頂空毛細管氣相色譜法測定鹽酸地芬尼多原料藥中有機溶劑的殘留量

宋更申，曹鳳習，閆凱，姜建國(河北省藥品檢驗所，石家莊市050011)

鹽酸地芬尼多(Difenidol hydrochloride)是臨床上常用的抗暈止吐藥，用于治療高血壓、美尼爾氏綜合征等引起的眩暈癥，口服吸收迅速，療效確切。鹽酸地芬尼多在合成過程中，使用了乙醇、異丙醇、四氫呋喃等有機溶劑，這些溶劑會對人體健康和環境造成危害，控制其殘留量對保證藥品質量和用藥安全有重要意義。關于鹽酸地芬尼多殘留溶劑的研究，尚未見文獻報道。本文根據藥品注冊的國際技術要求·質量部分(ICH)[1]的指導原則和《中國藥典》2010年版[2]的相關規定，并參考有關文獻[3，4]，采用頂空氣相色譜法，以二甲亞砜為溶解介質，同時測定上述3種溶劑。結果表明，該方法操作簡便，精密度好，結果準確可靠。

1 儀器與試藥

6890型氣相色譜儀、7694E型頂空進樣器、B.02.01-SR1工作站(美國Agilent公司)；BP 211D型電子天平(德國Sartorius公司)。

鹽酸地芬尼多原料藥(江蘇四環生物股份有限公司，批號:071122、071215、071225，含量:99.8%、99.7%、99.9%)；乙醇、異丙醇、四氫呋喃均為色譜純(天津光復精細化工廠)；試驗用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-624毛細管柱(60 m×530 μm×3 μm)，柱溫:85℃；氫火焰離子化檢測器(FID)，檢測器溫度:250℃；不分流進樣，進樣口溫度:150℃；載氣:氮氣，流速:5.0 mL·min－1；頂空進樣，平衡溫度:90℃，平衡時間:30 min，頂空瓶加壓時間:0.2 min，進樣時間:1 min，定量環體積:1 mL，定量環溫度:100℃，傳輸線溫度:110℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液:精密稱取乙醇250 mg、異丙醇250 mg、四氫呋喃36 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液:精密量取對照品貯備液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液:精密稱取本品約0.25 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，精密加二甲亞砜5 mL，密封，振搖使溶解，即得。

2.3 系統適用性試驗

取“2.2”項下的對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，記錄色譜，見圖1。

圖1結果表明，3種溶劑分離良好，理論板數均不低于5000。

2.4 線性關系

精密稱取四氫呋喃36 mg，置于100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取10、10、5、5、5、2 mL，分別置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻；再精密稱取乙醇250 mg、異丙醇250 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取10、5、5、5、2、0.2 mL，分別置于25、25、50、100、100、100 mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，以峰面積(A)為縱坐標，濃度(C)為橫坐標，進行線性回歸，結果見表1。

表1 3種溶劑線性關系考察結果(n＝6)Tab 1Linear ranges of 3 kinds of organic solvents(n＝6)

2.5 精密度試驗

精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，計算乙醇、異丙醇、四氫呋喃的RSD分別為1.0%、0.8%、1.3%。

2.6 重復性試驗

精密稱取本品(批號:071122)約0.5 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，共6份，精密加二甲亞砜5 mL，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，檢出本品中乙醇含量平均為0.02%，RSD＝1.1%；異丙醇為0.02%，RSD＝0.7%；四氫呋喃未檢出。

2.7 中間精密度試驗

取批號為071122樣品，由3名不同試驗者在不同時間、以不同儀器、采用不同色譜柱測定本品的有機溶劑殘留量，結果檢出本品中乙醇殘留量平均為0.02%，RSD＝1.3%；異丙醇殘留量平均為0.02%，RSD＝1.7%；四氫呋喃均未檢出。表明本方法中間精密度良好。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知各溶劑殘留量的樣品(批號:071122)0.5 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，共9份，分別精密加入對照品貯備液0.40、0.50、0.60 mL，各3份，再分別用二甲亞砜稀釋至5.0 mL，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，以外標法計算。結果，乙醇、異丙醇、四氫呋喃的平均回收率分別為99.1%、99.6%、98.5%，RSD分別為0.7%、0.8%、1.3%。

2.9 穩定性試驗

取“2.2.2”項下的對照品溶液，于室溫下放置0、1、2、4、8、12 h，分別按“2.1”項下的色譜條件進行分析。結果，乙醇、異丙醇、四氫呋喃在12 h內測定的峰面積的RSD分別為0.6%、1.1%、1.2%，表明本溶液在12 h內穩定。

2.10 定量限試驗

用逐步稀釋法進行測定，以信噪比約為10時計算乙醇、異丙醇、四氫呋喃的定量限。結果定量限分別為5.05、3.05、0.91 μg·mL－1。

2.11 樣品中有機溶劑的殘留量測定

取乙醇、異丙醇、四氫呋喃和3批樣品，按“2.2”項下的方法制備對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，以外標法計算3種有機溶劑的殘留量，結果3批樣品中乙醇的殘留量均為0.02%，異丙醇的殘留量均為0.02%，四氫呋喃均未檢出。

3 討論

試驗中先后選擇了HP-1、HP-INNOWax、DB-624等不同極性的色譜柱，結果以供試品在DB-624上的峰形和分離度最佳。

鹽酸地芬尼多在甲醇中易溶，在乙醇和二甲亞砜中溶解，在水、N，N-二甲基甲酰胺和三氯甲烷中略溶，由于選用頂空進樣方式，所以不宜用甲醇作溶解介質，故選擇二甲亞砜作溶解介質。

試驗考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時間對樣品測定的影響。結果表明，樣品在70、80、90℃的頂空溫度下均穩定，為了提高檢測靈敏度，本試驗選擇90℃作為頂空平衡溫度；由于本品在30、40 min的頂空平衡時間內得到的峰面積基本一致，因此本試驗選擇30 min作為頂空平衡時間。

本方法3種有機溶劑的定量限為0.91～5.05 μg·mL－1，靈敏度完全可以滿足鹽酸地芬尼多中有機溶劑殘留量測定的需要。

ICH[1]和《中國藥典》2010年版[2]都規定，四氫呋喃屬第2類殘留溶劑，在藥品中應限制使用，限度均為0.072%；乙醇、異丙醇屬第3類低毒性溶劑，限度均為0.5%。本試驗測得3批樣品中3種有機溶劑的殘留量均符合ICH和《中國藥典》2010年版的規定。

[1]周海鈞主譯.藥品注冊的國際技術要求·質量部分[M].北京:人民衛生出版社，2001:343.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(二部)[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:63.

[3]宋更申，姜建國，張西如.頂空毛細管氣相色譜法測定羅庫溴銨中的殘留溶劑[J].中國現代應用藥學，2009，26(10):849.

[4]李珂珂，譚豐蘋.毛細管氣相色譜法測定拉米夫定中有機溶劑的殘留量[J].中國藥房，2007，18(19):1502.