黃連生物堿的提取純化及降脂作用

侯 宏，李學剛＊，李 平，王小華，馮 平

（1.西南大學藥學院，重慶 400715；2.重慶北碚區中醫院，重慶 400700）

黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensisFranch，三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta wall.的干燥根莖。其活性成分為原小檗堿型生物堿，主要包括鹽酸小檗堿、黃連堿、巴馬汀及總生物堿。研究［1-5］表明，黃連有抗菌、抗病毒、抗心律失常、抗腫瘤、降血糖及降血脂等作用。黃連提取純化方法很多，有水提、醇提以及柱層析純化等［6-8］，本實驗采用乙醇結合酸溶堿沉的方法提取生物堿并再進一步純化，在降血脂方面研究提供依據。

1 材料

1.1 藥材和試劑 黃連采自重慶石柱黃連GAP基地；柱層析硅膠D101大孔樹脂、乙醇、硫酸、Ca（OH）2（成都科隆試劑公司）；脂脈康膠囊（12?！?板/盒，批號20090502，國藥準字ZI4020737，山西安特生物制藥股份有限公司）；膽固醇（安徽天啟化工科技有限公司，純度≥92.8％）。豬油、魯花花生油（超市購買），總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測定試劑盒（南京建成生物研究所）。

1.2 主要儀器 RE-52AA旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-D（Ⅲ）循環水式真空泵（鞏義市英峪予華儀器廠）；TG16-W微量高速離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；EOSBRAVO全自動生化分析儀。

1.3 動物 鵪鶉，雌雄各半，2個月齡，體質量（130±20）g，購于重慶萬盛鵪鶉養殖場。

2 方法和結果

2.1 提取和分離 黃連干燥根莖（10kg）粉粹，95％乙醇浸泡24h過濾，倒出濾液，反復3次，合并濾液，減壓濃縮得浸膏2 000g，通過預實驗，浸膏采用5倍量的0.5％H2SO4溶解，放置2h，再加Ca（OH）2調pH值9～10，然后其將一部分加入裝有D101大孔樹脂的柱中，先用蒸餾水洗至無色，再用95％乙醇以2BV/h洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得總生物堿的量；另一部分用氯仿、正丁醇萃取，其中取正丁醇萃取物上硅膠柱色譜，并利用重結晶手段，得到化合物小檗堿、黃連堿及巴馬汀。

2.2 黃連生物堿對血清TC、TG、LDL-C及HDL-C的影響 選用健康鵪鶉70只用普通飼料適應性喂養1周，隨機分為7組：正常對照組，模型組，脂脈康組（460mg/kg，按人用量通過體表面積折算）及小檗堿、黃連堿、巴馬汀、總生物堿組（劑量100mg/kg，根據前期血脂實驗研究所得）。除正常組喂普通飼料外，其余各組喂高脂飼料（79％普通飼料+14％豬油+6％花生油+1％膽固醇）［9-10］。于實驗開始后第4周禁食12h，頸靜脈取血1mL，分離血清，利用全自動生化分析儀測定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C。結果用均數±標準差（±s）表示，并進行t檢驗，見表1。

結果顯示，用高脂飼料連續喂養鵪鶉4周后血清TC、LDL-C、HDL-C與正常組相比明顯升高，表明造模成功；與模型組相比，所有藥物組均可以降低鵪鶉血脂指標，其中，小檗堿、黃連堿、巴馬汀可明顯降低血清TC，差異有統計學意義，但總生物堿降TC效果不明顯，均可明顯降TG，差異有統計學意義，在一定程度上藥物組均可提高HDL-C，但差異無統計學意義。黃連堿降血脂指標最明顯。

表1 黃連生物堿對鵪鶉TC、TG、LDL-C、HDL-C的影響（±s，n=10） mmol/L

表1 黃連生物堿對鵪鶉TC、TG、LDL-C、HDL-C的影響（±s，n=10） mmol/L

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組 別 TC TG LDL-C HDL-C正 常 組 6.29±0.81 2.37±0.97 1.83±0.90 2.54±0.57模 型 組 34.88±1.01##5.65±1.92# 28.36±1.16# 5.32±0.33##脂 脈 康 組 33.97±1.27 2.76±0.48 21.23±1.74△ 6.30±0.27小 檗 堿 組 22.46±2.72△ 2.74±0.45 17.72±2.87△△ 5.62±0.41黃 連 堿 組 23.54±3.75△ 2.56±0.22 16.36±3.76△△ 5.87±0.46巴 馬 汀 組 25.55±4.75△ 2.96±0.52 20.78±3.13△ 5.77±1.05總生物堿組 31.79±7.39 3.27±0.81 25.48±2.34 6.01±0.46

3 小結

高血壓、高血脂等心腦血管疾病的增加已成為當今社會影響人類健康的一大難題，因此，具有降壓、降脂功效的藥物研發一直受到人們的重視。本實驗建立鵪鶉高血脂模型，結果表明小檗堿、黃連堿、巴馬汀均能顯著降低TC、TG及LDL-C，有望開發為降血脂類藥物。

［1］崔學軍.黃連及其有效成分的藥理研究進展［J］.中國藥師，2006，9（5）：469-470.

［2］丁秀麗.黃連素在糖尿病治療中的應用［J］.長春中醫藥大學學報，2009，25（6）：899.

［3］王靜，張國成.黃連素治療老年Ⅱ型糖尿病神經病變的臨床研究［J］.長春中醫藥大學學報，2009，25（2）：193-194.

［4］左彥方，郭毅，姜昕，等.小檗堿對兔動脈粥樣硬化及血脂的影響［J］.中國腦血管病雜志，2006，3（5）：204-207.

［5］魏敬，蔣建東，吳錦丹，等.鹽酸小檗堿的調脂作用的研究［J］.中華糖尿病雜志，2005，13（1）：49-51.

［6］張樂佳，夏新華.黃連提取工藝的研究［J］.中成藥，2001，23（6）：398-400.

［7］武佳，譚桂蓮，楊紅.黃連中鹽酸小檗堿提取工藝探究［J］.時珍國醫國藥，2007，18（2）：437-438.

［8］胡冬華，袁緒富.黃連素的提取及分子活性部位研究［J］.長春中醫藥大學學報，2006，22（1）：67.

［9］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛生出版社，1993：519-520.

［10］侯永坤，潘雨利，冷艷華.脂溶膠囊對高脂大鼠降脂作用的實驗研究［J］.吉林中醫藥，2008，28（11）：843-845.