胡安青
(江蘇省鎮江藥品檢驗所,江蘇 鎮江 212003)
血府逐瘀口服液[1]由桃仁、紅花、枳殼等11種中藥組方,功能活血化瘀、行氣止痛,柚皮苷為枳殼的主要有效成分。筆者采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定產品中柚皮苷含量,進一步提高了藥品質量標準,現報道如下。
AG135型電子天平(瑞士梅特勒);紫外分光光度計(日本島津);Waters2695型高效液相色譜儀,包括 Waters2696型 DAD,empowera工作站(美國Waters)。柚皮苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所,批號為110722-200309);乙腈為色譜純;水為純化水;血府逐瘀口服液(吉林敖東延邊藥業股份有限公司,批號分別為0810013,0809002,0804005)。
色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm);流動相:乙腈 - 水 (21 ∶81);流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;進樣量:10μL;檢測波長:283 nm。理論塔板數7054,色譜圖見圖1。
圖1 高效液相色譜圖
精密稱取柚皮苷對照品5.03 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成對照品貯備液(每1 mL含柚皮苷201.2μg),再精密量取貯備液2 mL,置20 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液(每1 mL含柚皮苷20.12μg)。取樣品5支,精密量取3 mL,置分液漏斗中,用水飽和正丁醇振搖提取5次,每次15 mL,合并正丁醇液,用水洗滌2次,正丁層蒸干,殘渣加甲醇使溶解,并轉移至50 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻過濾,用微孔濾膜(0.45μm)過濾,取續濾液,即得供試品溶液。按處方比例稱取除枳殼外的其他11味藥,同法制成陰性對照品溶液。
標準曲線繪制:分別精密量取柚皮苷對照品貯備液(201.2μg/mL)1,2,3,4,5 mL,置 20 mL 量瓶中,定容,搖勻,在上述色譜條件下進樣分析,以峰面積(Y)為縱坐標、質量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸,得回歸方程 Y=16.891 X-1.45,r=0.9999(n=5),質量濃度線性范圍為10.05~50.25μg/mL。
精密度試驗:取柚皮苷對照品溶液,重復進樣測定。結果峰面積的 RSD 為0.4% (n=5)。
重現性試驗:取樣品依法測定。結果平均含量為1.69 mg/支,RSD 為 0.6% (n=5)。
穩定性試驗:取同一供試品溶液室溫放置10 h,每隔一段時間進樣。結果峰面積平均值為1715,RSD為0.3%。
加樣回收試驗:取6份已知含量的樣品(批號為0810013)1.5 mL,精密加入柚皮苷對照品貯備液各4,5,6 mL,分別置50 mL量瓶中,照供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結果見表1。
表1 柚皮苷加樣回收試驗結果(n=6)
取供試品溶液和對照品溶液,各進樣10μL,讀取峰面積值,按外標法計算含量。結果批號為0810013,070516,070518的樣品中柚皮苷含量分別為1.69,1.70,1.67 mg/mL。
通過試驗得知柚皮苷在283 nm波長處有較大吸收,其他成分無干擾。曾嘗試甲醇 - 醋酸 -水(35 ∶4 ∶65)[2]、乙腈 -水(30 ∶70)為流動相,經比較,選用乙腈-水(21∶81)時峰形及柱效較好。該方法結果可靠、方法簡便,為血府逐瘀口服液的質量控制提供了依據。
[1]YBZ1172204,國家食品藥品監督管理局標準(試行)[S].
[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社,2005:180.