何春榮 沈嘉華
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民藥膠囊中甘草酸含量測定研究
何春榮1沈嘉華2
(1 云南楚雄彝族自治州中醫院,楚雄 675000;2 楚雄州食品藥品檢驗所,楚雄 675000)
通過高效液相色譜法測定民藥膠囊中甘草酸的含量,摸索質量標準中的含量測定項,為建立民藥膠囊的質量標準草案提供科學依據。用高效液相色譜法測定。確定為民藥膠囊含量測定限度,規定為本品每粒含甘草以甘草酸計,不得少于1.0mg。高效液相法對民藥膠囊處方中甘草的含量進行分析,認為該方法穩定性及重現性較好,可以作為民藥膠囊質量控制的可靠方法。
自制制劑;民藥膠囊;質量標準;高效液相色譜法;含量測定
民藥膠囊為我院彝族藥制劑,處方中藥物組成為羊耳菊、小兒腹痛草、甘草、土木香,是醫院胃腸道科的??朴盟?,在醫院臨床使用二十多年,功能理氣止痛,養胃和中,臨床用于急、慢性胃炎及十二指腸潰瘍,療效確切,質量穩定,為更好發展民族藥特色制劑,進一步提高藥品質量標準,筆者用高效液相色譜法對該制劑進行了研究,通過對制劑處方中甘草(以甘草酸計)含量的分析研究,認為用高效液相法測定處方中甘草的含量,方法可靠,可作為該制劑的質量標準擬定的依據。
1.1 儀器及試劑 Angilent-1100液相色譜儀,依利特C18(4.6×250mm)色譜柱,Angilent -1100系列四元泵,VWD可變波長檢測器,自動進樣器。紫外光譜測定用島津2550型雙光束紫外分光光度儀。甘草酸銨對照品:中國藥品生物制品檢定所提供,編號110731-200306,供含量測定用。所用溶劑均為分析純,流動相配制用色譜純溶劑。
1.2 色譜條件及檢測波長的選擇 參照中國藥典2005年版一部中“甘草”項下的含量測定方法。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸(27 : 73 : 2)為流動相;檢測波長為250nm。理論板數按甘草酸銨峰計算應不低于3500。
以流動相為溶劑配制的對照品溶液,測定其紫外吸收光譜,最大吸收波長為250nm,故以此作為檢測波長。見圖1。
圖1 甘草酸銨對照品紫外吸收光譜圖
在此條件下對甘草酸銨對照品溶液、供試品溶液進行測定,結果均較為理想,見圖2、3;同法制備缺甘草的空白樣品測定結果為陰性,說明此方法有一定的專屬性,見圖4。
圖2 甘草酸銨對照品高效液相色譜圖
圖3 民藥膠囊供試品高效液相色譜圖
圖4 缺甘草空白樣品高效液相色譜圖
1.3 對照品溶液的制備 精密稱取P2O5減壓干燥24h的甘草酸銨對照品20.41mg,置20ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻,得對照品溶液A(每1ml中含甘草酸銨1.0205mg),精密量取A 1ml置10ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,得對照品溶液B(每1ml中含甘草酸銨0.10205mg),精密量取A 3ml置50ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,得對照品溶液C(每1ml中含甘草酸銨0.06123mg),即得。
1.4 供試品溶液的制備方法選擇 取本品內容物2g,精密稱定,分別精密加入甲醇、流動相50ml,稱定重量,水浴上回流、超聲處理不同時間,放冷,用相應溶劑補足減失的重量,濾過,取續濾液,即得。結果見表1。試驗結果表明以甲醇為溶劑,回流1小時即可使測定結果穩定[1]。
表1 制備方法選擇結果
2.1 線性關系考察 精密吸取對照品溶液A(1.0205 mg/ml) 0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20μl;對照品溶液C(0.06123mg/ml) 0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20μl進行色譜測定,按上述條件測定峰面積,結果見表2,以峰面積積分值對進樣濃度進行回歸處理,甘草酸銨在0.06123~20.41μg范圍內呈現良好線性關系(圖5)?;貧w方程為Y = 667.98827X + 8.40119,r = 0.99999,理論板數均超過7000。
表2 線性關系考察結果
圖5 甘草酸銨對照品線性關系圖
2.2 精密度試驗 取同一甘草酸銨對照品溶液(0.10205mg/ml),按上述色譜條件,連續測定5次,峰面積積分值分別為700.7、699.4、700.9、698.6、702.6,平均值為700.4,RSD=0.22 %。
2.3 穩定性試驗 分別取對照品溶液B和供試品溶液按上述色譜條件測定5~7次,每次間隔2~4h,結果見表3,表明對照品溶液在12h、供試品溶液在10h內穩定。
2.4 重現性試驗 取同一批號的樣品,按含量測定方法重復進行9次試驗,結果見表4,證明此方法重現性良好。
表3 穩定性試驗結果
2.5 回收率試驗 精密取對照品溶液A(1.0205mg/ml)1.0ml、1.5、2.0ml(各雙樣),蒸干,加入重現性試驗的同一批號樣品0.5g,精密稱定,精密加入甲醇25ml,稱定重量,水浴上回流1h,放冷,用甲醇補足減失的重量,濾過,取續濾液按含量測定方法測定,計算回收率,結果見表5。
表4 重現性試驗結果
表5 加樣回收試驗結果
注:平均回收率為96.69%,RSD=1.77%
2.6 樣品的測定 分別取民藥膠囊十個批次樣品按上述方法進行測定,結果見表6。
表6 樣品含量測定結果
以上10批樣品的平均含量為1.374mg/粒,相當于甘草酸1.346mg/粒,通過以上樣品的測定可以看出該法穩定性及重現性較好,故可確定為民藥膠囊含量測定限度,規定為本品每粒含甘草以甘草酸計,不得少于1.0mg。
民藥膠囊為我院的特色??朴盟?,臨床用于慢性胃炎、十二指腸球部潰瘍的治療,屬于中醫“腹痛”、“胃脘痛”等范疇,其治療作用平和,能迅速改善癥狀,療效確切。本文用高效液相法對民藥膠囊處方中甘草的含量進行分析,認為該方法穩定性及重現性較好,可以作為民藥膠囊質量控制的可靠方法。
[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部.北京:化學工業出版社,2005:附錄114.
(本文校對:蘇玲 收稿日期:2012-02-05)
10.3969/j.issn.1672-2779.2012.06.102
1672-2779(2012)-06-0156-03