塊饅頭將膠囊包住，將犬嘴扳開，用手將包有膠囊的饅頭送入犬后咽部，將犬嘴關閉，確認咽下后將嘴松開。服藥后4h再進食。分別于服藥前0及服藥后0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，24.0，48.0，96.0，144.0 h，采集前肢靜脈血6 mL，置肝素抗凝管中；轉速3 000 r·min^-1離心10 min，分離出血清；置-20℃冰箱保存，待測。

3.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax Extend-C18柱（2.1×150 mm，5μm）；流動相：甲醇(0.4%甲酸)：水(0.4%甲酸) = 9：1（v/v）；流速：0.3 ml·min^-1；柱溫：40℃；進樣量：20 μL。

3.2 質譜條件 離子源：離子噴霧離子化源；離子噴射電壓：1800 V；溫度：400℃；源內氣體1（GS1，N2）壓力：65 p.s.i；源內氣體2（GS2，N2）壓力：55 p.s.i；氣簾氣體（N2）壓力：15 p.s.i；正離子方式檢測；掃描方式：選擇離子反應監測（MRM）方式；用于定量分析的離子對為m/z749.7→ m/z 591.6(阿奇霉素)和m/z 515.4→m/z 276.0（替米沙坦，內標）。

4 方法學考察

4.1 標準曲線的制備阿奇霉素：取Beagle犬空白血漿50 μL，依次加入阿奇霉素標準系列溶液50 μL , 配制成相當于血漿濃度為10，25，50，300，100，200，400和800 μg·L^-1的血漿樣品，每點為5樣本，按“血漿樣品的分析方法”項下操作，取20 μL進行LC/MS/MS分析，記錄色譜圖；以待測物濃度為橫坐標，待測物與內標物的峰面積比值為縱坐標，用加權（W=1/χ2）最小二乘法進行回歸運算，得阿奇霉素標準曲線。y = 0. 0042 x + 0. 0546,相關系數r = 0. 9993, 線性范圍為3. 91 ～1 000 μg·L ^-1,最低定量限為3. 91μg·L^-1。

4.2 專屬性 在本色譜條件下測得色譜圖

A 空白血漿色譜圖

B 空白血漿中加入內標替米沙坦5ug·L^-1、阿奇霉素50 ug·L^-1的色譜圖

C 4號受試犬服用阿奇霉素4 h后的血漿樣品色譜圖

（1代表阿奇霉素；2代表替米沙坦）

4.3 精密度 本法測定犬血漿中阿奇霉素血藥濃度的日內、日間精密度均<10%，符合生物樣品分析測定的要求 。阿奇霉素低25(μg·L^-1)、中100(μg·L^-1)、高400(μg·L^-1)三個濃度的提取回收率(n=5)分別為98.48%、96.02 %和96.4 %。

4.4 藥-時曲線圖

4.5 藥代動力學參數 見表1。

5 討論

考慮阿奇霉素分子結構無強紫外吸收的基團和自身試驗條件，本研究建立了LC-MS/MS法測定犬血漿中阿奇霉素的濃度。與國內外其他測定方法相比具有以下特點：①與國內普遍采用的微生物測定干擾少。②與HPLC2UV 測定法相比其定量下限低可達到3.91 μg·L^-1，而HPLC2UV法［3］檢測的定量下限只有50μg·L^-1,無法滿足人體藥動學及生物等效性研究的要求。③與電化學檢測法相比，質譜檢測對試劑、試驗周邊環境的要求較低，電化學檢測器過于靈敏易受多種外界因素干擾。

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