抑亢丸中芍藥苷的質量控制

李丹 韓晶

摘 要：目的：采用薄層色譜法和高效液相色譜法對抑亢丸中芍藥苷進行質量控制。薄層色譜法對芍藥苷進行了定性分析，結果清晰明顯，陰性對照無干擾；高效液相色譜法對芍藥苷進行了定量分析，結果芍藥苷在0.0687～0.6870?g范圍內線性關系良好，相關系數r=0.9999，平均回收率（n=6）為99.97%，RSD為1.09%，證明此測定方法專屬性強，重現性好，簡便，快速?？捎糜谝挚和柚猩炙庈盏馁|量控制。

關鍵詞：抑亢丸 芍藥苷 薄層色譜法 高效液相色譜法 質量控制

中圖分類號：R927 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2012）12（a）-0-02

抑亢丸由羚羊角、白芍、天竺黃、桑椹、延胡索（醋炙）、青皮（醋炙）、香附、玄參、石決明、黃精、黃藥子、天冬、女貞子、地黃等十四味藥材組成，具有育陰潛陽，豁痰散結，降逆和中等功效，用于癭?。谞钕贆C能亢進）引起的突眼，多汗心煩，心悸怔忡，口渴，多食，肌體消瘦，四肢震顫等[1]。抑亢丸方中主要成分白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lacti flora Pall.的干燥根[2]。本實驗采用薄層色譜法和高效液相色譜法對白芍中芍藥苷進行了質量控制，方法易于操作，結果準確，重現性良好。

1 薄層色譜法

1.1 儀器設備與試劑試藥

烘箱；硅膠G薄層板；芍藥苷對照品（由中國食品藥品檢定研究院提供）批號：110736-200526；抑亢丸樣品由生產企業提供；水為純化水，其他試劑均為分析純。

1.2 實驗方法與實驗結果

取本品水蜜丸15 g，研細；或取小蜜丸15 g或大蜜丸2丸，剪碎，加水10 mL使溶散，加水飽和正丁醇50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液用正丁醇飽和的水40 mL洗滌，正丁醇層蒸干，殘渣加少量甲醇溶解，拌入少許中性氧化鋁，水浴上拌勻干燥，裝入一預先填好的中性氧化鋁小柱（100～200目，3 g，內徑1～1.5 cm）上，用乙酸乙酯-甲醇（1∶1）混合溶液40 mL洗滌，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg溶液，作為對照品溶液。再取除白芍外的全部樣品成分，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述兩種溶液各10 ?1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點。陰性對照無干擾。

2 高效液相色譜法

2.1 儀器設備與試劑試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀；芍藥苷對照品（由中國食品藥品檢定研究院提供）批號：110736-200526；抑亢丸樣品由生產企業提供；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2.2 實驗方法與實驗結果

2.2.1 色譜條件

色譜柱：kromasil C18（4.6×250 mm，5 ?m）；流動相：乙腈-水（13：87）；流速：0.7 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測波長：230 nm；理論板數按芍藥苷峰計算應不低于6000。

2.2.2 溶液制備

2.2.2.1 對照品溶液。精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 ?g的溶液，即得。

2.2.2.2 供試品溶液。取本品小蜜丸或重量差異項下的大蜜丸，剪碎，取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，使溶散，取出，放至室溫，稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 專屬性試驗

按照處方制備不含白芍的抑亢丸陰性對照樣品，按“2.2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，依法進行測定。結果，陰性樣品色譜在與芍藥苷峰相應的保留時間附近無干擾峰檢出，表明抑亢丸中其他藥味及輔料等對本方法測定無干擾。

2.2.4 線性關系考察

精密稱取芍藥苷對照品適量，加稀乙醇制成每1 mL含68.70 ?g的溶液，分別精密吸取1、2、4、6、8、10 ?l進樣測定，以對照品進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，回歸方程為y=1522250.28x+127.26（r=0.9999），表明芍藥苷在0.0687-0.6870 ?g范圍內與峰面積值成良好線性關系。

2.2.5 精密度試驗

取同一批樣品，依“2.2.2.2”項下方法制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 ?l，注入液相色譜儀，重復6次，測定其色譜峰面積值，結果樣品含量的RSD為0.04%，結果表明本實驗所用色譜儀精密性較良好。

2.2.6 穩定性試驗

取同一批樣品，依法“2.2.2.2”項下方法制成供試品溶液。按“2.2.1”項下色譜條件，分別在0，2，4，8，12、24 h進樣，測定峰面積，其芍藥苷的RSD為0.20%，結果表明24 h內供試品溶液中芍藥苷的含量基本穩定。

2.2.7 重復性試驗

取取同一批樣品，按“2.2.2.2”項下方法平行制備6份，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，計算其含量，結果芍藥苷的平均含量為0.4762 mg/g，RSD為1.54%，結果表明本法具良好的重復性。

2.2.8 回收率試驗

精密稱取含量已知的供試品（批號：061202）約1.5 g，共6份，分別精密加入對照品溶液（0.01619 mg/mL）50 mL，按“2.2.2.2”項下方法制備供試品溶液，依該法測定，計算其回收率，結果見表1。

如表1所示，測得芍藥苷的平均回收率為99.97%，RSD=1.09%。結果表明本法回收率較好，準確度較高。

3 討論

3.1 測定波長的選擇

取芍藥苷對照品的稀乙醇溶液，經UV-2550紫外分光光度計在200～300 nm范圍內進行掃描，結果芍藥苷在231 nm波長處有最大吸收，并參照中國藥典2010年版一部白芍項下，選擇230 nm作為測定波長。

3.2 柱的選擇及柱效的考察

實驗中考察了Gracesmart HP C18（4.6×250 mm，5 ?m）色譜柱、VP-ODS C18（4.6×150 mm，5 ?m）色譜柱及kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）色譜柱，結果kromasil C18的柱子分離度較好，理論塔板數大于10000，所以使用kromasil C18柱進行本次實驗，暫定柱效應不低于6000。

3.3 《中國藥典》2010年版一部白芍的含量最低限度為1.6%

大蜜丸制造處方中白芍的投料量為18.8 g，制成量為55丸，按100%提取率計，每丸含量應不得少于5.47 mg，本品制法中白芍為粉末入藥，考慮到生產工藝的波動，暫時按80%提取率計算，本品大蜜丸每丸含白芍以芍藥苷計不得少于4.40 mg；小蜜丸制造處方中白芍的投料量為18.8 g，制成量為2500丸，每丸重約0.15 g，即制成量約為375 g，按100%提取率計，每克含量應不得少于0.80 mg，本品制法中白芍為粉末入藥，考慮到生產工藝的波動，暫時按80%提取率計算，本品小蜜丸每克含白芍以芍藥苷計不得少于0.64 mg；濃縮水蜜丸制造處方中白芍的投料量為18.8 g，制成量為1500丸，每25丸重5 g，即制成量為300 g，按100%提取率計，每克含量應不得少于1.00 mg，本品制法中白芍為粉末入藥，考慮到生產工藝的波動，暫時按70%提取率計算，本品濃縮水蜜丸每克含白芍以芍藥苷計不得少于0.70 mg。

參考文獻

[1] 中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第三冊

[2] 中國藥典2010年版一部.