利膽止痛片藥效學研究

張立群， 閆俊嶺△， 王 真， 張信岳， 李 欽， 陳愛君

(1.云南白藥研究院， 云南 昆明 650032； 2.浙江省醫學科學院， 浙江 杭州 310013)

利膽止痛片是由柴胡、赤芍、茵陳、延胡索等藥材組成的復方制劑，該方具有清熱利膽，理氣止痛之功效，用于肝膽濕熱所致的脅痛，黃疸(如急、慢性肝炎，膽囊炎)等癥的治療。臨床應用證明，其治療急慢性肝炎、膽囊炎等療效顯著，為驗證其臨床療效，本文從解熱、利膽、保肝和鎮痛等多方面進行了藥效學研究。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 利膽止痛片(浸膏粉)，由云南白藥集團麗江藥業有限公司生產提供，批號：00708020。阿司匹林(腸溶片)，上海九褔藥業有限公司產品，批號：20040810；消炎利膽片，廣州白云山和記黃埔中藥有限公司產品，批號：E8A004。戊巴比妥鈉，中國醫藥(集團)上?；瘜W試劑公司進口分裝，批號：20021216；巴豆油合劑，大腸桿菌(標準株)，由中國藥品生物制品檢定所提供；四氯化碳，江蘇永華精細化學品有限公司產品，批號：080530；α-萘異硫氰酸酯(ANIT)，北京通縣育才精細化工廠生產，批號：081019。

1.2 動物 ICR小鼠，SD大鼠，均由浙江省實驗動物中心提供，合格證：SCXK(浙)2003-0001號，DHA豚鼠，雌雄兼用，購自上海申旺實驗動物養殖場，動物許可證號：SCXK(滬)2002-0011。新西蘭家兔，雌雄兼用，由浙江中醫學院實驗動物中心提供，合格證：SYHK(浙)2003-0003號。

1.3 儀器 ZRY-2智能熱原儀，天津大學精密儀器廠生產；AEL-200電子天平，日本SHIMADZU公司生產；721可見分光光度計，上海分析儀器廠生產；AT-738PLUS半自動生化儀，上海安泰分析儀器有限公司生產；MOTIC生物圖像采集分析系統，廈門麥奧迪克儀器公司生產。

1.4 利膽止痛片對化膿性膽道感染家兔(膽囊炎)的作用 健康新西蘭家兔50只，體重1.6～2.2 kg，雌雄兼用，隨機選取8只作為正常對照組，其余42只家兔參照文獻方法造模[1]：靜脈注射3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液麻醉，在上腹部做 5 cm～6 cm切口，暴露膽囊，抽出膽汁。向膽囊內注入0.3 mL生理鹽水菌液，結扎逐層縫合傷口；正常對照組也按上述方法行假手術，但抽出膽汁后不注射菌液，其他同手術組操作。術后第3天從造模家兔中篩選40只隨機分為模型對照組、陽性對照組、利膽止痛片1.4、0.7、0.35 g(浸膏)/kg劑量組，分別灌胃給予相應藥物，每天1次，連續30天。正常對照組以及模型對照組給予等體積蒸餾水，每周檢測體溫，給藥2周、4周時耳靜脈取血、抗凝處理后進行血液學檢查，末次給藥后次日，取空腹血分離血清，測定總膽紅素、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、膽固醇、甘油三酯。

1.5 利膽止痛片對大鼠膽汁流量以及總膽紅素的影響 取SD大鼠，體重200～250 g，隨機分為正常對照組、陽性對照組、利膽止痛片1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg三劑量組，每組8只，實驗前禁食不禁水12 h。試驗按文獻所示方法[2]進行：每鼠用烏拉坦麻醉后，仰臥位固定；沿腹正中線切口2cm，在十二指腸降部腸系膜中找到膽管，插入塑料管，見有淡黃色膽汁流出后，結扎固定，收集膽汁。然后各組大鼠由十二指腸分別按劑量給藥，給藥后每30 min收集膽汁1次，共4次，記錄各時段累計膽汁流量，并測定膽汁中的總膽紅素濃度。

1.6 利膽止痛片對四氯化碳所致大鼠慢性肝損傷的影響 雄性SD大鼠，體重120～150 g，隨機留取10只作為正常對照，其余大鼠按文獻所示方法造模[3]，造模8周后采血測定血清中ALT、AST，并根據ALT結合AST結果分組并開始給藥，設利膽止痛片1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg三劑量組、陽性對照組以及模型對照組，分別灌胃給予相應藥物，每天1次，連續4周，給藥體積均為10 mL/kg，末次給藥后次日股動脈取血，測定血清中生化指標；取部分肝臟，然后制備10%組織勻漿液，測定SOD活性及MDA含量。

1.7 利膽止痛片對化學致痛和光熱致痛的影響

1.7.1 利膽止痛片對醋酸所致小鼠扭體反應的影響 雄性ICR小鼠60只，體重18～22 g，隨機分為對照組、阿司匹林0.2 g/kg陽性對照組、消炎利膽片12片/kg陽性對照組、利膽止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg三劑量組，每組10只，分別灌胃給藥，給藥體積均為20 mL/kg，對照組給予等容積蒸餾水；給藥后30 min，腹腔注射0.6%醋酸生理鹽水0.2 mL/只，觀察記錄小鼠扭體反應潛伏期以及15 min內的扭體次數。

1.7.2 利膽止痛片對光熱致痛法所致小鼠痛閾值的影響 選用在TF光熱測痛儀上預測甩尾痛閾值在3 s～10 s范圍的ICR雌性小鼠，體重(18～22) g，隨機分為對照組、阿司匹林0.2 g/kg陽性對照組、消炎利膽片12片/kg陽性對照組、利膽止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg三劑量組，每組11只，分別灌胃給藥，給藥體積均為20 mL/kg，對照組給予等容積蒸餾水，在TF光熱測痛儀上測定給藥后30、60、120 min各組小鼠的甩尾痛閾值[4]。

2 結果

2.1 利膽止痛片對化膿性膽道感染(膽囊炎)家兔的影響

表1 利膽止痛片對化膿性膽道感染家兔體溫的影響( ±s ,n=8)

表1 利膽止痛片對化膿性膽道感染家兔體溫的影響( ±s ,n=8)

組別劑量(g/kg)體溫(℃)造模前造模后給藥1周給藥2周給藥3周給藥4周正常對照--39 9±0 639 5±0 139 5±0 439 4±0 239 7±0 439 7±0 4模型對照--39 7±0 541 2±1 0#40 6±0 7#40 5±0 4#40 2±0 5#39 9±0 8消炎利膽片6片/kg39 8±0 241 0±0 6#39 9±0 5#?39 8±0 3#?39 7±0 5?39 7±0 4利膽止痛片1 439 6±0 341 1±0 2#39 7±0 4?39 4±0 4?39 3±0 3?39 6±0 2利膽止痛片0 739 8±0 241 3±0 8#39 7±0 2?39 5±0 2?39 2±0 7?39 7±0 1利膽止痛片0 3539 7±0 641 1±0 6#39 6±0 4?39 4±0 3?39 8±0 7?40 0±0 6

注：與正常對照組比較，#P<0.05；與模型對照組比較，*P<0.05

從表1結果可見，造模后家兔體溫明顯升高，但其后呈逐漸下降趨勢，至給藥4周后基本恢復正常，利膽止痛片用藥后1～3周家兔體溫較模型對照組明顯降低(P<0.05)，提示對化膿性膽道感染所致家兔體溫升高有一定的解熱作用。

表2 利膽止痛片對化膿性膽道感染家兔血液生化的影響( ±s ,n=8)

表2 利膽止痛片對化膿性膽道感染家兔血液生化的影響( ±s ,n=8)

組別劑量(g/kg)AST(u/L)ALT(u/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)TBIL(umol/L)正常對照--17 3±4 319 8±4 61 92±0 571 13±0 595 86±1 55模型對照--37 3±16 4#41 8±13 9#1 14±0 37#1 13±0 428 19±3 85#消炎利膽片6片/kg29 7±12 931 8±8 21 33±0 521 71±1 056 48±2 11利膽止痛片1 431 4±15 532 6±8 81 71±0 46?0 96±0 504 67±0 29?利膽止痛片0 732 4±14 533 2±8 01 84±0 38?1 48±0 585 45±0 76?利膽止痛片0 3530 1±16 537 4±8 81 76±0 37?1 89±1 028 40±3 36

注：與正常對照組比較，#P<0.05；與模型對照組比較，*P<0.05

從表2結果可見，造模后家兔血清ALT、AST、TB明顯升高，TC明顯降低，利膽止痛片各劑量組用藥4周后上述指標均有不同程度地改善，與模型對照組相比，利膽止痛片各劑量組TC明顯升高，中、高劑量組TB明顯降低，ALT、AST也有降低地趨勢，提示對該模型的肝損傷有一定的改善作用。

2.2 利膽止痛片對大鼠膽汁流量以及總膽紅素的影響 見表3、表4。

表3 利膽止痛片對大鼠膽汁流量的影響( ±s ,n=8)

表3 利膽止痛片對大鼠膽汁流量的影響( ±s ,n=8)

組別劑量(g/kg)膽汁流量(mL)給藥前藥后30min藥后60min藥后90min藥后120min對照--0 43±0 190 38±0 160 77±0 281 14±0 411 51±0 51消炎利膽片8片/kg0 46±0 150 44±0 150 89±0 251 28±0 341 69±0 42利膽止痛片1 00 49±0 120 43±0 180 99±0 22?1 48±0 33?1 91±0 41?利膽止痛片0 50 42±0 150 43±0 150 82±0 261 28±0 301 74±0 43利膽止痛片0 250 41±0 180 38±0 130 79±0 271 22±0 411 63±0 53

注：與對照組比較，*P<0.05

表4 利膽止痛片對大鼠膽汁中總膽紅素的影響( ±s )

表4 利膽止痛片對大鼠膽汁中總膽紅素的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)總膽紅素(TBI)/(umol/L)給藥前藥后30min藥后60min藥后90min藥后120min對照--6 42±1 296 41±1 877 38±2 978 80±2 999 82±2 10消炎利膽片8片/kg5 28±1 505 49±1 916 76±2 507 71±2 609 25±2 83利膽止痛片1 05 73±1 196 03±1 257 22±1 867 64±2 158 53±3 28利膽止痛片0 55 21±1 156 11±1 877 01±2 358 49±3 268 82±3 79利膽止痛片0 255 73±1 306 68±1 898 18±2 459 38±2 649 65±3 23

從表3結果可見，利膽止痛片各劑量組給藥后各時段膽汁流量有不同程度地增加，呈現明顯的劑量依賴關系，其中高劑量組給藥后60～90 min累計膽汁流量明顯高于對照組(P<0.05)，提示利膽止痛片有一定的利膽作用；另從表4結果可見，利膽止痛片各劑量組給藥后各時段膽汁中總膽紅素無明顯改變，表明利膽止痛片對膽汁成分可能無明顯影響(見表7)。

2.3 利膽止痛片對四氯化碳所致慢性肝損傷大鼠的作用 四氯化碳造模8周后，大鼠體重明顯低于正常對照組(P<0.05)，表明造模因素對其體重增長產生明顯影響，利膽止痛片各劑量組用藥后2周、4周體重仍明顯低于正常對照組，但其增長速度較模型組有所加快，到給藥4周時已明顯高于模型對照組，表明利膽止痛片對四氯化碳肝損傷大鼠的體重恢復正常增長有一定的促進作用(見表5)。

表5 利膽止痛片對四氯化碳致慢性肝損傷大鼠體重的影響( ±s )

表5 利膽止痛片對四氯化碳致慢性肝損傷大鼠體重的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)體重(g)造模前造模8周給藥2周給藥4周正常對照--136±10548±43581±47624±49模型對照--134±11472±51#469±57#473±62#消炎利膽片8片/kg136±11503±28#529±30#?555±34#?利膽止痛片1 0132±11491±28#504±31#522±34#?利膽止痛片0 5136±8490±55#511±59#524±65#?利膽止痛片0 25135±8509±54#521±44#?542±38#?

注：正常對照組n=10，其余n=15。正常對照組比較#P<0.05，與模型對照組比較，*P<0.05。

表6 利膽止痛片對四氯化碳致慢性肝損傷大鼠血清生化的影響( ±s )

表6 利膽止痛片對四氯化碳致慢性肝損傷大鼠血清生化的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)AST(u/L)ALT(u/L)給藥前給藥4周后給藥前給藥4周后正常對照--191±35136±2718±522±8模型對照-- 287±52# 403±50# 92±41# 202±70#消炎利膽片8片/kg 302±72# 352±88#? 85±64# 123±55#?利膽止痛片1 0 286±84# 326±78#? 89±44# 126±43#?利膽止痛片0 5 271±58# 337±73#? 76±54# 177±61#利膽止痛片0 25 304±54# 345±53#? 73±39# 197±57#

注：除正常對照組n=10，其余n=15。與正常對照組比較，#P<0.05，與模型對照組比較，*P<0.05

表7 利膽止痛片對四氯化碳致慢性肝損傷大鼠肝系數及SOD和MDA的影響( ±s )

表7 利膽止痛片對四氯化碳致慢性肝損傷大鼠肝系數及SOD和MDA的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)肝系數(g/100g體重)肝臟MDA(nmol/mg)肝臟SOD(u/mL)正常對照--2 53±0 202 99±0 51118 7±12 0模型對照--5 08±0 57#4 92±2 15#85 0±22 8#消炎利膽片8片/kg5 41±0 39#3 68±1 2871 3±21 0利膽止痛片1 05 23±0 61#3 10±1 87?103 6±28 4?利膽止痛片0 55 23±0 58#3 05±0 93?91 1±20 6利膽止痛片0 255 03±0 87#3 62±2 3797 6±31 1

注：除正常對照組n=10，其余n=15。與正常對照組比較，#P<0.05；與模型對照組比較，*P<0.05

從表7結果可見，四氯化碳造模后，肝系數增大1倍以上，利膽止痛片各劑量組用藥4周雖然對肝系數無明顯影響，但中、高劑量組明顯降低肝組織MDA水平，高劑量組并能明顯提高肝組織SOD水平，提示利膽止痛片對肝脂質過氧化也有一定的保護作用。

2.4 利膽止痛片對化學致痛和光熱致痛的影響

2.4.1 利膽止痛片對醋酸所致小鼠扭體反應的作用 從表8結果可見，利膽止痛片各劑量組扭體反應潛伏期略有延長，但與對照組均無統計學差異(P>0.05)，扭體反應次數較對照組有不同程度減少，其中高劑量組與對照組存在統計學差異(P<0.05)，提示利膽止痛片較高劑量有一定的鎮痛作用；此外，陽性藥物消炎利膽片也能明顯降低扭體反應次數，但對扭體反應潛伏期無明顯延長作用(見表8)。

表8 利膽止痛片對醋酸所致小鼠扭體反應的影響( ±s )

表8 利膽止痛片對醋酸所致小鼠扭體反應的影響( ±s )

組別劑量(g/kg)動物數(只)扭體反應潛伏期(sec )扭體次數(次/15min)對照-10192±2444±12消炎利膽片12片/kg10194±3134±5?阿司匹林0 210 238±43?23±7?利膽止痛片1 510211±45 34±10?利膽止痛片0 7510207±5138±15利膽止痛片0 37510200±3535±16

注：與對照組比較，*P<0.05

2.4.2 利膽止痛片對光熱致痛法所致小鼠痛閾值的作用 從表9結果可見，利膽止痛片中劑量組給藥后各時段小鼠甩尾痛域值較給藥前或對照組都有明顯提高(P<0.05)，最大提高約40%，高劑量組給藥后各時段小鼠甩尾痛域值較給藥前也有明顯提高(P<0.05)，提示利膽止痛片對光熱致痛小鼠有鎮痛作用。陽性對照藥消炎利膽片鎮痛作用較弱(見表9)。

表9 利膽止痛片對小鼠光熱致痛法痛閾值的影響( ±s ,n=11)

表9 利膽止痛片對小鼠光熱致痛法痛閾值的影響( ±s ,n=11)

組別劑量(g/kg)不同時間痛閾值(sec)藥前藥后30min藥后60min藥后120min對照--6 9±2 27 6±1 97 1±1 17 4±2 2消炎利膽片12片/kg7 5±2 87 7±2 38 1±2 79 1±2 5阿司匹林0 27 0±2 08 4±3 38 2±2 39 4±3 2利膽止痛片1 56 0±2 08 2±1 4#8 7±2 1#8 9±1 3#利膽止痛片0 757 2±1 69 7±2 2#?8 7±1 6#?10 1±3 5#?利膽止痛片0 3756 9±3 07 5±2 97 0±2 67 3±1 8

注：與給藥前比較,#P<0.05；與對照組比較,*P<0.05

3 結論

利膽止痛片1.4、0.7、0.35 g(浸膏)/kg劑量灌胃給藥可明顯抑制化膿性膽道感染家兔的體溫以及白細胞的升高，改善血清中ALT、AST、TB、TC等生化指標，并能明顯減輕膽囊病變程度；1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg劑量能不同程度地增加在體插管法大鼠膽汁流量，并對四氯化碳肝損傷大鼠的體重增長、血清生化ALT、AST指標、肝脂質過氧化SOD、MDA指標產生有益的影響，提示利膽止痛片有一定的保肝利膽作用；此外，利膽止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg劑量能使醋酸所致小鼠扭體反應潛伏期略有延長，扭體次數明顯減少，中、高劑量并能提高給藥后30～120 min時段光熱測痛法小鼠甩尾痛閾值，提示具有鎮痛作用。

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