全國5個不同地區乳香醋炙前后乙酸辛酯的含量變化

張會敏，王 萌，郭長強

（山東省中醫藥研究院，山東 濟南 250014）

乳香為橄欖科植物乳香樹Boswellia carteriiBirdw.及同屬植物Boswellia.bhaw-dijianaBirdw.樹皮滲出的樹脂［1］，主產于利比亞、蘇丹、土耳其、索馬里、埃塞俄比亞等地。乳香為常用樹脂類中藥，具有活血化瘀、消腫止痛、祛腐生肌之功效。臨床用藥多為醋炙品，而醋炙品的藥理及化學含量測定的報道極少［2］。由于乳香為進口中藥，來源較廣，市售乳香的質量評價頗為重要。實驗研究［3-4］表明乳香中的主要有效成分為揮發油類，而乙酸辛酯占乳香揮發油的40％左右。為了明確醋炙法是否能夠影響乳香中乙酸辛酯的含量，比較醋炙前后乳香中乙酸辛酯的含量變化，本文對購自全國5個不同地區的乳香生品進行統一醋炙，采用文獻［5］改進方法：茴香醛內標法，利用氣相色譜測定法對不同地區的市售乳香醋炙前后的乙酸辛酯含量進行測定比較。

1 儀器、試劑與材料

HP-6890氣相色譜儀；FID檢測器；毛細管色譜柱HP INNOWAX（30m×0.53mm×1.0μm）；AG245電子天平（METTLER TOLEDO）；乙酸辛酯（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號：111671-200401）；茴香醛（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號：110838-200504）：無水乙醇（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20070103）。

乳香：購自全國5個不同地區，外觀性狀及規格見表1。

表1 5個不同地區乳香的外觀性狀及質量評價

醋炙乳香：由本實驗室醋炙制得。炮制程度的判定依據《山東省炮制規范》（1990版）［6］、《中國藥典》（2010版）［1］。取生乳香300g，于140℃時不停翻炒9min，至表面微溶時，噴淋5％米醋，即15mL，再翻炒1min，至醋液被吸盡，呈油亮光澤時，迅速出鍋，放涼即得。

2 方法與結果

2.1 氣相色譜條件 進樣口溫度：230℃；柱程序升溫：130℃（3min）-30℃/min-200℃（4min）；檢測器溫度：250℃；載氣流速（N2）：6.3mL/min；進樣量：1.0μL。

2.2 溶液制備 乙酸辛酯對照品溶液的制備：精密稱取乙酸辛酯87.0mg，置10.0mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，混勻，作為對照品儲備液。精密量取5.75mL對照品儲備液，置10.0mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，混勻，作為對照品應用液（5.0mg/mL）。

內標溶液的制備：精密稱取茴香醛113.0mg，置10.0mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，混勻，作為內標對照品儲備液。精密量取8.85mL儲備液，置10.0mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，混勻，作為內標應用液（10.0mg/mL）。

2.3 供試品溶液制備 取乳香及醋炙乳香樣品50g，稱定重量，置500mL燒瓶中，加水300mL，沸石數粒，連接揮發油提取器與回流冷凝管。加熱至沸，保持微沸5h，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，將水緩緩放出，放置1h以上，再讀取揮發油量，并將揮發油保存至裝有適量無水硫酸鈉的容量瓶中，備用。取50μL已提取的揮發油樣品，置10.0mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，混勻，精密量取100.0μL溶液，置1.0mL量瓶中，精密加入50μL內標溶液，加入無水乙醇至刻度，混勻，進樣1.0μL分析，內標法計算含量。

2.4 標準曲線 精密量取乙酸辛酯對照品溶液（5.0mg/mL）0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0mL，置10.0mL量瓶中，分別加內標溶液（10.0mg/mL）500μL，加無水乙醇至刻度，作為標準曲線溶液，分別進樣分析，以乙酸辛酯的濃度為橫坐標，以A標/A內為縱坐標，得標準曲線如下：Y=4.049 1X+1.033 5，r=0.999 0。

2.5 方法精密度試驗 日內精密度：取標準曲線中0.5mg/mL乙酸辛酯對照品溶液，進樣1.0μL，連續測定6次，以乙酸辛酯與內標的峰面積比值計算精密度測得RSD為1.09％。日間精密度：取標準曲線中0.5mg/mL乙酸辛酯對照品溶液，進樣1.0μL，每日測定1次，連續測定5d，以乙酸辛酯與內標的峰面積比值計算精密度測得RSD為1.02％。

2.6 重復性實驗 按上述條件對同一乳香揮發油樣品（北京華邈乳香）進行含量測定，每個樣品平行進樣2次，連續進行6次測定，RSD為1.68％。

2.7 加樣回收率實驗 取用于重復性實驗的乳香樣品適量，精確加入乙酸辛酯對照品及內標溶液適量，按上述條件進行6次加樣回收實驗，內標法計算含量，計算得平均回收率為105.3％，RSD為1.09％。結果見表2。

2.8 樣品含量測定 按上述方法測定5個市售乳香樣品及其炮制品的揮發油中的乙酸辛酯絕對含量，結果見圖1，圖2，表3，表4。

表2 加樣回收率結果

圖1 生品乳香中乙酸辛酯的GC色譜圖

圖2 醋炙乳香中乙酸辛酯的GC色譜圖

表3 5個不同產地生乳香樣品中乙酸辛酯的絕對含量（n=3）

表4 5個不同產地醋炙乳香樣品中乙酸辛酯的絕對含量（n=3）

3 結語

3.1 內標法是一種間接或相對的校準方法 在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內標物質以校準和消除出于操作條件的波動而對分析結果產生的影響，以提高分析結果的準確度。內標法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術。使用內標法時，內標物應滿足以下幾個條件：1）內標物與被分析物質的物理化學性質要相似（如：沸點、極性、化學結構等）。2）內標物應能完全溶解于被測樣品（或溶劑）中，且不與被測樣品起化學反應。3）內標物的出峰位置應該與被分析物質的出峰位置相近，且又不共溢出，目的是為了避免GC的不穩定性所造成的靈敏度的差異。4）選擇合適的內標物加入量，使得內標物和被分析物質二者峰面積的匹配性大于75％，以免由于它們處在不同響應值區域而導致的靈敏度偏差。茴香醛恰好滿足以上幾點，是筆者優選出的最適內標物，故本文采用茴香醛內標法對不同地區的市售乳香醋炙前后的乙酸辛酯含量進行測定。

3.2 本文所測乙酸辛酯的含量為其在藥材中的絕對含量，而非在揮發油中的含量 氣相測定結果顯示，5個不同地區的生乳香樣品中乙酸辛酯的絕對含量均在1.02～1.22（mL/g，％）；其醋炙品的含量均在1.00～1.20（mL/g，％）?？梢?，生乳香與醋炙乳香中乙酸辛酯的含量相差甚微，沒有顯著差異。原因可能有二：一是市售乳香生品可能都來自同一國家，醋炙品為統一炮制；二是醋炙過程溫度不高、時間短，僅有少量的乳香珠表面沸點低的揮發油受熱有所揮發。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：化學工業出版社，2010：207.

［2］崔銳，周金云.乳香化學和藥理的研究進展［J］.中國藥學雜志，2003，38（6）：704.

［3］劉青，于宗淵.氣相色譜法測定乳香揮發油中乙酸辛酯的含量［J］.時珍國醫國藥，2007，18（6）：1416.

［4］盧兗偉，王琦，李勝群，等.氣質聯用法分析炮制對乳香揮發油的影響［J］.中成藥，1996，18（11）：20.

［5］宋光林，郭峰，曾廣銘，等.乳香中乙酸辛酯含量的測定［J］.貴州科學，2008，26（1）：57.

［6］山東省中藥炮制規范編委會.山東省炮制規范［S］.濟南：山東科學技術出版社，1990：246.